Ethyl Acetate ??? ??? ??? ???? ??? ORAC Value by ND8f3G0

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									2008 농림기술개발사업 계속과제 공개발표




2008. 4. 23
식용국화
▶   학 명 : Chrysanthemum indicum L.

▶   식용가능여부 및 부위 : 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 식용가능`

▶   식 물 : 국화과의 다년초로 높이 60 ~ 90 cm. 줄기는 보통 검붉은 빛을 띠며,
          잎은 어긋맞게 나고 깃 모양으로 깊이 갈라짐
          10 ~ 11 월에 가지 끝에 향기로운 노란 꽃이 핀다.
          꽃은 약재, 향료 및 국화주를 만드는 데 쓰인다.



▶   기 원 (국내 자생감국)
    Chrysanthemum indicum L.            감국
           var. coreanum Lev.           황국(섬감국)
    Chrysanthemum nipponicum Matsumura 해변감국
    Chrysanthemum pacificum Nakai       갯국화(애기대국)
    Chrysanthemum lavandulifolium 기타 약 30여 종
개발 배경

 화장품 시장 Needs의 변화        풍푸한 원예 및 약용작물

  단순 미용개념의 화장품에서          국내에 풍부한 원예 및
 기능성화장품 신소재 개발요구 증대        약용작물을 이용한
                             천연추출물의
                         기능성 화장품원료 개발 유리




  아토피 피부질환의 확대            황토국화의 가능성

 1. 국내 아토피 환자의 급증        1. 면역보호작용 확인
 2. 다양한 원인에 따른 치료가 어려움   2. 원물 확보(25만평 재배지)
 3. 집중력장애, 불면증, 정서장애 등   3. 항스트레스 효과
   사회적 문제화
추진 방향

기존 기능성 아토피 화장품 원료                 천연 아토피치료물질
                                   (황토국화추출물)
 주성분                         주성분
 - Steroid제제 : 유아 간독성 유발     - 친환경 천연물 아토피 치료기능성
 - 미생물유래, 합성소재 : 발암성,          화장품
 - 피부자극                      - 자생 재배식물을 사용하므로써
 - 합성주원료 기피                    수입대체효과
 - 일본의 동백유 등 원료수입 의존         - 국내최초 아토피 기능성 목표


 부성분                         부성분
 - Benzoic acid 등 합성방부제 이용   - 천연화장품 신소재 개발
 - 천연방부제 선호                  -   천연방부제의 개발
 - 특히, 아토피 등 유, 소아 화장품에서의    -   농가소득 증대
   합성방부제 이용 기피               -   자원활용 기술증대
 - 자몽추출물 등 원료수입 의존           -   화장품 원료시장 경쟁력 확보
II. 2차년도연구내용
2차년도 계획 대비 연구 진행 현황
연구개발의                                                                                           달성도
             2차년도 연구개발의 계획 내용                              2차년도 수행내용                             (%)
 목표
                                      - 추출물의 specification 설정
표준 분석법연구    품질관리를 위한 시험법 연구           - 시험방법 확립                                                 100%
                                      - 기기시험법 설정

            생산적용 연구                   - 100kg(원물) Scale up 생산
 시험생산/
            실험실 표준 추출 공정법의 여러 조건        황토국화 오일(증류법), 황토국화 증류수, 황토국화 추추물 생산                     100%
 Scale up
            을 생산시설에 적용하여 조건 설정          생산 조건 설정 완료
                                      -   항산화 : EtoAC Fraction을 Sub fraction 하여 항산화 효과 및 성분확인
            항산화                       -   Passive cutaneous model
            Passive cutaneous model   -   혈중 histamin 농도 측정
피부 면역활성
            혈중 histamin 농도 측정         -   피부조직내 histamin 농도 측정                                  100%
 효능연구
            피부조직내 histamin 농도 측정      -   피부 조직내 면역세포 측정
            피부 조직내 면역세포 측정            -   보습력 측정(동물, 인체)-아토피와 보습은 밀접한 관계
                                      -   항균력(S.aureus, 염증유발균, 2차 오염에의한 염증유발 억제 효과)

