Les Milieux de Culture by 2hh04Zx

VIEWS: 1,487 PAGES: 6

									                                      LES MILIEUX DE CULTURE
- Milieu Chapman : Le milieu de Chapman est un milieu sélectif, surtout utilisé en microbiologie médicale,
permettant la croissance des germes halophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du genre
Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, les Enterococcus, les Bacillus, et de rares bactéries à Gram négatif.

 après utilisation     Ensemencement        Sélectivité / composition     Caractères                   Résultats
                      L'ensemencement         Ce milieu contient un   On peut étudier la Les colonies mannitol + sont
                      doit être massif, en      inhibiteur : fortes    fermentation du entourées d’une auréole jaune.
                       stries serrées ou concentrations en chlorure      mannitol par
                                                              -1
                        par inondation de sodium (75 g.L ), ce qui virage au jaune Ne pas confondre la pigmentation
                                              permet un isolement       de l’indicateur     des colonies et le virage de
                                           sélectif de Staphylococcus coloré, le rouge           l’indicateur coloré.
                                                tolérant les fortes   de phénol, autour
                                             concentrations en NaCl     des colonies.
                                                                                         Ainsi des colonies pigmentées en
                                                                                            jaunes et mannitol + : forte
                                                                                               suspicion de S. aureus

- Milieu Hektoen : La gélose Hektoen est un milieu d'isolement des Salmonelles et des Shigelles, bien que de
nombreuses bactéries à Gram négatif puissent se développer sur ce milieu. L'identification d'entérobactéries pathogènes
repose sur la non utilisation des glucides présents dans le milieu.

  après utilisation      ensemencement        Sélectivité       Caractères                       Résultats
                      L'ensemencement se Deux indicateurs     trois types de         Colonies saumon : Escherichia,
                            fait par les    sont présents      glucides : la          Levinea, Citrobacter diversus,
                           techniques      dans le milieu : salicine (qui est un   Klebsiella, Enterobacter, Serratia,
                           habituelles.                       hétéroside), le                    Yersinia
                                             - le bleu de    saccharose et le
                                           bromothymol            lactose.           Colonies saumon à centre noir :
                                         (indicateur de pH)                       Citrobacter freundii, Proteus vulgaris,
                                                              La production
                                            - la fuschine    d'H2S à partir de      Colonies bleu-vert à centre noir :
                                            acide (qui se        thiosulfate     Suspicion de Salmonella, à différencier
                                               colore en                                   de Proteus mirabilis
                                               présence
                                             d'aldéhyde.                         Colonies bleu-vert ou vertes : Suspicion
                                                                                      de Shigella ou de Salmonella

- Gélose SS : Gélose Salmonella-Shigella. Milieu sélectif permettant l’isolement d'entérobactéries pathogènes. Il est
très utilisé pour la recherche de Salmonella dans les selles et les denrées alimentaires peu pour les Shigella car trop
sélectif.

  après utilisation   Ensemencement           Sélectivité / composition              Caractères            Résultats
                      Isolement par la Le milieu contient 3 inhibiteurs : - sels Le milieu contient    colonies rouges :
                        méthode des        biliaires, - vert brillant, - forte   du lactose pouvant        lactose +
                          cadrans.      concentration en citrate de sodium.        être fermenté.
                                                                                                 colonies incolores :
                      Incuber 18 à 24 h Ceux-ci empêchent la pousse de toutes Le milieu contient      lactose–
                                                       +
                           à 37°C.       bactéries Gram , et rendent difficile la du thiosulfate
                                                                        -
                                        croissance des bactéries Gram autres pouvant donner du colonies à centre noir :
                                              que Salmonella et Shigella.              H2S.            H2S +

- Milieu EMB : Milieu Eosine Bleu de Méthylène. Milieu d'isolement des bacilles Gram -. Il est très utilisé pour l’isolement
des coliformes.

