??? ?????? Lag Phase ???????? ??????? ????
Document Sample


תהליכי תסיסה – פרק 1
מבוא לביוטכנולוגיה מיקרוביאלית
תהליך התסיסה
סוגי תוצרים
ביוטכנולוגיה מיקרוביאלית
אחד מענפי הביוטכנולוגיה.
ענף העוסק ביישום תהליכים ביולוגיים
המתבצעים ע"י מיקרואורגניזמים לצרכי האדם.
הענף כולל מספר נקודות דרך, החל מהמחקר
המדעי וכלה בשיווק המוצר המוגמר.
להלן מספר יישומים מחקריים בתעשייה:
איתור מיקרואורגניזמים שלא היו מוכרים קודם •
ובדיקת יכולתם לייצר חומרים חדשים המתאימים
לשימוש האדם.
השבחת זנים של מיקרואורגניזמים בשיטות של •
ברירה והעשרה ובשיטות גנטיות.
מציאת תנאי גידול מיטביים למיקרואורגניזמים •
יצרנים.
שימוש במיקרואורגניזמים לצורכי הפקת תרופות, •
חלבונים וחומרים דרושים אחרים.
תסיסה - רקע היסטורי
תסיסה – פרמנטציה. מקור המילה בלטינית fervereשפירושה רתיחה.
התנאים לביצוע התהליך המוצרים התהליך התקופה
לא סטריליים, בהתאם משקאות אלכוהוליים, לא ידוע קדומה
למצב המזון. מוצרי חלב מוחצמצים,
ירקות כבושים והתפחת
בצק.
לא סטריליים, המשך מוצרי מזון מיקרואורגניזמים המאה ה-71
אנאירוביים. מסורתיים, אחראים לביצוע עד סוף המאה
אתנול, אצטון, חומצת תהליך התסיסה ה-91
חומץ. (לבנהוק, פסטר)
סטריליים- עיקור מצע תרופות אנטיביוטיות שנות ה-04 של אוכלוסייה נבחרת
המזון, הזנת תרבית בנוסף למוצרים ומוגדרת של המאה ה-02
מיקרואורגנימים, הקודמים. מיקרואורגניזמים
ריבויים, בקרת טמפ', מבצעים את התסיסה
אוורור, ,pHערבול. בתהליך מנתי.
השתנות הגדרה של התסיסה
הביוטכנולוגית
בעבר השתמשו במונח תסיסה לתיאור של הפקת
אנרגיה בתנאים של היעדר חמצן.
כיום משמעות ההגדרה של תסיסה רחבה יותר:
תסיסה היא כל תהליך של חילוף חומרים המתרחש
ע"י מיקרואורגניזמים בנוכחות חמצן מולקולארי או
בהיעדרו.
שישה סוגים של תהליכי תסיסה
יישומים מסחריים התוצר הסוגים
שמרית – שמרי אפייה ביומסה ייצור ביומסה
התאים עצמם מיקרוביאלית
הפקת אנזימים בתחומי תעשיה שונים: חלבון או ביופולימר אחר המופרש מהתא ייצור
מזון (פקטינאז – הצללת מיצי פירות) או נאגר בו. ביופולימרים
ניקוי (עמילאז - אבקת כביסה)
רפואה .
ביוסינתטי – אנטיביוטיקות, ויטמינים, חומצות חומר ביוכימי נמוך-מולקולרי ומופרש ייצור מטבוליטים
אמינו, חומצות אורגניות. החוצה מהתא המייצר. מיקרוביאלים
קטבולי – אתאנול, מתאן, חומצה לקטית. התוצר יכול להיות ביוסינתטי או קטבולי.
בירה, יין. מצע התסיסה בסיום התהליך לאחר ייצור תערובות
הפרדת התאים. מותססות
הכנסת קבוצת הידרוקסיל לסטרואידים המשמשים מרכיב מצע שהוחדר בו שינוי מבני ספציפי תהליכי היפוך
כתרופות. ע"י פעילות אנימטית שלהתאים. ביולוגי
טיהור מים, סילוק פסולת חקלאית מיחזור פסולת ושמירה על איכות טיפול בחומרי
בזבל פרות משתחרר ביוגז המכל מתאן ומשמש הסביבה. פסולת
כתחליף לגז בישול. השאריות משמשות מזון חלבוני
לדגים ודשן לשדות.
