EVALUATION DE LA QUALITE DES MILIEUX DE CULTURE ET

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EVALUATION DE LA QUALITE DES MILIEUX DE CULTURE ET Powered By Docstoc
					   CONTRÔLE DE LA
QUALITÉ DES MILIEUX ET
    DES RÉACTIFS

             F. OHMANI
   INSTITUT NATIONAL D’ HYGIENE
I - PRINCIPE :
  Le contrôle des milieux de culture et réactifs reçus
              ou préparés au laboratoire



  Travailler dans des règles de conformité strictes



              Des résultats meilleurs,
                    Plus fiables
                  Reproductibles
  II - METERIEL

 Pour réaliser ce contrôle, on aura besoin de matériel suivant :

Un réfrigérateur
Un autoclave
Une étuve
Un congélateur à - 20°C ou - 80°C
Des boites de pétri stériles
Des tubes à essai à vis stériles
Un pH mètre
Un bain marie de 45°C à 100°C
Milieux déshydratés à tester
Réactifs prêts à l’emploi à tester
Souches de référence.
III - CONTRÔLE DE LA QUALITÉ DU MATÉRIEL




     On ne peut effectuer des tests de bonne qualité
      si le matériel utilisé est de mauvaise qualité
                     ou mal entretenu

 contrôler et entretenir le matériel du laboratoire
IV- CONTROLE DE LA QUALITÉ DES MILIEUX
      DE CULTURE ET DES RÉACTIFS
1- A la réception :
              Livraison de nouveaux lots

         Le fournisseur est tenu de remettre

               Responsable de gestion,

    Une attestation de CQ du produit livré par le
                      fabriquant

   Cette attestation tiendra lieu de contrôle initial.
   V- CONTROLE DE LA QUALITÉ DES
MILIEUX DE CULTURE ET DES RÉACTIFS :

2- Au moment de l’emploi :
   Ouverture d’un nouveau lot de réactifs ou de
                    produits


    Réaliser un ensemble de tests de contrôle


   Noter les résultats sur la fiche d’évaluation


                 Classer la fiche
1- Milieux déshydratés :

Deux types de caractères doivent être contrôlés

1. Caractéristiques physico-chimiques


2. Caractères bactériologiques ou épreuves
   d’efficacité
a. Caractéristiques physico-chimiques
     L’aspect de la poudre : lisse ou granulée
     La dissolution de la poudre dans l’eau au
      bain-marie : rapide ou lente
     Le pH ≈ pH indiquée par le fabriquant
     Aspect du milieu préparé :
                  solide,
                  liquide
                  semi-liquide
     Couleur du milieu préparé.
 b. Caractères bactériologiques ou
        épreuves d’efficacité:
                 Juger la fiabilité

   Tester avec des souches de référence
à défaut avec des souches de laboratoire de
               réactivité connue

                    Tableau N°1


Noter les résultats sur la fiche d’évaluation des milieux
Tableau N°1:l’efficacité des milieux couramment employés



 Milieux      Durée       Micro-organismes de     Résultats
           d’incubation        contrôle           attendus


Gélose au 24h avec ou         S.pyogenes          Croissance
sang      sans CO2           ATCC 19615          + β hémolyse
                             S.pneumoniae         Croissance
                              ATCC 6035          + α hémolyse

                          Staphylocoque aureus   Croissance
                              ATCC 25923

                           E.coli ATCC 25922     Croissance
  Milieux          Durée     Micro-organismes Résultats attendus
                d’incubation    de contrôle
GC+ isovitalex 24h, CO2 (jarre Haemophilus.influenz   Croissance
               à bougie)       ae ATCC 10211




Muller Hinton   24h            E.coli ATCC 25922      Dimensions et zones
                               S.aureus ATCC 25923    acceptables selon le
                               P.aeruginosa ATCC      C.Q de
                               27853                  l’antibiogramme.


Bouillon        24h            S.pyogenes             Croissance
Trypticase-                    ATCC 19615
soja                           E.coli ATCC 25922      Croissance
Milieu à l’urée 24h            E. coli                Négatif
                               P. mirabilis           Positif (rose)
 Milieux           Durée     Micro-organismes     Résultats attendus
                d’incubation    de contrôle
Gélose CLED         24h             E.coli       Colonies de 1 à 2 mm de
  ou PBC                                              Φ lactose (+)
                                 P.mirabilis     Colonies de 2 à 3 mm de
                                                      Φ lactose (-)
                                 E.faecalis       Colonies < 1 mm de Φ
 Gélose SS          24h             E.coli       Colonies rouges
                               S.typhimurium     Colonies incolores à
                                                 centre noir
                                Y.enterolitica   Colonies incolores
                                  S.flexneri     Colonies incolores
Milieu TCBS         24h          Vibrio spp      Colonies jaunes
  Milieu            24h            S.aureus      Colonies jaunes
 Chapman                        S.epidermidis    Colonies roses
                                    E.coli       Pas de croissance
Bile-Esculine       24h          E.faecalis      Croissance et
    azide                                        noircissement
                                 S.pyogenes      Pas de croissance
    Milieux           Durée       Micro-organismes de    Résultats attendus
                   d’incubation        contrôle
Milieu simmons-        24h              E.coli           Pas de croissance
     citrate                        K.pneumoniae        Croissance, virage au
                                                                bleu
 Recherche de          24h              E.coli                Négatif
phénylalanine -                       P.mirabilis             Positif
  désaminase
 Milieu MRVP           24h              E.coli            Positif / négatif
                                    K.pneumoniae          Négatif / positif
Milieu Malonate        24h              E.coli                 négatif
                                    K.pneumoniae               positif
 Recherche des
décarboxylases :     24 à 48h       S.typhimurium             Positif
     - lysine :                        S.flexneri             Négatif
   - Ornithine :     24 à 48h       S.typhimurium             Positif
                                    K.pneumoniae              Négatif
    - Arginine :     24 à 48h       S.typhimurium             Positif
                                      P.mirabilis             Négatif
  2 - Réactifs prêts à l’emploi
   Conditionnement