  après utilisation   ensemencement               Sélectivité            Caractères                  Résultats
                      Isolement par la     Ce milieu contient deux         Le milieu    colonies violettes : semi-bombées
                        méthode des colorants, l’éosine et le bleu de contient un de 2 à 3mm de diamètre avec éclat
                          cadrans.        méthylène qui inhibent la       critère de    métallique, centre sombre : E. coli
                                                                      +
                                       majeure partie de la flore Gram différenciation,    très bombées muqueuses de
                                        (sauf Streptocoques D). Bien      le lactose    diamètre 5 mm centra gris marron
                                       que les Entérobactéries lactose                          sans reflet Klebsiella
                                        - puissent s’y développer, la
                                             culture des Entérobactéries                                colonies grisâtres :
                                              lactose + y est favorisée.                             - 1 à 2 mm de diamètre
                                                                                                 transparentes, grises ambrées :
                                                                                                       Salmonella, Shigella.

                                                                                             - 2 mm de diamètre, grisâtres avec
                                                                                              une pellicule autour de la colonie :
                                                                                                       Proteus morganii

                                                                                                    punctiformes et grisâtres :
                                                                                                          Enterococcus.

- Milieu Mac Conkey : Milieu sélectif pour l'isolement des bacilles Gram - Salmonella et Shigella ainsi que des bactéries
coliformes dans les eaux, les produits alimentaires, les produits pharmaceutiques et biologiques .
     après utilisation      ensemencement             Sélectivité           Caractères                    Résultats
                            Isolement par la     Ce milieu contient      le lactose dont     colonies rouges entourées d’un
                              méthode des       deux inhibiteurs de       l’utilisation est hâlo opaque de la même couleur
                                                                  +
                                cadrans.          la flore Gram :           révélée par        du à la précipitation des sels
                                                                                                                        +
                                                                      l’indicateur coloré            biliaires: lactose
                          Incuber 18 à 24 h à - les sels biliaires du milieu, le rouge
                                 37 °C.                                        neutre.        colonies jaunes ou incolores :
                                                                                                                   -
                                                  - le cristal violet                                      lactose


- Milieu CLED : Le milieu CLED (Cystine Lactose Electrolyte Déficient) est un milieu non sélectif, très utilisé dans
l'étude des bactéries contenues dans l'urine. Etant un milieu non sélectif de nombreuses bactéries, tant Gram + que Gram
-, pourront se développer.L’absence d’électrolytes (pas de NaCl) limite le phénomène d’envahissement par les Proteus.

 après utilisation               ensemencement                    Caractères                       Résultats
                        La lecture s'effectue après 18 à 24        Lactose               lactose + apparaissent jaunes
                            heures d'incubation à 37°C.
                                                                                      lactose – apparaissent bleues vertes




- Milieu BCP : C’est un milieu utilisé pour la détection et l’isolement des entérobacteriacées dans l’eau, les produits
alimentaires, l’urine et les selles. Ce milieu facilite la différenciation des colonies par le caractère lactose. Il inhibe
l’envahissement de la surface de la boite par des nappes de Proteus car il ne contient pas d'électrolytes. C’est un milieu
non sélectif qui est utilisé pour l’isolement de nombreuses espèces n’appartenant pas aux entérobactéries. C’est un
milieu contenant une base nutritive ordinaire permettant la pousse des bactéries non exigeantes. Il contient un critère de
différenciation : la fermentation du lactose révélée par le virage en milieu acide de l’indicateur coloré de pH, le
bromocrésol pourpre. Il est déficient en électrolytes : absence d'ions minéraux.

    après utilisation       ensemencement               Sélectivité                  Caractères                   Résultats
                               Isolement              - Non selectif           - Espèces n’appartenant        Colonies bleues :
                                                                               pas aux entérobactéries       bactéries lactose –
                              18 à 24 h à      - Dépourvu en électrolyte
                                 37°C                                          - Fermentation du lactose       Colonies jaunes :
                                                 - Bromocrésol pourpre                                        bactéries lactose +


