UNG THU C? T? CUNG

							                  GIỚI THIỆU
 HPV( Human papilloma virus) là một nhóm virus bao gồm
  hơn 100 kiểu gene( genotype) khác nhau. Trong đó có
  khoảng 40 type xâm nhiễm niêm mạc hậu môn- sinh dục.
 Các nhà khoa học đã tìm thấy sự hiện diện của DNA- HPV
  trong 99.7% các trường hợp ung thư tế bào gai ở cổ tử
  cung.HPV là nguyên nhân hàng đầu của ung thư cổ tử
  cung ( UTCTC).
 HPV được phân thành hai nhóm – “ nguy cơ cao”và “nguy
  cơ thấp”.Sự nhiễm các type “ nguy cơ cao” ở bệnh nhân
  có liên quan chặt chẽ với diễn tiến thành UTCTC (đặc biệt
  là type16,18).
 Theo tổ chức y tế thế giới( WHO) thì UTCTC là nguyên
  nhân gây tử vong do ung thư hàng thứ hai ở phụ nữ trên
  toàn thế giới, chỉ sau ung thư vú.
HPV nguy cô thaáp

 6, 11, 13, 34, 40, 42, 43, 44, 57, 61,
 71, 81. Nhöõng type naøy gaây toån thöông
 muïn coùc boä phaän sinh duïc ngoaøi,
 sang thöông u nhuù ñöôøng hoâ haáp, muïn
 coùc ôû baøn tay, gan baøn chaân vaø caùc
 beänh lyù khaùc
       Condylomata (warts)

Perianal warts
HPV 6, 11
                                Genital warts
                                HPV 6, 11




                 Common warts
                 HPV 1, 2
Warts Can Present Orally,
        HPV 6, 11




  Means of transmission not well documented
HPV Infection, Eye, HPV 6,
            11
   HPV nguy cô cao

 16, 18, 31, 33, 34, 35, 39, 45, 51, 52,
 56, 58, 59, 66, 68, 70

 Maëc duø coù söï khaùc bieät veà taàn
 suaát nhieãm caùc type HPV giöõa caùc
 vuøng ñòa lyù nhöng chuûng 16, 18
 thöôøng gaây ung thö ôû haàu heát caùc
 nôi treân theá giôùi.
                 Dòch teã hoïc

 Trong möôøi naêm ñaàu
 tieân sau giao hôïp taàn
 suaát löu haønh beänh
 gaàn 25% vaø nguy cô
 nhieãm HPV trong suoát
 cuoäc ñôøi coù theå tôùi
 80%
 Khoaûng 50% phuï nöõ
 hoaït ñoäng tình duïc seõ
 PHAÙT HIEÄN VAØ TAÀM SOAÙT UT CTC
Phoái hôïp nhieàu bieän phaùp laâm saøng, caän
  laâm saøng:
   Thaêm khaùm laâm saøng
   VIA
   Teá baøo hoïc CTC (PAP)
   Thöû nghieäm chaån ñoaùn HPV
   Soi CTC
   Sinh thieát CTC / Naïo keânh töû cung
   LEEP/ Khoeùt choùp
   Caét TC
 Xét nghiệm pap dùng trong tầm soát UTCTC chỉ
  phát hiện 80% trường hợp có nguy cơ chuyển
  thành ung thư và hơn nửa xét nghiệm này không
  phân biệt được các type HPV.
 Nhưng xét nghiệm sinh học phân tử( XN SHPT)sẽ
  giúp giải quyết được vấn đề. Có nghĩa là XN
  SHPT có thể xác định được là có nhiễm hay
  không, ngoài ra còn có thể định type gây bệnh
  thuộc nhóm nào để theo dõi và tư vấn chặt chẽ.
CÁC THỨC LẤY MẪU BỆNH PHẨM

 Dùng tăm bông chuyên dụng trong phụ
  khoa đưa vào đường sinh dục để quyét một
  lớp tế bào ở cổ tử cung.
 Tăm bông được cho vào eppendorf và
  nhanh chóng chuyển về phòng xét nghiệm.
 The Pap Smear




The Adam Health Illustrated Encyclopedia A.D.A.M., Inc. is accredited by URAC,
also known as the American Accreditation HealthCare Commission
   PHAÙC ÑOÀ TAÀM SOAÙT UT CTC
Phaùc ñoà                    American Cancer Society       American College of OB&GYN
                                                           (ACOG)



Tuoåi baét ñaàu taàm soaùt   3 naêm sau laàn giao hôïp     3 naêm sau laàn giao hôïp
                             ñaàu tieân                    ñaàu tieân


