CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO Hay tres tipos de Fases Estacionarias by rockman16

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									CROMATOGRAFÍA
      DE
 INTERCAMBIO
    IÓNICO
Hay tres tipos de Fases Estacionarias (Resinas):



 I. Resinas de poliestireno
 entrecruzadas




II. Resinas basadas en
Carbohidratos- (Carbohidratos
Poliméricos, Agarosa, dextrano, celulosa)
  Especialmente usados en la
separación de
  biomoleculas.




 III. Soportes basados en la Sílice
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
Tipos Frecuentes de Resinas
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO




       Resina aniónica de distintos tamaños
Mecanismo

Los iones de las
sustancias de la mezcla
desplazan a los
contraiones de la
columna. A su vez, ellos
compiten con los iones
de la FM por los sitios
activos

     n(resina—A-H+) + Bn+             (resina—A-)nBn+ + nH+


   k=
      [H ] [B ]
            + n          n+

                                         k=
                                            [H ]    + n

      [H ] [B ]
                           re
            +
                re
                     n    n+
                                            [H ]    +
                                                        re
                                                             K

           Donde: K es la cte de distribución y k la de equilibrio
        La fuerza del enlace de la muestra depende de:
             – Magnitud de la carga
                 » Ley de Coulomb - F α q1q2/r2 3+ >2+ > 1+
             – Tamaño del ión hidratado (relacionado con la ecuación de Coulomb)

              -Efecto del Amortiguador (Salino)
       Los cationes/aniones de la fase móvil pueden desplazar a la
       muestra de la columna

Todas las sales NO son iguales
   –   Aniones: OH- < Cl- < NO3-
       < citrate3-
   –   Cationes: H+ < NH4+ < K+
       < Mg2+ < Ca2+
   –   Los polivalentes se sujetan
       mas fuertemente a la
       columna que los
       monovalentes
 CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

 Factores que afectan a la retención:
                         1
1. Fuerza Iónica      I = Σ(mi zi2 )
                         2
2. pH . Solo para intercambiadores, aniónicos o
catiónicos, débiles, ya que los fuertes están totalmente
disociados. Para aquellos se cumple:

            pH (bases) = pK a − 1.5
            pH (ácidos) = pK a + 1.5
3. Modificadores Orgánicos.
            La elución en gradiente se realiza:
 1. mediante cambios en la fuerza iónica
 2. mediante cambios en el pH
GRADIENTE: aumentando la concentración de la fase móvil los iones
compiten cada vez mas favorablemente con la muestra por los sitios
activos cargados de la fase estacionaria
Una vez terminada la separación es necesario regenerar la resina para
volverla a su estado original y poder utilizarla en una nueva separación
                         Supresión de iones
•   La gran cantidad de iones que salen de la columna hacía casi imposible
    distinguir la corriente transportada por la FM y cual por cada componente de la
    mezcla, en un detector adecuado como el conductimétrico.
•   Para evitarlo una se coloca una segunda columna, columna supresora, con una
    resina de signo opuesto (detrás de la aniónica una catiónica y al revés) con la
    que se suprimen los iones no deseados, de la FM.
                       Supresión de iones
  Ej.:a) En una separación de cationes, si se ha utilizado HCl como eluyente, a
  continuación se pone una columna supresora aniónica en forma hidroxido:

       Re sin a + OH − + H + + Cl − ⇔ Re sin a + Cl − + H 2O
Se eliminan los aniones del medio pero no afecta a los cationes de la muestra a
                                     analizar
b) En las separaciones de aniones suele utilizarse el bicarbonato sódico como
eluyente, y en este caso se utiliza como columna supresora una columna en forma
catiónica, donde se da:

        Re sin a − H + + Na + + HCO3− → Re sin a − Na + + H 2CO3

   El ácido carbónico se disocia poco y apenas contribuye al transporte de carga


                  Esto permite utilizar un detector conductimétrico.
Determinación de anticonvulsantes en el suero después de la extracción de la fase sólida.

Análisis de antibióticos de poliéter

Determinación de pesticidas.
Determinación de hemoglobina
Identificación de ácidos orgánicos en la fruta y en el jugo por la cromatografía de exclusión de ión.
Determinación de conservante de ácido sórbico y benzóico en el alimento por el HPLC

Separación en HPLC de 22 hidrocarbonos aromáticos policíclicos con detección a en dos longitudes de onda

Determinación de masa modelada (ésteres de ácido ftálico) por el HPLC y GC. HPLC de miniorificio de
anticonvulsante en el suero. .

Determinación de patulina en el jugo de manzana. El método requiere el análisis de patulina por el HPLC con
detección UV después de la preparación apropiada de la muestra
Análisis de imazalil que se usa como fungicida para frutas cítricas y análisis de impurezas de “gabexate mesilate”
proveniente de la Farmacopea de Japón

Análisis de cianuro, compuestos orgánicos y formaldeidos.
Inyección directa de plasma de sangre para determinación de drogas usando "Co-Sense para BA" (Part 1)
Inyección directa de plasma de sangre para determinación de drogas usando "Co-Sense para BA" (Part 2)
Determinación de cantidad de hidrocarbonos aromáticos policíclicos.
HPLC de aldeidos y cetonas en ambiente cerrado y abierto. Ejemplo de una aplicación de columnas semi-micro.

Aquí muestra separación por el método de derivación quiral.
Detección de derivación-fluorescencia post-columna para análisis para varios tipos de pesticidas agrícolas .

Determinación simultánea de ácido vanililmandélico (VMA), ácido homovanílico (HVA) y catecolaminas en orina.


Determinación de metabolitos de Triptofan en el suero umbilical.

								
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