- Milieu Baird Parker : Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus. Ce milieu contient une base nutritive
riche. Il contient des accélérateurs de la croissance : le pyruvate de sodium et le glycocolle

 après utilisation ensemencement              Sélectivité                   Caractères                          Résultats
                      Isolement              Il contient 2             Contient 3 critères de:
                                             inhibiteurs :
                         18 à 24 h à                                   réduction du tellurite, -
                            37°C         le chlorure de lithium     protéolyse des protéines du                  colonie
                                                                    jaune d'œuf, - hydrolyse par
                                             le tellurite de       une lécithinase des lécithines
                                              potassium.                  du jaune d'œuf                   autour de la colonie

- Milieu BEA : Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).
 après utilisation             ensemencement                     Sélectivité              Caractères           Résultats
                      Le milieu présenté en boite de C’est un milieu sélectif des          l’esculine      Pousse de petites
                     Pétri est destiné à un isolement.      streptocoques peu           révélée par le colonies sur le milieu
                     Le milieu présenté en tube est à            exigeants.              citrate de fer
                     beurrer avec une culture pure car                                   ammoniacal
                           il entre dans la galerie    Il contient 2 inhibiteurs : - la                   Colonies entourées
                     d’identification des coques gram bile de bœuf, - l’azide de                        d'un halo noir : esculine
                              + de culture facile.                 sodium                                          +

- Gélose au sang : C’est un milieu d’isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la
lecture du caractère hémolytique. C’est un milieu riche d’autant plus par la présence de sang.

   après utilisation          ensemencement           Caractères                       Résultats
                                 Isolement            Hémolyse Hémolyse alpha : zone claire d’hémolyse totale de diamètre
                                                                           3-4 mm entourant les colonies.
                              18 à 24 h à 37°C
                                                                  Hémolyse béta : zone floue et granuleuse, verdâtre de 1 à 2
                                                                                      mm de diamètre



- Milieu Slanetz : Milieu de dénombrement des entérocoques en microbiologie alimentaire. Son emploi est surtout
réservé aux eaux, après filtration.

après utilisation ensemencement         Sélectivité                   Caractères                      Résultats
                     Isolement   Il contient un inhibiteur        le TTC qui lors de Les Entérocoques donnent des colonies
                                      des gram -, qui            sa réduction donne     de taille moyenne, roses ou rouges.
                      Filtration      sélectionne les             une coloration des
                                 Streptocoques : l’azide         bactéries en rouge. Les Bacillus peuvent pousser et donner le
                                        de sodium.                                    même aspect de colonies, mais de taille
                                                                                                   plus importante.




- Milieu Cétrimide : La gélose au cétrimide est un milieu sélectif, qui permet l'isolement des Pseudomonas et
notamment de P.aeruginosa. Ce milieu gélosé est relativement pauvre, et contient un antiseptique: le cétrimide
(bromure de N-cétyl-N, N, N-triméthylammonium). Ce milieu, proche du milieu King A, favorise aussi la production de
pigments par P.aeruginosa.

 après utilisation            ensemencement                           Sélectivité                 Caractères       Résultats
                         Ensemencer la surface du         Sur ce milieu de très nombreuses       -pyoverdine      Milieu bleu :
                         milieu au moyen de l'anse.       bactéries sont inhibées de par la                       pyocyanine
                                                              présence de l'antiseptique         -pyocyanine
                         Incuber durant 24 heures à    cétrimide(bromure de N-cétyl-N, N, N-                      Milieu jaune-
                            37°C, voire même de        triméthylammonium)., ainsi que par la                          vert :
                       préférence à 42°C (l'incubation     présence de l'antibiotique acide                       pyoverdine
                        à 42°C permet un isolement     nalidixique (inhibiteur de nombreuses
                        spécifique de P.aeruginosa).          bactéries à Gram négatif).


