CÉLULAS DE MEMORIA EFECTORA INMEDIATA

					CÉLULAS DE MEMORIA EFECTORA INMEDIATA CD8+ CCR7+ ESPECÍFICAS DE VIRUS DEFINIDAS POR LA HLA Y EL LIGANDO CCL19

REALIZADO POR: Alicia Diaz Marra Virginia Franco Hidalgo Sara García Fama Ainhoa Gervas Marin

INTRODUCCIÓN

Las células T muestran heterogeneidad funcional y fenotípica. Estimulación de Ag péptidicos % células T CD8+ asociadas al MHC
OBTENCIÓN

detectables por citocinas

Demostracion
efectoras.

de Hipótesis de células memoria centrales y memoria

Identificación de CCR7 mediante experimentos con células Ag –específicas
T CD8+ , usando el ligando fluorescente CCL19.

Análisis de las MHC I de las células T EBV-específicas y CMV-específicas
observando mayor porcentaje de CCR7+ en EBV-específicas.

HIPÓTESIS DE CÉLULAS MEMORIA CENTRALES Y MEMORIA EFECTORA
 Las células T memoria muestran heterogeneidad fenotípica y funcional.  Receptor CCR7 distingue las células T en 2 subgrupos con distintas funciones en la respuesta inmune secundaria:
Actúan en nódulos linfoides Expresión de CCR7 y CD62L

► Células T de memoria central:
(TCM ) 3

Proliferativas
No citotóxicas Actúan en tejidos no linfoides

► Células T de memoria efectora: (TEM)

Carecen de expresión CCR7 Citotóxicas

ESQUEMA CONSTRUCCIÓN DEL PLASMIDO
SECUENCIA N de I-restrictase
INSERCIÓN

SECUENCIA BamHI-restrictase CCL19 3P

CCL19 5P PLASMIDO PJA1

PET-CCL19/BSP41
SINTESIS PROTEINA CCL19

GENERACIÓN DEL CCL19
 No fue posible la aplicación del mAb CCR7 humano debido a su inviabilidad  Creación del CCL19 como marcaje para la caracterización fenotípica de ag específicos de células T CD8+ EL MARCAJE CON CCL19 REVELÓ:  Nivel moderado de NK con marca de citoquinas observadas en las cercanías de linfocitos B.  Linfocitos T citotóxicos y cooperadores con un nivel alto de citoquinas.  Los linfocitos T citotóxicos se pueden dividir en 2 subgrupos:  intermedios  altos  El CCL19 se une al CCR7 de una manera específica.

CARACTERIZACIÓN FENOTÍCA CÉLULAS T CD3+ CD8+
CÉLULAS T Ag- ESPECÍFICAS marcadas por CÉLULAS T Ag- ESPECÍFICAS CÉLULAS T NOVATAS marcadas por

CD11a o CD11a Ab CD95
identifican

CD62L CD11a Ab CD45RA Ab CD95
identifican

CCR7 int

CCR7 high

CCR7 int

CCR7 high denominadas

Bright

Dull

CD45RA -

CD45RA+

Conclusión:  Poblaciones de memoria: CCR7int

Dull

Bright

 Poblaciones células T novatas: CCR7high

EXPRESIÓN DEL CCR7 EN CÉLULAS AG-ESPECÍFICAS
 Marcaje con MHC I y CCL19  Ag-----virus:CMV,EBV,Flu.  Los Ag se unen específicamente a las MHC I  Observación del porcentaje de las células CCR7+

 Expresión variable del CCR7 para los diferentes virus:

 Flu : mayor porcentaje de CCR7+  CMV : menor porcentaje de CCR7+

SECRECIÓN DE CITOCINAS POR CÉLULAS AG-ESPECÍFICAS T CD8 CCR7+
 OBJETIVO: ver si % de CCR7- en células Ag específicas se corresponde con el % de células efectoras de citocinas (IFN-γ y TNF-α)

CÉLULAS T CD8 + ANTES DE ESTIMULACIÓN
Relación directa entre el porcentaje de células T CD8+CCR7- y la frecuencia de células capaces de producir IFN y TNF. CÉLULAS T CD8+ ESTIMULADAS     RESULTADOS: Las frecuencias de células productoras de IFN-γ y TNF-α es más alta en comparación con el % de células T CD8 Ag- específicas del CCR7-. CONCLUSIÓN: Las células CCR7- y CCR7+ expresan rápidamente los efectores de citocinas. RESULTADOS: Tanto las células CCR7- como las CCR7+ expresan IFN-γ y TNF-α con la misma frecuencia CONCLUSIÓN: La falta de inclinación en la producción de efectores de citocinas entre CCR7- /CCR7+ indica que el fenotipo de superficie previamente atribuido a TCM es capaz de funciones efectoras inmediatas.

EXPRESIÓN DE PERFORINAS
CELULAS T CD8 CCR7+ CCR7 int: Expresión a nivel intermedio

CCR7 brigh: No expresan perfoinas

CCR7 high: Expresión a bajo nivel

CELULAS T CD8 CCR7Expresión de perforinas a nivel alto

GRAN+ PEREXPRESIÓN CONJUNTA CON GRANZIMA B

No se observa

GRAN-PER+

1/2 Observaciones

DISCUSIÓN
 Existen estudios que rechazan parte de la hipótesis de células memoria centrales y memoria efectora.  Identificación de los subgrupos celulares en base a : Localización anatómica: (no relaciona función con fenotipo) CCR7+ (TCM) en tejidos linfoides secundarios. CCR7- ( TEM) en tejidos no linfoides. Fenotipo células superficiales: SANGRE PERIFÉRICA CCR7+ y CCR7- definidos por HLA. Marcaje con CCL19 que revela distintos subgrupos :  CCR7 int revelando INF γ TNF α perforinas

en < medida que CCR7-

 CCR7 -

DISCUSIÓN II
 La capacidad heterogénea de poblaciones de células T CD8+ Agespecíficas en humanos para producir de forma rápida IFN-γ no está correlacionada con el fenotipo CCR7.


Fenómenos biológicos que pueden reflejar la heterogeneidad funcional :
 Cuando el Ag de herpesvirus es presentado de una forma continua y a un alto nivel puede inducir una forma de tolerancia o impotencia.
 La heterogeneidad en la producción de citoquinas sea debida a la existencia de subpoblaciones con diferente susceptibilidad a la apoptosis.  Las células además de ser heterogéneas en la producción de diferentes tipos de citoquinas, también lo son en la forma de producirlas en términos generales.


				
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