תוצרי תסיסה לפי ענפי התעשייה
ענפי התעשייה תוצרי התסיסה
אצטון, אתאנול, בטאנול, חומצות אורגניות (חומצה ציטרית). כימיקליים
אנזימים, בשמים, פולימרים (בעיקר רב סוכרים). ביוכימיקלים
אנטיביוטיקות, חומרים המשמשים לדיאגנוסטיקה (אנזימים, נוגדנים חד חומרים פרמצבטיים
שבטיים), מעכבי אנזימים, סטרואידים, תרכיבי חיסון).
אתאנול (גזוהול), מתאן (ביוגז), ביומסה. אנרגיה
מוצרי חלב (גבינות ויוגורטים), מוצרי דגים, מוצרי בשר, משקאות מזון
(אלכוהוליים, תה וקפה), שמרי אפייה, תוספי מזון (מונעי חמצון, חומרי
צבע, טעם וריח וחומרים מייצבים), חומצות אמיניות, ויטמינים, תוצרי
עמילן, ממתיקים.
מזון לבע"ח (חלבון מחד-תאיים), תרכיבי חיסון וטרינריים, חומרי הדברה חקלאות
המיוצרים ע"י מיקרואורגניזמים, תרבית מזרע של ריזוביום וחיידקים
מקבעי חנקן אחרים.
דיון
היכן נמצאים המיקרואורגניזמים בתהליך הייצור
התעשייתי?
מה הוא המאפיין הייחודי לתהליך הייצור
הביוטכנולוגי?
מה צריכים מיקרואורגניזמים כדי להתרבות?
באיזה אופן מפיקים מיקרואורגניזמים אנרגיה?
מה שונה בין שני סוגי התסיסה?
השוואה: תסיסה אירובית ואנאירובית.
תסיסה אנאירובית תסיסה אירובית
מתבצעת בהיעדר חמצן מתבצעת בנוכחות חמצן
בתהליך מתפרק הגלוקוז בתהליך מתפרק הגלוקוז בשלמות
לתוצרים נוספים (גם אורגניים) לתוצרים אנאורגניים: פד"ח ומים.
לפעמים.
לדוגמא: תסיסה כהלית – פד"ח
וכוהל (אורגני).
רווח אנרגטי מירבי – לכל מולקולת רווח אנרגטי נמוך – לכל
מולקולת גלוקוז 2 מולקולות גלוקוז 23 מולקולות .ATP
.ATP
נפלט יותר חום כי זהו תהליך נפלט פחות חום כי זהו תהליך יעיל
פחות יעיל אנרגטית. אנרגטית.
כדאי פחות למיקרואורגניזם. כדאי יותר למיקרואורגניזם.
תהליך הרבייה של מיקרואורגניזמים – חזרה.
רבייה אל מינית – חלוקת התא אחד לשניים.
Nt = N0 * 2n
– nחלוקות
- 2nמספר מיקרואורגניזמים שהתחילו
מהמיקרואורגניזם הבודד לאחר nחלוקות.
0 - Nמספר מיקרואורגניזמים בזמן 0 (בהתחלה). כל תא מתחלק ל-2.
- Ntמספר מיקרואורגניזמים לאחר זמן tמסוים.
1=02
2=12
4=22
8=32
זמן דור – gהזמן העובר בין חלוקת תא אחת לשנייה או הזמן שעובר עד
שאוכלוסיית מיקרואורגניזמים מכפילה את עצמה.
מעקב אחר התרבות חיידקים בתנאי מעבדה.
ציר – Xזמן בשעות
ציר – Yגידול אוכלוסיית חיידקים. מחולק באופן לוגריתמי כלומר בחזקות של 01.
