VITAMINA A

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					                 VITAMINA A                                 El palmitato de retinol es un sólido lipoideo
                                                        amarillo claro, o si se funde, un líquido oleoso
                        CH3       CH3                   amarillo, con un punto de fusión de
    H3C    CH3
                                                        aproximadamente 26 ºC.
                                                R
                                            O               Todos los ésteres de retinol son solubles o
                                                        parcialmente solubles en etanol, miscibles con
                 CH3                                    solventes orgánicos y prácticamente insolubles en
                                                        agua. La Vitamina A y sus ésteres son muy
R=H                    C20H30O           PM: 286,5      sensibles a la acción del aire, luz, calor y los
R=CO-CH3               C22H32O2          PM: 328,5      agentes oxidantes y ácidos.
R=CO-C2H5              C23H34O2          PM: 342,5          Sustancia de referencia         -      Ésteres de
R=CO-C15H31            C36H60O2          PM: 524,9      retinol SR-FA.
   Sinonimia - Palmitato de Retinol.                                     CONSERVACIÓN
    Definición - La Vitamina A refiere a un             En envases inactínicos de cierre perfecto.
número de sustancias de estructura muy similar
(incluyendo los isómeros (Z), que se encuentran en                           ENSAYOS
tejidos animales y que poseen actividad semejante).         [NOTA: efectuar la valoración y todos los
La sustancia principal y biológicamente más activa      ensayos tan rápidamente como sea posible, evitando
es aquella que posee todos sus enlaces en posición      la exposición a la luz actínica y al aire, a los agentes
(E): todo-(E)-3,7-dimetil-9-(2,6,6-trimetilciclohex-    oxidantes, a los catalizadores de oxidación, como
1-enil)nona-2,4,6,8-tetra-en-1-ol (C20H30O).      La    por ej., cobre, hierro), a los ácidos y al calor.
vitamina A se emplea en forma de ésteres tales
como acetato, propionato y palmitato. La expresión          Identificación
                                                            Emplear la siguiente técnica cromatográfica:
éster de retinol sintético se refiere a un éster de
                                                            Fase estacionaria - Emplear una placa para
retinol sintético (acetato, propionato o palmitato) o
                                                        cromatografía en capa delgada (ver 100.
una mezcla de ésteres de retinol sintético.
                                                        Cromatografía) recubierta con gel de sílice para
    La actividad de la Vitamina A se debe expresar
                                                        cromatografía con indicador de fluorescencia, de
en equivalentes de retinol (ER). 1 mg de ER
                                                        0,25 mm de espesor.
corresponde a la actividad de 1 mg de todo-(E)-
                                                            Fase móvil - Ciclohexano y éter (80:20).
retinol. La actividad de los otros ésteres de retinol
                                                            Solución estándar - Preparar una solución de
se calcula estequiométricamente, de modo que 1 mg
                                                        aproximadamente 0,01 mg de Ésteres de
de ER de Vitamina A equivale a la actividad de:
    1,147 mg de acetato de todo-(E)-retinol,            retinol SR-FA por l (3,3 UI de cada éster por l)
    1,195 mg de propionato de todo-(E)-retinol,         en ciclohexano. Estabilizar con una solución de
    1,832 mg de palmitato de todo-(E)-retinol.          butilhidroxitolueno al 0,1 %.
    Se     emplean       también     las    Unidades        Solución muestra - Preparar una solución de
Internacionales (UI) para expresar la actividad de la   aproximadamente 3,3 UI de Vitamina A por l en
Vitamina A. 1 UI de Vitamina A equivale a la            ciclohexano. Estabilizar con una solución de
actividad de 0,300 g de todo-(E)-retinol . La          butilhidroxitolueno al 0,1 %.
actividad de los otros ésteres de retinol se calcula        Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
estequiométricamente, de modo que 1 UI de               placa 3 l de Solución muestra y 3 l de Solución
Vitamina A equivale a la actividad de:                  estándar. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
    0,344 g de acetato de todo-(E)-retinol,            los cromatogramas hasta que el frente del solvente
                                                        haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
    0,359 g de propionato de todo-(E)-retinol,
                                                        de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
    0,550 g de palmitato de todo-(E)-retinol,
                                                        cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
    1 mg de equivalente de retinol corresponde a
                                                        al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
3333 UI.
                                                        254 nm: el cromatograma obtenido a partir de la
    Caracteres generales - El acetato de retinol se     Solución estándar debe presentar las manchas
presenta como cristales de color amarillo pálido,       individuales de los ésteres correspondientes. El
con un punto de fusión de aproximadamente 60 °C.        orden de migración debe ser: acetato, propionato y
Cuando funde, el acetato de retinol, tiende a formar    palmitato de retinol. La composición de la Solución
una masa sobreenfriada.                                 muestra se debe confirmar por la correspondencia
    El propionato de retinol se presenta como un        de la o las manchas principales obtenidas a partir de
líquido oleoso pardo rojizo.                            la Solución estándar.
    Límite de retinol                                   en la cual A326 es la absorbancia a 326 nm, P es el
    Fase estacionaria y Fase móvil - Proceder           peso de Vitamina A en g, V es el volumen total al
según se indica en Identificación.                      que ha sido diluida la Vitamina A para dar una
    Solución muestra - Preparar una solución de         concentración de 10 a 15 UI por ml y 1.900 es el
aproximadamente 330 UI de Vitamina A por l en          factor de conversión de la absorbancia específica de
ciclohexano. Estabilizar con una solución de            los ésteres de retinol en Unidades Internacionales
butilhidroxitolueno al 0,1 %.                           por g.
    Solución estándar - Agitar 1 ml de la Solución                         ROTULADO
muestra con 20 ml de solución de hidróxido de               En el rótulo se debe indicar el número de
tetrabutilamonio 0,1 M en alcohol isopropílico,         Unidades Internacionales por g y el nombre del
durante 2 minutos y diluir a 100 ml con                 éster o ésteres.
ciclohexano. Estabilizar con una solución de
butilhidroxitolueno al 0,1 %.
    Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 3 µl de Solución muestra y 3 µl de Solución
estándar. Dejar secal las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: a excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
la mancha principal obtenida con la Solución
estándar (1 %). [NOTA: en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución estándar se debe
observar sólo trazas o no se debe observar ninguna
mancha correspondiente al éster de retinol.]
    Sustancias relacionadas
    Determinar el máximo de absorción de la
solución empleada en el ensayo Actividad (ver 470.
Espectrofotometría ultravioleta y visible).    La
solución debe presentar un máximo de absorción
entre 325 y 327 nm. Medir las absorbancias A a
300, 350 y 370 nm y calcular la relación A/A326
para cada longitud de onda: ninguna de las
relaciones A/A326 debe ser mayor de:
                    0,593 a 300 nm.
                    0,537 a 350 nm,
                    0,142 a 370 nm.
                   ACTIVIDAD
    Examinar por espectrofotometría de absorción
ultravioleta     (ver     470.     Espectrofotometría
ultravioleta y visible). Pesar exactamente entre 25 y
100 mg de Vitamina A, disolver en 5 ml de pentano
y diluir con alcohol isopropílico hasta una
concentración de 10 a 15 UI por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente 326 nm. Calcular la
actividad de la Vitamina A en Unidades
Internacionales por g por la fórmula siguiente:
                       A326V 1.900
                         100P

				
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posted:6/17/2012
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