            기존 화장품 부형제를 사용하여 화장품      - 크림, 로션, 토닉 제형 연구
제제 제형 연구                                                                                        100%
            제형 연구                     - 간이임상 : 수정개선된 화장품 처방을 이용한 간이 임상 실시
                                      - In vitro 세포 독성
            In vitro 세포 독성
피부독성 연구                               -피부 감작시험                                                  100%
            피부 감작시험
                                       안전성 확립
                                      황토국화를 이용한 피부 세정제 특허 출원 준비중
 특허출원       1차 특허 출원                                                                            95%
                                      황토국화를 이용한 아토피 피부 개선용 화장품 특허 준비중
                                      초임계 추출연구
 미진행 연구     초임계 추출 연구                 이산화탄소 초임계추출시 엽록소 추출이 함께 이루어져 후 분리공정이 필요
                                      하여 비중있는 연구 진행을 하지 않았음

   기타                                 코리아나 화장품 4개브랜드 22개 품목 리뉴얼 제품에 황토국화수 출시                    100%
유효 및 지표성분연구
▶시험시료 : 고창황토국화 꽃(GCCF)과 전초(GCCS)
▶ 추출용매 : 80% Ethanol

▶ 추출조건 : 60℃, 24hr

▶ Liquid-Liquid Separation process (괄호안의 수율은 GCCS)
Hexane층의 탈과립화 억제효과
비만세포의 탈과립화 억제 효과 (자가면역질환 예측 세포시험 모델)
시료 : Hexane 층의 Subfraction
방법 : RBL-2H3 세포주(Rat mast cell line)를 활성인자(Dinitrophenol-conjugated human serum
albumin, (DNP-HSA)-specific IgE)로 활성화 시킨 후 활성화된 세포에 안티젠(DNP-HSA)을 처리하고
황토국화 추출물 처리후 배양하여 ELISA reader를 이용하여 배지내로 분비된 β-hexosaminidase 양을
측정하여 억제됨을 관찰

              sample             5ug/mL           25ug/mL          125ug/mL



              G2-H7           7.7633±2.1945    15.5100±2.5275    50.9666±1.4007



              G2-H7A          0.8100±1.9022    14.3733±0.2203    44.9933±1.6216



              G2-H7B          3.4166±27616     15.1700±1.8658    53.1166±3.4225



              G2-H7C          6.3666±0.7225    15.6133±1.1788    53.7500±1.6891



              G2-H7D          2.7900±1.8757    10.0733±0.3338    41.2733±2.6438


                  β-hexosaminidase assay에서 inhibition이 50%가 넘으면 항알러지 효과
항산화 효과
항산화 효과
시료 : 황토국화 조건별 추출물
방법 : DPPH Assay, ORAC assay



              Name                ORACPE value     DPPH IC50 (ug/ml)


          G2-100E(100EtOH)           0.584               200<


          G2-70E(70EtOH)             0.852               200<


          G2-50E(50EtOH)             0.737               200<


          G2-30E(30EtOH)             0.567               200<


           G2-W (water)              0.393               200<




                              70% 에탄올 추출물에서 항산화 효과가 우수함.
항산화 효과
항산화 효과
시료 : 황토국화 70% 에탄올 추출물의 용매 Fraction
방법 : DPPH Assay, ORAC assay




                 Fraction            DPPH (EC50, ㎍/㎖)     ORACPE value

                n-Hexane                   200<              0.497


                 CH2Cl2                    200<              0.987


                  EtOAc                   31.44              1.860


                  BuOH                    68.98              0.862


                  H2O                      200<              0.237


         ORAC Value ; Vitamin E = 1


                               70% 에탄올 추출물에서 항산화 효과가 우수함.
                            Ethyl Acetate 층에서 항산화 활성이 우수함이 확인됨
Ethyl acetate층의 isolation

                  Chrysanthemum lavandulifolium



    n-hexane       CH2Cl2          EtOAc             n-BuOH   H2O
                                       Open C.C.