בעקום הגידול ארבעה שלבים עיקרים:
- Lagהחיידקים "מסתגלים" למצע, מסנתזים את החומרים, גדלים,
ֵ שלב ההשהיה- Phase 1.
אך עדיין לא מתרבים.
שלב הגידול הלוגרתמי (המעריכי) – -Log Phaseקצב גידול מהיר, התנאים טובים, יש 2.
מזון,חמצן, עדיין אין כמויות גדולות של פסולת, ובכל 02 דקות מוכפלת האוכלוסיה.
- Stationaryהתנאים הולכים ומשתנים, נגמר שלב הגידול היציב – Phase 3.
מזון וחמצן.
שלב המוות – - Death Phaseהתנאים הופכים גרועים, המזון נגמר וכמות הפסולת 4.
עולה, קצב התמותה גדול מקצב ההתרבות. החיידקים מתים.
תרגול
ניתוח כמותי של גידול תרבית תאים
עמוד 73
נלמד בהמשך במידת הצורך .
מיקרואורגניזמים מייצרים תוצרים
שונים בתעשייה הביו-טכנולוגית. ניתן
לחלק את סוגי התוצרים הללו
ב-2 סוגי חלוקות שונות.
מטבוליט ראשוני ומטבוליט משני - השוואה
מטבוליט משני מטבוליט ראשוני
תוצר שאינו קשור לתהליכי הפקת אנרגיה תוצר הקשור לתהליכי הפקת אנרגיה
ולריבוי התאים. ולריבוי תאים.
מופיע בתרבית בשלב מאוחר – בשלב העמידה. מופיע בתרבית בשלב מוקדם – בשלב
הגידול המעריכי – לוגריתמי.
תוצר שאינו חיוני לריבוי אך חשוב להישרדות תוצר חיוני לקיום ולריבוי.
קיומית.
נוצר בתנאי עקה – הרעבה וצפיפות. נוצר בתנאים מיטביים – בעודף מזון.
נגזר ממטבוליט ראשוני וקצב הופעתו לא נגזר מחומרי המוצא וקצב הופעתו מקביל
מקביל לקצב פירוק מקורות הפחמן. לקצב פירוק מקורות הפחמן.
מסלול יצירתו מורכב ומנגנון הבקרה לא ידוע. המסלול הביוכימי ליצירתו וגם מנגנון
הבקרה ידוע.
לא נפוץ, מיוחד למיקרואורגניזמים מסוימים מטבוליט נפוץ ומשותף למיקרואורגניזמים
– פטריות וחיידקים חוטיים. רבים בהיותו קשור למנגנון הפקת אנרגיה
אוניברסלי.
דוגמאות למטבוליט ראשוני ולמטבוליט משני.
מטבוליט משני מטבוליט ראשוני
אנטיביוטיקה אתנול
אקטינומיצין (מדכא סרטן) אצטון
ציקלוספורין (מדכא חיסון) בוטנול
חומצת חלב (לקטית)
חומצת לימון (ציטרית)
חומצה אמינית – ליזין
אנטיביוטיקה
• כל סוגי האנטיביוטיקה הינם מטבוליטים משניים.
• אנטיביוטיקה היא חומר המעכב איזה שהוא תהליך בתא
או פוגע בדופן התא.
• בהמשך נלמד על תהליך הייצור של אנטיביוטיקה
בתעשייה הביוטכנולוגית.
בונוס
נא להביא לשיעור הבא מזון
שעל אריזתו רשום כי הוא מכיל
חומצת לימון (ציטרית).
ניתן גם להביא מזון שיש בו חומצת
אמינו ליזין.
בתאבון.
הקשר בין עקומת גידול של מיקרואורגניזמים
למטבוליטים ראשוניים ומשנים.
שלב 1 – אין התרבות, שלב הסתגלות למצע, קליטת חומרי מזון מהסביבה. אורכו של
שלב 1 תלוי בסוג המיקרואורגניזמים, תלוי בהרכב המצע, ובתנאים סביבתיים.