- Gélose Sabouraud : La gélose de Sabouraud constitue un milieu classique pour la culture, l'isolement et
l'identification des levures et des moisissures saprophytes ou pathogènes. Elle est recommandée essentiellement pour
l'isolement des moisissures dans les prélèvements peu chargés en bactéries, les contrôles de stérilité des produits
pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, la culture des moisissures en vue de réaliser leur identification. Dans le
cas de prélèvements fortement contaminés, il est préférable d'utiliser la gélose Sabouraud + chloramphénicol .

                           ensemencement                                              Sélectivité / composition
          - Transférer l'échantillon à analyser sur le milieu.              L'ajout de triphényltétrazolium à raison de
                                                                                100 mg par litre en fait un milieu de
 - Etaler l'inoculum en surface à l'aide d'un étaleur en verre stérile.          différenciation pour les Candida.

                 - Incuber à 20 - 25°C de 3 à 5 jours.

- Gélose Sabouraud plus chloramphénicol
 après utilisation                     ensemencement                                Sélectivité            Caractères recherchés
                      - Transférer l'échantillon à analyser sur le milieu.       Chloramphénicol              Recherche des
                                                                                                               champignons
                          - Etaler l'inoculum en surface à l'aide d'un
                                      étaleur en verre stérile.

                              - Incuber à 20-25°C de 3 à 5 jours.

- Gélose CIN : Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).

  après utilisation      ensemencement                 Sélectivité             Caractères               Résultats
                            Isolement.          2 inhibiteurs permet de    l’esculine révélée Pousse de petites colonies sur le
                                              sélectionner la culture des par le citrate de
                                            streptocoques du groupe D: - fer ammoniacal
                                             la bile de bœuf, - l’azide de                     Colonies entourées d'un halo
                                                         sodium                                      noir : esculine +


- Gélose au lait :

 après utilisation           ensemencement                  Sélectivité            Caractères                  Résultats
                        Faire une strie centrale à la                            hydrolyse de la    L’hydrolyse de la caséine se
                             surface du milieu.                                     caséine      traduit par l’apparition d’une zone
                                                                                                     claire autour de la culture.
                         Incuber 24H à 7jours à la
                           température désirée.


- Gélose à l’amidon

 après utilisation        ensemencement            Caractères                              Résultats
                        Ensemencer par une       l’hydrolyse de    Hydrolyse mise en évidence par l’ajout d’une solution iodée :
                        strie à la surface du       l’amidon.
                                milieu.                            -        une coloration bleu-rouge due à l’amidon, montre qu’il
                                                                                         n’a pas été hydrolysé
                      Incuber un à huit jours
                         à la température                          -        la disparition de cette coloration montre son hydrolyse.
                              désirée.

- Gélose à l’œuf :

 après utilisation                ensemencement                         Caractères                          Résultats
                      Faire une strie à la surface du milieu, ou       La lécithinase   l'action de la lécithinase libère de la choline
                            éventuellement des touches.                                    soluble et un diglycéride peu soluble qui
                                                                                           précipite dans le milieu provoquant un
                        Incuber pendant 24 h ou plus à 37°C.                                       hâlo autour de la culture


- Gélose Drigalski : Milieu sélectif permettant l’isolement des bactéries Gram- non exigeantes. Il est utilisé pour
l’isolement des germes urinaires et pour la coproculture

    après utilisation        ensemencement           Sélectivité                  Caractères               Résultats
                             Isolement par la Contient deux inhibiteurs          Fermentation Les colonies de bactéries lactose +
                                                                   +
                               méthode des       de la flore Gram :               du lactose             sont jaunes.
                                 cadrans.
                                               - le désoxycholate de                              Celles de bactéries lactose – sont
                                              sodium, - le cristal violet                                      bleues.


- Gélose TSN : Milieu de dénombrement des anaérobies sulfito-réducteurs (spores de Clostridium sulfito-réducteurs et
Clostridium perfringens) dans les produits alimentaires.