                                E1        E2
                              (2.0g)    (1.19g)

                                  Open C.C




                 E1A      E1B      E1C      E1D
               (0.283g) (0.346g) (0.438g) (0.845g)
                                       MPLC



                              E1C1       E1C2
                            (0.185g)   (0.206g)
Ethyl Acetate 층 항산화 효과
항산화 효과
시료 : 국화 추출물의 Ethyl acetate 분획물의 subfraction
방법 : DPPH Assay, ORAC assay

                  Extraction             DPPH           ORACPE
                   Layers             (IC50, ㎍/㎖)        value

                     E1                  60.58           2.133

                     E2                  23.21           1.470



                  Extraction             DPPH           ORACPE
                   Layers             (IC50, ㎍/㎖)        value

                     E1A                130.35           1.147

                    E1B                  30.41           1.716

                    E1C                  27.23           2.374

                    E1D                 190.35           0.541




                               Ethyl Acetate 층에서 분획한 E1C에서
                                  항산화 활성이 우수함이 확인됨
유효성분분석(HPLC)
     지표성분 :                Luteoline (Fluka 62696)


                                                     OH

HPLC condition
                                HO             O
                                                     OH

SystemShiseido nanospace SI-2
DetectorDAD
ColumnC18 (4.6*250), ACE 5um
                                        OH     O
Mobile phaseACN : 10mM H3PO4 = 35:65
Flow rate0.7mL/min
Column temp37℃
Target 유효 및 지표성분
                                   OH                                         OH
     OH

                                                                                          OH




          OH
                                                                   CHO
                 OH
                              HO

     Kikkanol A                     Kikkanol B                               Kikkanol C

                                                                         Sesquiterpenes

                                                                                   OCH3               유효성을 가지는
                                                                                                      지표성분을 선정
                                        OH
                                                                                               OCH3


HO                        O
                                        OH         HO              O




                                                  H3CO
                                                                                                       표준추출공정을
            OH            O

                   Luteolin
                                                           OH      O
                                                                 eupatilin
                                                                                                      통한 표준추출물의
                                                                              Flavonoids              표준화 연구에 이용

                      O                                  Chlorogenic acid

                                             OH
               O

     COOH
                                             OH



     OH            OH

               OH                                                              Aromatics
추출물 분석 결과(에센셜오일)
       T L C ( C18 )




  254nm      365nm Anisaldehyde



HPLC condition


SystemShiseido nanospace SI-2
DetectorDAD
ColumnC18 (4.6*250), ACE 5um
Mobile phase 90% MeOH
Flow rate0.7mL/min
Column temp37℃
추출물 분석 결과(잔사추출물)




HPLC condition


SystemShiseido nanospace SI-2
DetectorDAD
ColumnC18 (4.6*250), ACE 5um
Mobile phaseACN : 10mM H3PO4 = 30:70
Flow rate0.7mL/min
Column temp37℃
안전성 시험
단회 독성 시험 : LD50값이 2g/kg이상으로 안전
황토국화 추출물의 독성을 조사하기 위하여 공비를 2로하여 0, 500, 1000 및 2000mg/kg의 용량으로 ICR계통 암수 마우스에
각 군당 5마리씩 단회 경구 투여하였다. 식약청 독성시험기준 제 2005-60호에 준하여 시험




   Mortality of the mice orally treated with loess chrysanthemum once

                                           Hours after administration                Days after administration
             Dose     No. of
    Sex                                                                                                               Final mortality
            (㎎/kg)    mice
                               1   2   3        4       5       6       3   6   10   11      12       13         14


    Male    Control     5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             500        5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             1000       5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             2000       5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


   Female   Control     5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             500        5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             1000       5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5


             2000       5      0   0   0        0       0       0       0   0   0     0       0       0          0         0/5
안전성 시험
 부검소견 : 장기무게 및 병변 소견 없음
Gross findings of the mice orally treated with loess chrysanthemum once
                                                                              Incidence of gross findings

                                                             Male                                                  Female

      Dose(mg/kg)                Control            500              1000      2000             Control      500             1000      2000

    No. of mice Items               5                5                5          5                 5           5              5         5

      Adrenal gland

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

          Brain

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

          Heart

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

          Liver

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

         Kidney

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

         Spleen

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

          Testis

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)

          Ovary

           NGF                                                                                  5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

         Thymus

           NGF                   5(100%)          5(100%)           5(100%)   5(100%)           5(100%)     5(100%)         5(100%)   5(100%)

NGF : No gross finding, (   ): Percent of no gross finding
피부자극 시험
황토국화 추출물의 피부 자극성을 조사하기 위하여 50% 농도로 시험물질을 6마리의 New Zealand White계 수컷 토끼의
건강한 피부 및 찰과 피부에 적용한 후 시험물질을 적용하지 않은 건강한 피부 및 찰과 피부와 반응을 비교 평가하였다.