שלב 2 – עליה מהירה במספר התאים, התרבות מעריכית-לוגריתמית. קצב התרבות .2n
בשלב זה מתרחש המטבוליזם הראשוני. בשלב זה נוצרים מטבוליטים ראשוניים
הקשורים לתהליכי הפקת אנרגיה הנחוצה לקיום ולריבוי התאים.
שלב 3 – ריכוז מקסימלי של תאים. הריבוי נעצר משום שנוצרים תנאי עקה סביבתית:
המזון נגמר, יש הצטברות הפרשות מעכבות ורעילות, יש צפיפות יתר, יש תחרות
קיומית עם הסביבה, יש שינוי pHלחומצי, מחסור באוויר.
בשלב זה מתרחש המטבוליזם המשני. במיקרואורגניזמים מסוימים מופרשים
חומרים אנטי-מיקרוביאלים ע"מ שהצאצאים יוכלו לשרוד בתחרות. בשלב זה נוצרים
המטבוליטים המשניים הנוצרים במטבוליזם נפרד שאינו חיוני להפקת אנרגיה
ולריבוי אך חיוני להישרדות הצאצאים.
שלב 4 – התאים מתים, מתפרקים פירוק עצמי – אוטוליזיס, בגלל תנאי העקה.
סוגי תוצרים מיקרוביאלים על פי דרך הפקתם.
תוצרים חוץ תאיים תוצרים תוך תאיים
מיוצרים ומופרשים בצורה מסיסה אל מחוץ מיוצרים ונאגרים בתוך התא בציטופלזמה או
לתא – לסביבתו החיצונית או למצע הגידול באברונים, או קשורים לקרומי אברונים, או
(דפוזיה החוצה). לקרום התא, או לדופן (אם יש).
הפקתם מתבצעת ישירות מצע הגידול לאחר הפקתם מתבצעת על ידי השקעת התאים
הפרדתו מהתאים היצרנים ע"י סינון או בסירכוז או הפרדתם ע"י סינון ופתיחתם
סירכוז. באמצעים כימים (שינוי לחץ אוסמוטי, טיפול
בדטרגנטים, טיפול בממסים אורגניים, טיפול
בחומצה), באמצעים פיזיקליים (הקפאה או
הפשרה, הפעלת לחץ גבוההפעלת גלי קול
בתדירות גבוהה), באמצעים ביולוגיים (עיכול
אנזימטי של דפנות התאים, הדבקה
בקטריופאז)
בדר"כ התוצר מסיס בסביבה מימית – יש תוצרים מסיסים בסביבה מימית –
הידרפילים. הדרפילים, ויש תוצרים לא מסיסים
בסבבהמימית הידרפובים/ליפופילים.
דוגמאות לתוצרים חוץ ותוך תאיים
תוצר חוץ תאי תוצר תוך תאי
אנטיביוטיקה חומצת גרעין
חומצות אמינו ויטמינים
חומצת לימון חלבונים
אתאנול אנזימים תוך תאיים
אנזימים חוץ תאיים: (לקטאז, אטיברטאז)
פרטאזות, עמילאזות, גליקן
ליפאזות.
מעבדה – בדיקת פעילות עמילאז בחיידקים.
רקע עיוני
• עמילאזות הם אנזימים שכיחים באורגניזמים וברקמות.
העמילאז מזרז את תהליך פירוק העמילן, והתוצרים הם
גלוקוז ומלטוז (דו-סוכר הבנוי משתי יחידות של גלוקוז
הקשורות זו לזו).
• חיידקים ופטריות מייצרים עמילאזות. גזעים מסוימים של
חיידקים מייצרים עמילאז בכמויות גדולות, ומשתמשים
בהם להפקה מסחרית של עמילאזות עבור תעשיית המזון
ותעשיות אחרות.
• במעבדה זו נבדוק פירוק עמילן במצע הגידול של שני סוגי
חיידקים: E-coliו- .Bacillus subtilis
• פירוק עמילן במצע הגידול מעיד על הפרשה חוץ-תאית
של עמילאז.
מעבדה – בדיקת פעילות עמילאז בחיידקים.