        Mode                 Sélectivité / composition            Caractères                             Résultats
 d’ensemencement                                             recherchés
     Isolement          La température d’incubation      Réduction par le fer       - les anaérobies sulfito-réducteurs : à 37°C
                         permet de sélectionner les      du sulfite de sodium
L’incubation se fait en diférents types bactérien.                                       - Clostridium perfringens à 46°C
     anaérobiose.
                                                                                  Colonies rouges

- Gélose à l’ADN :

  après utilisation               Mode d’ensemencement               Caractères                  Résultats
                         Percer la gélose de trous. Inoculer avec la DNase thermo   halo rose signant la DNase autour
                           quelques gouttes d'un bouillon creur-    résistante de des trous percés sur le fond bleu de la
                         cervelle ensemencé auparavant et bouilli Staphylococcus                  gélose
                          10 minutes. Incuber 4 heures à 37 oC.



- Gélose lactosée au désoxycholate 0.1% : Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire
(analyse des eaux et des aliments).

  après utilisation      ensemencement      Sélectivité / composition            Caractères                Résultats
                           - Isolement     2 inhibiteurs des bactéries           le lactose      Colonies rouges
                                               +                                                            +
                                          Gram à faible concentration :                              lactose , coliformes

                                         - le désoxycholate (sels biliaires)
                                                                                                                      -
                                                                                                            lactose
                                               - le citrate de sodium.

- Milieu Todd Hewit : Ce milieu glucosé tamponné convient bien à la culture des bactéries exigeantes supportant mal les
variations de pH, il est bien adapté à la culture des Streptocoques.

     Mode d’ensemencement                                         Sélectivité / composition
  Ensemencement par isolement.        système tampon (phosphates, bicarbonates) permet d’empêcher que l’acide formé
                                      par le métabolisme du glucose n’exerce une action nuisible sur les bactéries

- Milieu TTC tergitol : Milieu de recherche et de dénombrement des coliformes. Il est surtout utilisé pour la colimétrie
des eaux par la méthode de filtration.

 après utilisation    ensemencement         composition            Caractères                        Résultats
                         Filtration         le Tergitol 7    - le TTC qui montre le       - colonie rose-rouge : réduction du
                                           permettant de     pouvoir réducteur des                          TTC
                                          sélectionner les          bactéries               - colonie jaune : absence de
                                            coliformes et                                            réduction du TTC
                                            inhibe aussi         - le lactose dont           - halo bleu-vert : lactose –
                                         l’envahissement     l’utilisation est révélée        - halo jaune : lactose +
                                             par Proteus       par le virage du bleu      - E. coli et Enterobacter aerogenes
                                                                 de bromothymol                donnent des colonies jaunes
                                                                                           - Les autres coliformes donnent
                                                                                                   des colonies rouges.



- Gélose au sang cuit : C’est un milieu d’isolement enrichi préconisé pour l’étude des Neisseria notamment le
méningocoque. Il est aussi utilisé pour la culture de Haemophilus influenza.

     après utilisation           ensemencement                             Sélectivité / composition
                                   - Isolement         L’amidon de maïs neutralise les substances toxiques libérées par les
                                                                                     cultures.




- Gélose Mossel : Milieu utilisé en alimentaire pour l’isolement de Bacillus cereus.
après utilisation     ensemencement        Sélectivité / composition Caractères                 Résultats
                    Etaler une goutte de Assuré par la polymyxine Croissance           Si il y a croissance alors
                    produit à éudier et au qui inhibe ou retarde la ou absence présence de la souche Bacillus
                      rateau, avec des       croissance d’autre                              cereus : colonie
                        billes ou par              espèces.           croissance
                          inodation                                   de colonie     - roses rouges (mannitol -)
                                                                      mannitol –
                                                                     lécthinase + - halo blanchâtre au centre de la
                                                                                        colonie (lécithinase +)

								
To top