피부 반응 평가 기준



>> 홍반과 가피형성                            >> 부종 형성


              반응               점수                           반응                             점수

홍반이 전혀 없음                      0    부종이 전혀 없음                                                0

아주 가벼운 홍반(육안으로 겨우 식별할 정도)      1    아주 가벼운 부종(육안으로 겨우 식별할 정도)                                1

분명한 홍반                         2    가벼운 부종(뚜렷하게 부어올라서 변연부가 분명히 구별될 경우)                       2

약간 심한 홍반                       3    보통의 부종(약 1 ㎜정도 부어올랐을 경우)                                 3

심한 홍반(홍당무 색의 발적)과 가벼운 정도의 가피   4    심한 부종(1 ㎜ 이상 부어오르고 노출부위 밖에까지 확장된 상태)                     4

총 가능한 홍반 점수                    4    총 가능한 부종 점수                                              4



>> 피부반응 성적의 평가                          >> 피부 일차 자극표



피부 반응을 채점한 것을 이용하여 시험물질                    일차자극지수(P.I.I.)*                     구분
처치 후 24시간과 72시간 때의 홍반 평점과                       0.0 ~ 0.5                    비자극성
부종 평점을 더해서 평균치를 산출하고,
                                                0.6 ~ 2.0                   약한 자극성
이 수치로 피부자극성을 평가하였다.
이때 시험물질의 자극성은 일차자극지수외에도                         2.1 ~ 5.0                  중등도 자극성
시험기간 중 관찰된 일반증상 등을 고려하여 평가하였다.                  5.1 ~ 8.0                   강한 자극성

                                         *P.I.I.( Primary Irritation Index : 일차자극지수 ) = 평균의 합계/4
피부자극 시험 결과
     Edema of the Application site

                                  Intact                        Abraded


         Grade         0    1       2      3        4   0   1     2       3         4

                 24
                       6*   0       0      0        0   6   0     0       0         0
                 hrs
    Test site
                 72
                       6    0       0      0        0   6   0     0       0         0
                 hrs
                 24
                       6    0       0      0        0   6   0     0       0         0
    Control      hrs
     site        72
                       6    0       0      0        0   6   0     0       0         0
                 hrs                                                                    *No. of animals


  ※ Grades are follows :
                                    Reaction                                  Grading

                                   No Edema                                     0

                                Very Slight Edema                               1

                                  Slight Edema                                  2

                             Mild Edema(= 1 mm)                                 3

                            Severe Edema(> 1 mm)                                4
추출물의 Anaphylaxis 시험
황토국화 추출물의 anaphylaxis 시험
시험물질 국화 70% ethanol 추출물의 active systemic anaphylatic shok 반응을 조사




Effect of loess chrysanthemum on the compound
48/80 induced active systemic anaphylatic shock


   Dose (mg/kg)              Lethality (%)


        0                        100


       25                         80


       50                         40


       100                        40




 Effect of loess chrysanthemum on compound 48/80 induced serum histamine release.
 Data represents the mean±SE from 5 mice. *, significantly different compared to control (p <0.05)
추출물의 Anaphylaxis 시험
황토국화 추출물의 Passive cutaneous anaphylaxis 시험




 a. 6 week-old male ICR mouse의 등을 제모하고
    anti-DNP IgE ID
 b. 48 시간 후 각각 0, 25, 50 및 100 mg/kg으로 SC
                                                                     200
 c. 2 시간 후 DNP-BSA 1 mg : 40% Evans blue =




                                             Amount of dye (ug/ml)
    1 : 1로 혼합하여 IV
 d. 40 분 후 피부를 벗겨내어 Evans blue가 나타난                                  150
    부분을 잘라 KOH, acetone,
    phosphoric acid를 이용하여 dye 추출 및 정량                                100


                                                                     50

   국화추출물을 SC로 주입하여
                                                                      0
100% 피부투과시 항알러지 효력 평가                                                      Con   25     50   100
                                                                                  (mg/kg)