Khoûang caùch:
-Pap smear                   Moãi naêm, moãi 2-3 naêm      Moãi naêm, moãi 2-3 naêm
                             vôùi ≥30t, coù 3 laàn pheát   vôùi ≥30t, coù 3 laàn
                             TB (-)                        pheát TB (-)
-Liquid-based cytology
                             Moãi 2 naêm, moãi 2-3 naêm    Moãi naêm, moãi 2-3 naêm
                             vôùi ≥30t, coù 3 laàn pheát   vôùi ≥30t, coù 3 laàn
                             TB (-)                        pheát TB (-)
-HPV test+ cytology
                             Moãi 3 naêm neáu HPV(-),      Moãi 3 naêm neáu HPV(-),
                             TB(-).                        TB(-)
                             EUROGIN 2008: mỗi 5 năm nếu
                             HPV(-) HCII, TB(-)
   CÁCH THỨC TIẾN HÀNH XÉT
   NGHIỆM SINH HỌC PHÂN TỬ
 Đầu tăm bông cắt ra cho vào eppendorf
  1.5ml có chứa sẳn dd Te1x. Vortex ở tốc độ
  cao trong 1 phút và trữ ở -200C cho đến khi
  tách chiết DNA.
 Tách chiết DNA: nhân viên xét nghiệm sẽ
  tách chiết theo đúng tiến trình kéo dài 1h-
  2h.
 Phần DNA thu được sẽ dùng để chạy phản
  ứng real-time PCR.
      CÁC KIỂU PHẢN ỨNG
 Hiện nay có 4 kiểu phản ứng được sử dụng
  trong kỹ thuật Real-time.
 Cả 4 kiểu phản ứng đều sử dụng các chất
  nhuộm huỳnh quang( flourescent dye), có
  sự kết hợp bước nhân bản và phát hiện sản
  phẩm PCR mục tiêu theo thời gian thật
  (Realtime)của phản ứng.
            Taqman probe
 Người ta dựa vào đặc tính exonuclease 5’ -
  3’ của Taqman polymerase để hình thành
  phương pháp.
 Probe Taqman được gắn một chất phát
  huỳnh quang ở đầu 5’ và một chất “ dập tắt”
  ở đầu 3’ , sao cho ánh sáng huỳnh quang
  của chất phát huỳnh quang bị hấp thu bởi
  chất “ dập tắt”.
 Khi còn nguyên vẹn tín hiệu của chất phát huỳnh
  quang bị hấp thụ do chúng nằm gần chất hấp thụ
 Trong giai đoạn kết hợp bắt cặp và kéo dài DNA
  trong phản ứng khuếch đại,probe liên kết với trình
  tự đích và hoạt động 5’ – 3’ exonuclease đặc hiệu
  cho DNA mạch đôi của Tapman sẽ cắt đứt đầu
  gắn chất huỳnh quang.
 Kết quả chất phát huỳnh quang tách rời khỏi chất
  hấp thụ và tín hiệu huỳnh quang phát ra tỷ lệ với
  lượng sản phẩm khuếch đại trong mẫu.
Phản ứng Taqman probe
MÁY TRATAGENE Mx3000p
     Các kiểu phản ứng khác
 Moleclar beacon.
 Chất nhuộm gắn với DNA mạch đôi.
 Probe đôi.
  CAÙC BÖÔÙC PHAÙT HIEÄN VAØ ÑÒNH TYÙP
                   HPV
Beänh phaåm                  DNA HPV
(pheát CTC) TAÙCH CHIEÁT DNA
                                   Real-time PCR HPV
                                   CHUNG

                            Nhieãm HPV




                         PCR – REVERSE DOT BLOT




                            Caùc tyùp HPV
                       6, 11, 16, 18, 31, 33,
                      35, 39, 42, 43, 45, 51,
                      52, 53, 56, 58, 59, 61,
                       66, 68, 70, 71, 81, 82
MOÄT SOÁ KEÁT QUAÛ PCR – RDB ÑÒNH TYÙP HPV


Beänh phaåm   1       2
3

                              +        61      18        45
                                  58

                              6        70      31        51
                                  59

                             11          71        33        52
                                  66

                             42     81        35        53
                                  68
Beänh phaåm   4       5
                             43        16      39       56
6                                 82
KẾT QUẢ HPV- PCR (+)
KẾT QUẢ HPV- PCR (-)
HPV-genotype: Âm tính
HPV type 16 và type 18
HPV type 18 và type45
VIRUS VIÊM GAN B
   Định lượng HBV bằng kỷ thuật
           Realtime PCR
 Virus viêm gan B (Hepatitis B virus- HBV) là
  một trong những tác nhân chính gây viêm
  gan siêu vi ở người.
 Trên 2 tỉ người trên thế giới nhiễm HBV
  trong đó hơn 350 triệu người nhiễm mạn
  tính.
 Viêm gan mạn tính do HBV có thể dẫn đến
  xơ gan và ung thư gan.
 Các chẩn đoán lâm sàng , xét nghiệm sinh
  hóa không đặc hiệu, còn xét nghiệm miễn
  dịch không hiệu quả trong giai đoạn cửa sổ,
  ở bệnh nhân suy giảm miễn dịch và đối với
  các týp huyết thanh đột biến của virus.
 Mặc khác việc xác định hàm lượng virus ở
  bệnh nhân là cần thiết để theo dõi và đánh
  giá hiệu quả điều trị
 Xét nghiệm định lượng dựa trên kỹ thuật realtime-
  PCR cho phép định lượng chính xác lượng virus
  trng máu bệnh nhân.
 Kit HBV định lượng sử dụng mẫu dò
  (probe)Taqman đặc hiệu cho HBV, được đánh
  dấu huỳnh quang. Tín hiệu này sẽ được đầu dò
  của máy ghi nhận.
 Như vậy số lượng bản sao trình tự mục tiêu HBV
  tạo ra ở từng thời điểm sẽ được ghi nhận chính
  xác trong suốt quá trình PCR.
 Dựa vào đường cong chuẩn thiết lập với
  những hàm lượng bản sao HBV xác định,
  có thể tính được số lượng bản sao HBV
  hiện diện trong mẫu ban đầu.
 Quy trình thực hiện gồm : thu nhận- xử lý
  mẫu, tách chiết DNA, thực hiện
  realtimePCR, đọc kết quả.Quy trình có thể
  hoàn tất trong 4 - 5 giờ,
        VIÊM GAN SIÊU VI C
 Kit định lượng HCV-RNA cũng giống như
  HBV- DNA.
 Quy trình thực hiện gồm 5 bước: thu nhận-
  xử lý mẫu, tách chiết RNA, phiên mã ngược
  chuyển RNA thành Cdna, nhân bản DNA
  bằng realtime-PCR,đọc kết quả.
 Quy trình có thể hoàn thành trong 5 – 6 giờ.
CHAÂN THAØNH CAÙM
        ÔN