שאלות הכנה
• על-סמך ידיעותיך מלימודיך הקודמים כיצד ניתן לזהות
נוכחות עמילן במצע הגידול של החיידקים?
• כיצד ניתן לזהות פירוק של עמילן במצע הגידול של
החיידקים?
כלים וחומרים
• תרביות של E-coliו- Bacillus subtilis
• צלחת אגר מזין + %1 עמילן
• תמיסת יוד
• טוש לסימון
• מחט בקטריולוגית
• גזיה וגפרורים.
מעבדה – בדיקת פעילות עמילאז בחיידקים.
מהלך העבודה
1. סמן בתחתית צלחת פטרי קו המחלק אותה לשתי
גזרות.
סמן במספרים 1, 2.
2. זרע בגזרה 1 E-coliובגזרה 2 .Bacillus subtilis
3. הדגר את הצלחות ב- 52מעלות צלזיוס.
4. כעבור 84 שעות הצף את הצלחת בתמיסת יוד לשם
בדיקת פירוק העמילן.
פירוק העמילן יעיד על הפרשה חוץ-תאית של עמילאז
ע"י החיידקים.
מעבדה – בדיקת פעילות עמילאז בחיידקים.
תוצאות
צייר ותאר במילים את תוצאות המעבדה.
שאלות לסיכום – ענה במחברתך
1. כיצד בדקת פעילות של האנזים עמילאז?
2. על מה מעיד צבע חום-שקוף בצלחת?
3. על מה מעיד צבע כחול-שחור בצלחת?
4. האם העמילאז הוא אנזים חוץ-תאי או תוך-תאי?
5. על סמך תוצאות הניסוי, איזה חיידקי מייצר ומפריש
עמילאז?
6. מהו היתרון שמקנה האנזים עמילאז לחיידק המייצר
אותו, על-פני חיידק אחר שאינו מייצר עמילאז?
סוגי מערכות ייצור של תוצרים ביוטכנולוגים.
רציף מנתי
מנתי מוזן מנתי
הזרמה רציפה ומבוקרת של חורי תהליך מנתי רגיל אך הזרמת חומרי הכנסת כל חומרי המוצא לפרמנטור
המוצא ובמקביל הוצאה של התוצר המוצא נעשית באופן הדרגתי ובמנות בבת אחת בתחילת התהליך –
למתקן הפרדה בצורה רציפה. קצובות ומבוקרות כדי למנוע מצב של המחזור.
עודף ריכוז חומרי מוצא מעל לסף התהליך מופעל עד לקבלת כמות
העלול לעכב או להפריע בייצור התוצר התוצר הרצויה. התהליך מופרד מיתר
(מטבוליט משני). החומרים בפרמנטור.
אין מחזורים, יש רצף. הייצור מתבצע במחזורים. הייצור מתבצע במחזורים הניתנים
לשחזור מדויק.
עוזר בהפרדה בין שלב הגידול לשלב בתחילת התהליך המנתי תאי היצרן
הייצור במטבוליט משני. מתרבים והם מייצרים תוצרים.
התהליך מופסק עם סיומו.
תערובת התסיסה לא אחידה. בכניסה תערובת התסיסה אחידה בריכוזה בגלל ערבול. ריכוז המגיבים והתוצרים
למתקן הייצור ריכוז המגיבים מרבי ואין משתנה עם הזמן אך הוא אחיד בכל הנפח.
תוצר. ביציאה מתקן הייצור ריכוז התוצר
מרבי ואין חומרי מוצא. – ביניהם יש מפל
ריכוזים.
יש לווסת את ההזנה בפרמנטור ולכן מתן מזון בכמות גדולה בפרמנטור
מתן מזון בכמות קטנה ומבוקרת לגידול מהיר ולקבלת מטבוליט
לגידול איטי ולקבלת מטבוליט משני. ראשוני.
דוגמאות לתוצרים הנוצרים במערכות הייצור השונות.
רציף מנתי-מוזן מנתי
ביומסה אתנול
אנטיביוטיקה חומצת לימון
אנזימים חוץ
תאיים: עמילאז,
פרוטאז, ליפאז.
Get documents about "