          IgE발현 억제 확인
항균실험

         b                                          c                    b            c
                      c                b



        a            d                  a                                a           d
                                                    d




         황토국화 Oil                  황토국화 70%에탄올추출물                     황토국화 잔사추출물
a: 50μL (Water), b: 50μL(10%)   a: 50μL (Water), b: 50μL(1.0%)   a: 50μL (Water), b: 50μL(10%)
 c: 50μL(30%), d: 50μL(50%)     c: 50μL(5.0%), d: 50μL(10.0%)     c: 50μL(30%), d: 50μL(50%)
      희석액 : Mineral Oil               희석액 : D.I. Water                 희석액 : D.I. Water


사용균주 : Staphylococcus aureus (KCTC 1621)


                          오일 및 추출물에서 우수한 항균효과를 확인하였다.
                              수층도 항균효과가 있음을 확인하였다.
보습력 실험(실험동물)




1. Change of body weight in guinea pigs    Change of moisture difference in guinea pigs.
G1; Vehicle control, G2; Water extracts,   G1; Vehicle control, G2; Water extracts,
G3; 10 % Ethanol extracts                  G3; 10 % Ethanol extracts
G4; 30 % Ethanol extracts,                 G4; 30 % Ethanol extracts,
G5; 70 % Ethanol extracts                  G5; 70 % Ethanol extracts
                                           Significant difference from the 3rd measurement of
                                           30 % Ethanol extracts treatment group p<0.05




             황토국화의 물추출물과 10% 에탄올추출물은 보습에 영향이 없는 것으로 생각되었으나
     30% 및 70% 에탄올 추출물에서는 반복적 으로 적용하였을 때 일정부분 보습효과가 있는 것으로 추정되었다.
보습력 실험(사람)
                               Sample 별 보습력 변화율(By Corneometer)

         45
변화율(%)




                                    A        B                C


          0
                0          5            25        45              65   85   100
                                             T i me (mi n )
              A : 황토국화 추출물 적용 제품
              B : Sodium Hyaluronate 적용 제품(비교군)
              C : 정제수적용 제품 (Control)

                    황토국화 추출물(오일, 잔사추출물, 수층)를 적용한 처방이 비교 및 대조군보다 우수한
                                  보습효과가 있음을 확인할 수 있다.
간이 임상 효과 실험   [세라마이드 유도체]




    치료전              치료 4주후
간이 임상 효과 실험   [황토국화 추출 오일 ]




     치료전              치료 4주후
간이 임상 효과 실험                        [황토국화 추출물 적용 제품]




      치료전
                              치료 중               치료 4주후




 나이      만 7세             주거 형태      아파트


 성별      남아               사용 기간      4주

주거지      충북 청주시            사용 제품     황토국화 적용제품


 사용 방법   황토국화 추출물이 첨가된 비누로 목욕 후 간단히 물기를 제거한 후
         황토국화 추출물이 적용된 크림을 매일 저녁 4주간 도포하였다.
화장품 제형연구(크림)
** 수상                                        ** 유상                                ** 안정제
                    A        B        C                       A      B      C                 A      B      C
     성분           함량       함량       함량             성분        함량     함량     함량           성분   함량     함량     함량

황토국화 증류수          to 100                     Lanette O       2.00   2.00   2.00   TEA        0.10   0.10   0.10

                                             Olive M 1000    1.00   1.00   1.00   Di water   2.00   2.00   2.00
정제수                        to 100
                                             Tego care 450   2.00   2.00   2.00
정제수                                 to 100
                                             Puresyn 4       2.00   2.00   2.00   ** 첨가제
Glycerine         10.00    10.00    10.00
                                             TCG-M           3.00   8.00   8.00                A      B      C
Silicon 유도체       0.20     0.20     0.20
                                             DC 200/6cs      2.50   2.50   2.50         성분   함량     함량     함량
Microcide-C       0.20     0.20     0.20
                                             Lipex Shea      1.00   1.00   1.00   황토국화추출물    5.00
EDTA-2Na          0.01     0.01     0.01
                                             Vitamin E       0.50   0.50   0.50   히아론산(1%)          5.00
Keltrol F(1%)     5.00     5.00     5.00                                                                   5.00
                                             D-P             0.10   0.10   0.10   정제수
Sepiplus 400      0.30     0.30     0.30                     0.02   0.02   0.02   국화에센셜오일    5.00
                                             BHT


