NEISSERIA GONORHOEAE�NIN TANI VE TARAMA TESTLERI

							   NEİSSERİA
GONORHOEAE’NIN
 TANI VE TARAMA
    TESTLERİ
      0101050093
  NAZİFE DUYGU ARSLAN
NEİSSERİA GONORRHOEAE
 • Tüm dünyada yaygın
 • Cinsel temasla bulaşan
 • Genellikle alt genital
  sistem olmak üzere
  çeşitli müköz zarları tutan
 • Bakteriyel bir infeksiyon
          LABARATUVAR YÖNTEMLERİ
•   Boyalı preparatta etkenin gösterilmesi
•   Uygun besiyerinde izole edilmesi
•   Nükleik asit amplifikasyon yöntemi
•   Polimeraz zincir reaksiyanu
•   Ligaz zincir reaksiyonu
•   Direk floresan mikroskopisi
•   Enzim immünoassay
•   Gonokokal DNAnın belirlenmesi
•   Karbonhidrat kullanım testi…
          ÖRNEK ALIMI
• Üretra
• Endoserviks
• Anorektal
• Kan
• Bartolin bezi
• Deri lezyonları
• İdrar…
      Üretral Örnek Alımı
• Bol akıntı varlığında
  üretra ağzından direk
  olarak alınırken;
  eküvyonun üretradan
  2-3cm sokulduktan
  sonra içerde
  çevrilmesiyle alınmasıda
  mümkündür.
Endoservical Örnek Alımı
 N. Gonorrhoeae’nın en sık izole
edildiği yerdir. Spekulum
yerleştirildikten sonra servikal mukus
uzaklaştırılır ve eküvyon, vajinal flora
ile kontamine edilmeden
endoservikal kanal duvarına
bastırılarak ve döndürülerek örnek
alınır.
    Anorektal Örnek Alımı
• Eküvyon anal kanaldan 4-5cm içeriye
  sokulur ve çepeçevre sürülerek örnek
  alınır.
  Deri Lezyonlarından Örnek
            Alımı

• Nokta biopsi
• Aspirasyon
               Kan

• Dissemine Gonokok infeksiyonu(DGİ)
  geçirmekte olduğu düşünülen
  hastadan kan kültürü yapılır.DGİ
  şüphesinde, negatif sonuç vermek
  için en az üç kez kan kültürü
  yapılmalıdır
     İdrardan Örnek Alımı
• Üretral örnek alınamıyorsa 20-30ml
  ilk akım idrar santrifüje edilir ve
  sediment bekletilmeden seçici
  besiyerine ekilir
  Boyalı Preparat Hazırlanması

• Preparatların örnek alınır alınmaz
  hazırlanması en uygundur.
• Eküvyon, lamın yüzeyine bastırılmadan ve
  döndürülerek, tek yönde sürülür.
• Eküvyon bu şekilde 3-4kez ve bir önceki
  sürüntünün üzerinden geçmeksizin ve lamın en
  az 1 cm² alanına sürülmesiyle preparat hazırlanır.
• Preparatlar havada
  kurutulup, ısıyla
  sabitleştirildikten
  sonra boyanır.
• Transport gerekiyorsa
  ve boyama
  yapılamayacaksa,
   ısı ile sabitleştirme
  yapıldıktan sonra
  gönderilmelidir.
Boyalı Preparat Sonuçları-1
• Metilen mavisi ve diğer bazı boyalar
  gonokokların tespitinde yararlı olsada
  gram boyası yüksek duyarlılık ve
  özgüllüğü ile gonokok tanısında özel bir
  yere sahiptir.
• Akut gonorede nötrofillerin dışında da bol
  diplokok görülebilir.
• Diplokok görülmeksizin nötrofillerin veya
  nötrofil görülmeden diplokok görülmesi
  durumunda preparat sonucu negatif olarak
  değerlendirilir.
• Gram preparatında, nötrofil içi
 tipik gram negatif diplokokların
 görülmesi ile pozitif
 değerlendirilir.
              Kültür
 Yeterli klinik materyal
 alındığında ve besiyeri
 ortamı uygun
 erkek hastalardan %95
 kadın hastalardan %80-90
 oranında tek kültürle
gonokokları izole etmek mümkündür.
   Kültürün hazırlanması-1
• Örnekler hastadan alındıktan sonra en geç yarım
  saat içinde, kültür besiyerine ekilmeli
• 35-37Cº ve %3-10 CO2 içeren ortamda 24-72
  saat inkübe edilmelidir
• Hemen kültürü yapılamayacak örnekler asla
  buzdolabında saklanmamalı, oda ısısında
  bekletilmelidir.
• Ekim yapılan besiyerlerinin oda ısısında ve
  mumlu kavanoz içinde durmak şartı ile, 5 saate
  kadar bekleyebileceği bildirilmiştir.
• Bu koşulların sağlanamadığı durumlarda besleyici
  veya besleyici olmayan transport besiyerleri
  kullanılır.
 Kültürün hazırlanması-2
Besleyici olmayan transport
besiyerleri
■Stuart
■ Amies
Besleyici transport besiyerleri
■ Modifiye Thayer Martin(MTM),
■ New York City(NYC) veya
■ Martin-Lewis(ML)
   Kültürün hazırlanması-3
• Seçici olmayan besiyeri olarak
  çikolatamsı agar önerilir.
• Antibiyotiklerin ilavesi ile MTM ve
  ML agar besiyerleri elde edilir.
      Kültürün Sonuçlarının
        Değerlendirilmesi
• 72 saatin sonunda kolonilerin görülmemesi
  durumunda, besiyeri yüzeyine oksidaz ayıracı
  dökülerek pozitif sonuç veren koloniler
  araştırabilir.
• Üreme olduktan sonra N.gonorrhoeae, hızla
  otolize olduğu için etüvde değil, 2-3gün
  yaşayabileceği bir ortam olan oda ısısındaki
  mumlu kavonozda bekletilmelidir
• İzole edilen gonokoklara, birkaç dakika içinde
  sonuç veren kromojenik sefalosporin,
  asidometrik, iyodometrik ve kağıt strip
  metodlarındanbiri ile beta laktamaz testi
  yapılmalıdır.
• Disk difüzyon testi ile veya agar dilüsyon metodu
  ile antibiyotik duyarlılık testi yapılmalıdır.
 Sonuç olarak oksidaz pozitif gram
negatif diplokoklar N. Gonorrhoeae
       olarak değerlendirilir.
 Nükleik Asit Amplifikasyon
      Testleri(NAATs)


