????? microinjection ???DNA??????????? ??? ???? electroporation ????? sperm mediated gene transfer

							       第四章 動物生物技術


 胚胎移植技術：擴大優良品種
   限制
    同種生物-懷孕期 生長條件
    個體一致性-年齡 大小 生理
    供應者須健康
基因轉殖動物
  定義：利用人為方式將重組DNA導入體內而改變其基因
  型的動物
   DNA轉入體細胞或生殖細胞中
  動物基因轉殖常用的方法
   微量注射法(microinjection)：將重組DNA直接注射入
   動物受精卵中，最常用
   電穿孔法(electroporation)
   精子載體法(sperm-mediated gene transfer)
   反轉錄病毒載體法(retrovirus carry vector)：效率高，
   基因大小有限
   酵母人工染色體載體法(yeast artificial chromosome
   vector)：保持基因的完整性
基因表現產物的檢測
  RNA：北方墨點法(northern blotting)
  蛋白質：西方墨點法(western blotting)
  蛋白質表現量高時
   高效液相層析法HPLC- High Performance
   Liquid Chromatography
HPLC I
HPLC II




參考資料：http://www.ehponline.org/
基因打靶（標靶）技術（gene targeting)
   2007 年 諾貝爾生醫獎
     美國猶他大學的馬立歐‧卡佩奇（Mario R.
     Capecchi）教授、英國卡地夫大學的馬丁‧艾文斯
     （Martin J. Evans）教授和美國北卡羅萊納大學的
     奧立佛‧史密西（Oliver Smithies）教授
     因在基因標的和基因剔除小鼠技術上的貢獻而得獎。
    《科學發展》2008年7月，427期，38 ~ 39頁
   運用 DNA重組、基因轉殖、胚胎幹細胞、細胞培養技
   術的綜合方法
   將DNA插入染色體上某特定位置，不活化某基因
    此基因在生理上的角色
    此基因要非生存所必須
   基因剔除(gene knock-out)-同源重組
    生產無狂年症的牛隻-需剔除prion基因
基因轉殖動物的種類
  陸生動物-小鼠、鼠、兔子、羊、牛、豬
   研究人類疾病的模式動物
    例如：高血壓老鼠、糖尿病老鼠與兔子、
    B型肝炎帶原老鼠……..
   帶有人類基因動物
    含凝血因子8號、九號的轉基因豬與羊
    含人類白血球抗原（HLA）的豬
  水產動物-魚、蝦、貝
   稻田魚 、斑馬魚：卵多、透明、生長期短、
   易觀察組織與器官的發育
斑馬魚卵




        參考資料：http://www.ehponline.org
觀賞用螢光魚




          資料來源：邰港生技
基因轉殖動物的運用
  基礎醫學研究：模式動物
  提高動物產值：提高肉質、減少脂肪
  增進動物健康：提升動物的免疫力
  提供人類器官移植來源：轉基因豬、羊
  改變乳汁成分：乳鐵蛋白、溶菌酶、減少乳
  糖含量
  基因工程藥物：透過乳線分泌
 動物分子農場
                  (影片: chicken.mpg)
 基因轉殖動物的管理       (影片: pig.mpg)
動物複製技術
  Clone 複製是指無性生殖
  不同於有性生殖
   無基因重組
   基因型完全相同
   表現型（不）完全相同
  複製動物的種類
   複製羊（桃莉Dolly, 1996年）
   複製牛、豬、老鼠、狗
   複製寵物   (影片: dog.mpg)
複製羊流程




                   (影片: dolly.mpg)
    (張玉瓏等, 2006)
複製羊桃莉與其父母
台灣的複製牛 I
  2001年-畜寶（僅存活5天）




                    資料來源：農委會
台灣的複製牛 II
   2003年-如意家族




                資料來源：農委會
台灣的複製豬
  2002年-酷比家族
    豬乳鐵蛋白、人類第九凝血因子




                     資料來源：農委會
台灣的複製羊
  2002年-寶吉、寶祥




                資料來源：農委會
台灣螢光豬
  2006、2007誕生，細胞有螢光，移植到其他部位，就
  容易辨別，到底是新生組織，還是自體組織分化所生
  成的。




資料來源：台灣大學
複製人
  科學問題? 成功率很低
  倫理道德? 全世界政府都反對生殖複製

 複製技術所遭遇的問題
   成功率低：從不到1％進展到5％以上
   存活率：畸形、免疫力低、未老先衰
   早衰與染色體的端粒有關
    端粒的煩惱?
    複製次數增加端粒逐漸縮短
端粒的問題（telomere problem）

末端複製問題(end-replication problem)
端粒酶的作用
 (telomerase )




參考資料：
http://stemcells.nih.gov/