p16INK4a Biomarcatore diagnostico e prognostico nella displasia della cervice
Gianfranco Mazzotti
Bologna, Ospedale Maggiore 26/05/2009
mtm laboratories Italia
Overview dell’azienda
• mtm laboratories AG
– Fondata nel 1999 come distaccamento del Centro Tedesco per la Ricerca sul Cancro (DKFZ) – Azienda certificata Iso per lo sviluppo e la produzione di test diagnostici in-vitro (IVD) per la rivelazione precoce e la diagnosi del cancro – Headquarter in Heidelberg, Germany, con filiali negli Stati Uniti, Parigi, Madrid e Milano
Westborough, MA Heidelberg
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Pathogenesi del CxCa
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Necessità…
è il mercato che ce lo chiede
• Aumento della Sensibilità e Specificità
– Nello Screening e nel Management delle lesioni – Accuratezza diagnostica
• Marcatore tumorale
– – – – Risposta cellulare Indipendente dal genotipo Indipendente dall‟età della paziente Oggettivo, indipendente dall‟osservatore
• Necessità di un bio-marcatore
– Si tratta di tecnologie più accurate di quelle attuali nell‟identificazione di pazienti con una lesione di alto grado già conclamata
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Marcatore ideale: CxCa Screening
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p16INK4a
Un marcatore della risposta cellulare
p16 – Un bio-marcatore promettente
INK4a
• p16INK4a, una proteina coinvolta nel controllo del ciclo cellulare
• L‟iper-espressione della p16INK4a può essere utilizzata come bio-marcatore per le lesioni pre-cancerose e cancerose della cervice
• Legame diretto tra l‟iper-espressione della p16INK4a ed il processo patogenetico della displasia cervicale • Permette di misurare l‟attività cancerogena del Human Papilloma Viruses (HPV) a livello cellulare
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Meccanismo molecolare
p16INK4a iper-espressione nelle cellule displastiche e tumorali
Infezione persistente da HPV
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Il bio-marcatore p16INK4a
• p16INK4a, una proteina cellulare coinvolta nel controllo del ciclo cellulare • Iper-espressione della p16INK4a può essere utilizzata come biomarcatore delle lesioni cervicali precancerose e cancerose • Legame diretto tra iper-erspressione della p16INK4a e processo patogenetico della displasia cervicale • Permette di misurare l‟attività cancerogena dello Human Papilloma Viruses (HPV) a livello cellulare
• Permette di indicare la PRESENZA di malattia e di misurare il rischio dello sviluppo della malattia nel tempo
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P16
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Risultati chiave dello studio
Il test CINtec® p16 Cytology utilizzato nel triage delle ASC-US e delle LSIL cytology fornisce un valore di sensibilità per l‟identificazione delle CIN2+/CIN3+ simile al test HPV I valori di specificità del CINtec® p16 Cytology sono significativamente maggiori del test HPV
I risultati possono portare a un tasso inferiore di donne riferite alla colposcopia che sarà più mirata, mantenendo la stessa sensibilità per l„individuazione della malattia
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Risultati dello studio – Revisione dei Citotecnici
CINtec Cytology Sens
ASC-US CIN2+ CIN3+
92.6%
hc2 HPV Sens
90.1%
Spec
63.2%
Spec
37.8%
92.6%
58.6%
88.9%
35.3%
LSIL
CIN2+ CIN3+
92.2%
37.3%
95.7%
18.5%
94.6%
32.2%
95.9%
15.9%
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Prodotti mtm
Prodotti CINtec®
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Bio-marcatore p16INK4a - Potenziali benefici
• Primo marcatore della risposta delle cellule cervicali alla trasformazione oncogenica dell‟HPV ad alto rischio • Indipendente dall‟età • Indipendente dal genotipo virale
• Permette di misurare la risposta oncogenica e non l‟infezione
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Kit CINtec® Histology
• IHC Kit sviluppato per la rivelazione dell‟iper-espressione della p16INK4a nelle biopsie cervicali
• Validato per l‟applicazione su sezioni in paraffina, fissate in formalina
• Interpretazione in parallelo con i vetrini colorati in H&E
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Kit CINtec® Histology
Immuno-reazione specifica fortemente diffusa della p16INK4a nelle lesioni cervicali displastiche
CIN 1
CIN 2
CIN 3
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p16INK4a IHC aumenta la riproducibilità della diagnosi delle lesioni cervicali
25x 25x
Diagnosi di consenso: nessuna lesione
400x 400x
Lesione di alto grado individuata con la p16INK4a IHC
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Kit CINtec® Histology
• Più di 50 pubblicazioni scientifiche dimostrano:
– Una sensibilità virtuale del 100% per le lesioni CIN3 (Cervical Intraepithelial Neoplasia 3) e una specificità molto elevata per i casi negativi – Aumento significativo della riproducibilità intra-osservatore e dell‟accuratezza diagnostica….
• Se utilizzata affiancata all‟ H&E dopo la diagnosi iniziale
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Kit CINtec® Histology
• Kit CINtec® Histology
– Dà un contributo affiancato all‟ H&E nell‟interpretazioni di casi difficili quali:
• Metaplasia atipica immatura • CIN • Casi ghiandolari • Casi di HR-HPV • Scarse atipie su margini di resezione chirurgica
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Kit CINtec® Cytology
• Per la rivelazione dell‟iper-espressione della p16INK4a in vetrini cervicali • Per applicazione su strisci convenzionali e in fase liquida • Kit pronto per l‟uso per 50 test
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Kit CINtec® Cytology
Applicazione dei criteri morfologici sulle cellule immuno-reattive
Displasia lieve
Displasia grave
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Kit CINtec® Cytology
• Migliora la capacità di identificare le cellule displastiche • Compatibile con gli strisci convenzionali e i preparati di citologia in fase liquida
Striscio convenzionale
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Citologia in fase liquida
Kit CINtec® Cytology
• Numerose pubblicazioni in riviste internazionali e studi di valutazione interna hanno dimostrato il valore aggiunto del test applicato al risultato iniziale del Pap Test:
– Sensibilità paragonabile al test di tipizzazione dell‟ HPV per l‟identificazione delle lesioni displastiche di alto grado – Elevata specificità nell‟individuazionie di pazienti negative – Potenziale utilizzo per il triage, sia di casi equivoci (ASCUS) che di lesioni di basso grado (LSIL)
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Kit CINtec® Cytology
• Kit CINtec® Cytology
– Insieme al Pap Test, rappresenta un utile supporto per l‟interpretazione di casi difficili: • • • • Citologia ripetuta Triage delle ASC-US Triage delle LSIL Atipie ghiandolari
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Quindi…
Alta Specificità
p16
Bassa Sensibilità
CPS & Colpo
Alta Sensibilità
HRHPV
Bassa Specificità
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ASCUS/LSIL – La sfida
Approssimativamente il 90% di tutte le Citologie lette sono “normali” ma
< 1% sono HSIL 3-5% sono ASC-US e
9% nascondono CIN2+
2-3 % sono LSIL e
15-20% nascondono CIN2+
ASC-US and LSIL nascondono un valore molto alto di lesioni ad alto grado Se CIN3 viene definito come precursore del cancro…
Queste interpretazioni citologiche non possono essere ignorate
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ASC-US/LSIL Gestione ed algoritmo
ASCUS o LSIL
Segue la gestione routinaria delle linee guida esistenti 31
Diretto a Colposcopia e Follow-up piu’ Intensivo
p16
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Utilizzare per…
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… conferire una maggiore accuratezza e oggettività nella nostra quotidiana routine clinica
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