Les réactifs sont présentés sous forme :
 Disques (étuits)
 Bandelettes
 Lyophilisé
 Poudre
 Liquide


    L’efficacité des réactifs couramment employés


                 Tableau N° 2:
Tableau N° 2: L’efficacité des réactifs couramment employés
     Réactifs                Espèces pouvant être testées
                       Réaction positive      Réaction négative   Milieux
                                                                  utilisés
      ONPG            E.coli ATCC 25922        S.typhi murium       TSA
Disques d’Optochine      S.pneumoniae              S.mitis          GS
                          ATCC6305
     Oxydase             P.aeruginosa             E.coli            TSA
                         ATCC27853              ATCC 25922
    Facteur V          H.parainfluenzae         H.influenzae        TSA
                                                ATCC 10211
   Facteur V + X         H.influenzae         H.parainfluenzae      TSA
                         ATCC10211
     Kit Gram           Staphylocoque          E.coli [Gram(-)]     PBC
                          [Gram(+)]
 Galerie Neisseria    Neisseria Gonnorhae        S.aureus          GC +
       NH                                       ATCC 25923        polyvitex
                      Espèces pouvant être testées
                                                           Milieux
  Réactifs       Réaction positive     Réaction négative   utilisés



 Pastorex         N.meningitidis B  Pas d’agglutination     GC +
méningitidis        ATCC 13090      avec tous les autres   polyvitex
                H.influenzae b ATCC       groupes.
                        10211
                S.pneumoniae ATCC
                        6306
               Strepto B ATCC 12386



Disque de β       H.influenzae β-        H.influenzae       GC +
 lactamase         lactamase (+)         ATCC 10211        polyvitex
                             Espèces pouvant être testées
                                                                   Milieux
     Réactifs          Réaction positive      Réaction négative    utilisés


     Glucose            N.gonnorhae         Branamella cataralis
                        ATCC 430069            ATCC 25240


     Lactose             N.lactamica                                GC +
                         ATCC 23971             N.gonnorhae        polyvitex
                                                ATCC 430069

     Maltose            N.meningitidis          N.gonnorhae
                         ATCC 13090             ATCC 430069

   Saccharose              N.sicca              N.gonnorhae          GS
                         ATCC 9913              ATCC 430069

Test de lyse par les    S.pneumoniae             S.pyogenes
   sels biliaires       ATCC 49619
               FICHE D’EVALUATION DE MILIEU DESHYDRATE
       Milieu :
       Marque:                    Lot :
       Date d’expiration :        Conditionnement :

                Analyses            Résultats        Résultats
                                    obtenus         Théoriques
- Caractères physico-chimiques
Aspect de la poudre
Dissolution
Aspect du milieu prêt
pH
Conditionnement
- Activité bactériologique
   Souches utilisées
   *

Résultat Final : Conforme         Non Conforme 
Contrôle effectué par :                    Le :
          FICHE D’EVALUATION DE GALERIE API



Identification de la galerie API :
Lot N° :
Date d’expiration :
       Analyses           Résultats obtenus   Résultats Théoriques
Aspect des substrats :
Tests bactériologiques:
   Souches utilisées

  *
  *
Résultat final :        Conforme       Non Conforme 
Contrôle effectué par :
Le :
   RESULTAT DU CONTRÔLE

La personne responsable de l’évaluation doit poser une étiquette
   pour chaque milieu et réactif contenant :

     la date d’ouverture

     la date du test d’évaluation

     La date limite de validité (DLV)

     La date limite d’utilisation (DLU)

     la lettre « C » pour les milieux conformes.

     Les lettres « NC »pour les milieux non conformes.
V –ARCHIVAGE

            Résultats



        Fiches d’évaluation



        Classeur approprié
VI –CONSERVATION:


1- Des milieux déshydratés et des colorants

   A la température ambiante

   Bien fermer les couvercles

   Eviter l’humidité atmosphérique

   Mettre dans un endroit sombre, frais et bien aéré.
VI –CONSERVATION:


 2- Des réactifs

     la température recommandée par le
          fabriquant : + 4°C ou - 20°C

  Eviter les congélations et décongélations
                successives.



       Aliquoter le réactif ou le sérum
   en portions suffisantes pour chaque test
  VII - ELIMINATION


Les milieux, réactifs ou colorants doivent être jetés
  lorsque :

 DLU dépassée


 DLV dépassée


 Apparition des signes de détérioration
(trouble, précipité, changement de couleur ou d’aspect).

				
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