            제조방법
            1.   수상과 유상을 각각 계량하여 을 계량하여 각각을 70~75℃까지 가열한다.
            2.   수상을 유화기를 이용하여 고르게 혼합한 후 유상을 가하여 유화를 시킨다.
            3.   유화를 시킨 후에 안정제를 계량하여 투여하고 유화기로 고르게 교반을 한다.
            4.   유화기의 속도를 감속하며 35~40℃까지 냉각한다.
            5.   첨가제를 계량하여 4번에 투여한 후 서서히 교반하여 첨가제가 고르게 분포하도록 한다.
            6.   감압조건에서 탈포를 시키고 약 3일간 실온에서 숙성을 시킨다.
화장품 제형 연구(로션)
** 수상                            ** 유상                     ** 안정제
                      함량                   성분       함량           성분        함량
       성분
                                 Stearic Acid       2.00
                     to 100                                TEA             0.10
 황토국화 증류수
                                 Tween-60           1.00
                      0.15                                 Di water        2.00
 Cabopol                         Cetanol            2.00

 1.3 BG               6.00       Arlacel-60(D/M)    2.00

                                 Arlacel 165(D/M)   3.00   ** 첨가제
 Glycerine            4.00
                                 Fitoderm           5.00              성분          함량

 M.P                  0.20
                                 Tegocare PS        2.50   황토국화추출물                5.00
 Germall-115          0.20       Epaline DM         1.00
                                                           황토국화에센셜오일              5.00
                                 Vitamin E          0.50
 EDTA-2NA             0.01
                                 D-P                0.10
 Allantoin(D/M)       0.10
                                 BHT                0.02




           제조방법
             1.   수상과 유상을 각각 계량하여 을 계량하여 각각을 70~75℃까지 가열한다.
             2.   수상을 유화기를 이용하여 고르게 혼합한 후 유상을 가하여 유화를 시킨다.
             3.   유화를 시킨 후에 안정제를 계량하여 투여하고 유화기로 고르게 교반을 한다.
             4.   유화기의 속도를 감속하며 35~40℃까지 냉각한다.
             5.   첨가제를 계량하여 4번에 투여한 후 서서히 교반하여 첨가제가 고르게 분포하도록 한다.
             6.   감압조건에서 탈포를 시키고 약 3일간 실온에서 숙성을 시킨다.
화장품 제형 연구(오일&토닉)
** 오일                          ** 토닉            수상                                   유상

                                          성분                 함량
          성분           함량                                                   성분            함량

                               황토국화 증류수                      to 100
     Liquid paraffin   82.30                                          ETHANOL              7.00
                               1.3 BG                         2.00
       Fitoderm         3.00                                          Emalex HC-40         0.40
                               Liponic EG-1                   2.00

     실리콘유도체             0.50   Glydant Plus Liquid            0.20    Tween-20(D/M)        0.50

       Vitamin-E        0.20   Dipotassium Glycyrrhizinate    0.05
                                                                      황토국화 에센셜오일           1.00
                               EDTA-2NA                       0.03
황토국화에센셜오일              10.00
                               황토국화 추출물                      10.00
      Epaline DM        4.00
                               알로에 추출물                        1.00



제조방법                            제조방법
1.  각각의 원료를 정확하게 계량한다.         1.    수상과 유상을 각각 계량하여 을 계량한다.
2.  Disper를 이용하여 500rpm의 속도로   2.    수상을 Disper를 이용하여 천천히 고르게 교반한다.
   30분간 교반한다.                  3.    유상을 별도의 Disper로 고르게 교반한다.
3. 3일간 실온에서 숙성시킨다.             4.    수상에 유상을 천천히 가하면서 모두 투여 후 30분간 천천히 교반한다.
                               5.    3일간 실온에서 숙성시킨다.
추출공정 및 수율
                                              황토국화 채취



                                             용매 : 증류수 스팀
  Essential Oil                              황토국화 : 100Kg
      50ml
                                                                120℃스팀
                                     유수분리
                                                                2시간 증류
    증류수
    200Kg                                   70% EtOH 300Kg 투여