• Mevcut nükleik asit amplifikasyon testleri
  ile tanı konulabilir olmasına rağmen bu
  testlerin hiçbiri gonokokların tanısında
  kültüre üstün değildir. Rektal ve faringeal
  enfeksiyonların tanısında
  kullanılabileceğine ait çalışmalar
  mevcuttur.
• Alabama,Birmignham TF.
• 14 Ağustos-10 Kasım 2008
• Amaç:Faringeal gonorrhoeae’da en
  uygun tanı yöntemini belirlemek.
• 961 kişi, >15yaş
• Sonuç:faringeal gonore riski taşıyan
  hastalarda NAATs duyarlılığı
  kültürden daha fazla
•   Laura H. Bachmann, Robert E. Johnson, Hong Cheng, Lauri E. Markowitz,John R. Papp,
    and Edward W. Hook III; Nucleic Acid Amplification Tests for Diagnosis of Neisseria gonorrhoeae
    Oropharyngeal Infections; Journal of Clinical Microbiology, Şubat2009, vol:47sf; 902-907.
     7yıl, 7333(MSM)
•   1157 (+)sonuç N.gonorrhoeae
•   Rectal,faringeal,üretral
•   Sonuç:Gonore infeksiyonunun tarama testleri;
    rectal ve faringeal örneklerin incelenmesi
•   Sonuçlarla kültürlerin uyumsuzluğuna bakılırsa,
    çalışmalar NAATs gibi kanıtlayıcı labaratuvar
    yöntemleriyle desteklenmeli


•   Gunn RA,O’Brien CJ,Lee MA,Gilchick RA: Gonorrhea screening among men who have sex with men:
    value of multiple anatomic site testing, 2008 Oct;35(10):845-8.
• Moleküler bioloji teknikleri ile gonore
  tanısı muhtemel bir tanı yöntemi
  olarak kullanılırken,doğrulama için
  kültür ortamına başvurulur.
Diğer Tanısal Metodlar


Enzim immunoassay,
Direk floresan mikroskopi
Gonokokal DNA’nın belirlenmesi
      Doğrulama Testler
• Ürogenital bölge dışından ve
  çocuklardan izole edilen gonokokların
  en az iki farklı yöntemle
  doğrulanması yapılmalıdır.
      Doğrulama Testler

• Karbonhidratlara etki
• Kromojenik enzim substrat testi
• Serolojik testler
• Nükleik asit prob testi
Glikozu fermante etmesine rağmen
  maltoza etki etmemesi ile diğer
    neisseria türlerinden ayrılır.
                            Kaynaklar
•   Topçu AW,Söyletir G,Doğanay M.Gonore enfeksiyonunun hastalık ve
    mikrobiyolojisi:etkenlere göre enfeksiyonlar;2008:2:sf1562-1570.

•   Laura H. Bachmann, Robert E. Johnson, Hong Cheng, Lauri E. Markowitz,John R.
    Papp ve Edward W. Nucleic Acid Amplification Tests for Diagnosis of Neisseria
    gonorrhoeae Oropharyngeal Infections; Journal of Clinical Microbiology;Şubat2009,
    vol:47sf; 902-907.

•   A.Ağaçfidan, Ö.Anğ.Cinsel Temasla Bulaşan Hastalıklar;1999:sf97-102

•   Otero Guerra L,Lepe Jimenez JA,Blanco Galan MA,Aznar Martin J, Utility of molecular
    biology techniques in the diagnosis of sexually transmitted diseases and genital
    infections:2008 Temmuz;26 Suppl 9:42-9.

•   Gunn RA,O’Brien CJ,Lee MA,Gilchick RA: Gonorrhea screening among men who have
    sex with men: value of multiple anatomic site testing, 2008 Oct;35(10):845-

•   Handsfield HH, Sparling PF, Neisseria gonorrhoeae. In:Mandell GL. Bennett JE, Dolin
    R.eds. Principles and Practise of Infectious Disease. 6th ed. New York: Churchill
    Livingstone;2005;2514.

•   Golden MR, Cles L, Couse K, Performance of transcription metiated amplification
    testing for Neisseria gonorrhoeae in a low prevalence population of women. 2004
    national STD Prevention Conference, Philedelphia, Pa, March 8-11, 2004
•TEŞEKKÜRLER……