                                                                 95℃,
                                                                2Hr 추출

                              잔사제거             추출액 : 250Kg

                                                                3일간 방냉

                                              1.0㎛, 0.8 ㎛ 여과
                        고형분 함량
                        분석 : 1.0%

                                                방부제 투여

                                                                PE 0.4%

                                                제균여과
                                                0.2㎛ 필터


                      품질관리
                  Specification 확인              추출물 220Kg
추출공정 및 수율
                                                      Essential Oil
      증류수                                                 50ml
      200Kg


                                                        Dillution
     방부제 투여                                      Carrier Oil : LP 150ml


                          PE 0.4%

                                                      Essential Oil
    가용화제 처리                                              200ml

                     POE9tridedyl ether
                          0.3%


   1.0㎛, 0.8 ㎛ 여과




   Essential Oil 이
  함유된 증류수 190Kg                                                   황토국화
                                                                   100Kg




                                                           Essential Oil 이   Essential Oil
                                          추출물 220Kg
                                                          함유된 증류수 190Kg         200ml
1차 시제품(화장품원료)




       Product                 국화수                      Product                 황토국화 Extract                Product              황토국화 Oil

    Analytical Tests           Specifications           Analytical Tests             Specifications
                                                                                                              Analytical Tests           Specifications
      INCI Name            Chrysanthellum indicum         INCI Name              Chrysanthellum indicum
                                                                                           Ext.                 INCI Name            Chrysanthellum indicum
                                    Ext.
                                                          Description             Brown ~ Dark Brown                                          Ext.
      Description            Transparent Liquid               Odour                      Typical
        Odour                     Typical                                                                       Description          Light Yellow ~ Yellow
                                                               pH                       5.0 ~ 7.0
          pH                      4.5 ~6.5           Refractive index(20℃)            1.355 ~ 1.395               Odour                     Typical
 Refractive index(20℃)          1.320 ~1.360        Specific Gravity(d20/20)          1.000 ~ 1.040       Refractive index(20℃)          1.430 ~ 1.470
                                                         Identification
Specific Gravity(d20/20)       0.980 ~ 1.020                                                              Specific Gravity(d20/20)       0.930 ~ 0.970
                                                            -1) Saccharides              적자색
     Identification                                                                      적갈색
                                                            -2) Triterpenoids                                  Heavy Metals                ≤ 10 ppm
     -1) Saccharides              적자색                        -3) Saponins                적갈색
                                                                                                                  Arsenic                   ≤ 2 ppm
       Heavy Metals              ≤ 10 ppm                    -4) Tannins              암녹색/침전
                                                             -5) Amino acids              자색                     Microbes                 ≤ 100 cfu/㎖
        Arsenic                   ≤ 2 ppm
       Microbes                 ≤ 100 cfu/㎖              Heavy Metals                  ≤ 10 ppm
                                                             Arsenic                    ≤ 2 ppm
                                                            Microbes                  ≤ 100 cfu/㎖
1차 시제품(세정용 화장품)
논문실적

     Dermal Irritation Study of Mud Chrysanthemum Extract in Rabbits.,
 1   hoong Je ma, Hyun Kyoo Shin, Young Beob Yu, Hwa Yong Park, Jin
     Yeul Ma, Molecular & Cellular Toxicology, Vol. 3(4). 2007, P125



     Screening and Evaluation of Cosmeceuticals from Medicinal Plants,
 2   정의수, 성균관대학교 박사학위 논문, 2008.2.25




     Acute toxicity study on mud chrysanthemum morifolium in mice.,
     Choong J Ma, Young Beob Yu, Jae Hoon Lee, Hwa Yong Park, Han
 3   Choi1, Ok Pyo Zee, Jin Yeul Ma, 대한본초학회지 투고 중(학진), 2008.
     02월
III. 3차년도 연구계획
   1. 3차년도 추진체계
   2. 3차년도 세부 연구 내용
   3. 기관별 추진내용
3차년도 연구계획 요약
 주요 연구계획 목표                           주요 연구계획 내용

                항 아토피 효능을 가지는 성분 구조 확인
   유효성분 규명
                항 산화 활성이 강한 성분의 구조 확인



                추출공정 및 기준에 따른 화장품 원료 생산
  화장품 원료 생산     - 오일, 증류수, 추출물 생산
                - 품질관리 규정에 따른 생산


                화장품(크림, 로션)을 이용한 아토피 환자 10~20명을 대상으로 임상
 아토피 피부 개선 임상
                아토피 개선 효과 조사


                국화향산업 : 아토피용 크림, 로션, 토닉 생산
   화장품 생산
                기타 화장품 제조사에 원료 영업을 통한 아토피 개선 화장품 생산




                국화향산업 : 입욕제 및 아토피용 화장품 영업
 화장품 원료 영업 및           국화축제기간 내 지역 특산물화하여 제품 영업
   제품 판매               국화차와 연계된 마트 영업, 홈쇼핑 영업
                원료 영업 : 더마랩의 원료 영업망을 이용한 화장품 원료 영업



   기술 이전 협약     성균관대학교 산학협력단과 국화향산업과 기술이전에 대한 협약


                황토국화를 이용한 목욕 및 세정용 조성물에 대한 특허 출원
    특허출원        항염, 아토피 피부 개선 화장료 조성물에 대한 특허 출원
                PCT 출원
기관별 추진내용

 국화향산업(주)   성균관대학교    한의학연구원   ㈜더마랩
            생약학연구실

 •원료 공급     •특허 출원    •임상실험    •화장품원료생산
 •화장품 영업    •물질구조분석            •화장품원료영업
            •논문 발표




            황토국화 항아토피 화장품 개발
연구결과 활용 방안

                            성균관
        국화향                 대학교
               기술 이전 협약
        산업                 산학 협력
                             단


 더마랩                                  더마랩

       국화 추출물 제공          화장품 원료 영업
          (OEM)




          황토국화 항아토피 화장품 출시
IV. 사업화 및 기대효
과
기대효과
아토피 기능성 획득에   피부면역활성 및 아토피와 관련된 기능성 인증으로 새로운 아토피 화장
  따른 신시장 창출   품 시장을 창출


식의약품 등 타제품에   본연구를 통하여 기능성 화장품이 개발된 후 유효성의 규명에 따른 식
  확대적용 가능성    용국화의 식의약품으로의 개발은 가속화될 수 있을 것으로 사료됨


  농가의 수입증대    재배가 용이한 고부가가치 천연물의 개발은 고비용 저부가가치의 농작
              물을 대체하여 농가의 소득증대를 가져옴


수입대체효과 및 수출   동백유 등 동일 효능의 고가 천연물에 대해 무독성등의 장점으로 수출
              및 수입대체효과를 가져옴


쌀시장개발에 따른 신   쌀시장 개방에 따라 쌀재배지에 신규 대체작물이 절실히 요구되는 실정
규 대체작물 기회제공   이며 이에 대한 고부가가치 원예작물의 가능성 제시


  지역경제 활성화    고창지역은 관상용 및 관광자원, 원물판매와 더불어 본사업에 따른 기
              능성 제품이 개발되면 지역경제의 활성화 및 타지역에도 파급될 것임


차세대 성장동력기술    바이오신약/장기 부분의 신규선정 장기 중점지원분야인 “면역기능제
      정책부합    어/면역치료제” 개발과 부합됨
실적보고서 오류 및 수정사항
 지적 재산권 (특허)   특허 건당 200만원씩 2건 400만원 예산 수정할 것입니다.
      출원 예산


   보고서 내 결과    1차년도 보고 내용과 2차년도 보고내용이 혼합되어 있어 보고의 혼선
               이 있었습니다.


 보고서 내에 자극성    시료가 C-BuOH로 표기되어 있습니다. 이는 시료의 이동 시 표기상 실
               수로 인하여 오류가 있었습니다. 자극성 실험에 사용된 시료는 70%에탄
     시험의 시료
               올 추출물입니다.


보고서 내에 상황버섯    보고서 작성과정에서 문서 편집상 오류가 있었습니다.
         오일


 2차년도 계획 대비    조직내 histamine 분비측정  조직내 IgE발현 측정으로,
     실적 부분     Subcutaneous anaphylaxis시험시 피부조직의 IgE발현억제도 측정
감사합니다………

								
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