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					Universidad Nacional Autónoma de Honduras en el Valle de Sula

          Escuela Universitaria de Ciencias de la Salud

                   Departamento de Fisiología


                             Asignatura:
                          Patología (PA100)



                               Sección:
                                1301



                            Catedrática:
                Dra. Elizabeth Casco Funes de Núñez



                                Tema:
       Desarrollo de las tareas asignadas en clase y en el blog.



                           Resposables:
                           Amilcar Nuñez
                            Cecilia Flores
                             Iliana Arita
                             Olivia Díaz



                      Lugar y Fecha de Entrega:

                  San Pedro Sula, Cortés; Honduras

                        29 de Agosto de 2011




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                       DESARROLLO DE LOS OBJETIVOS ESPECIFICOS


1) Hará una definición de PATOLOGIA, conocerá su importancia y utilidades en la
   formación del médico.

Definición de Patología:
Es la ciencia que se ocupa del estudio de las enfermedades, tomando en cuenta que la
enfermedad es un proceso dinámico estudia también los cambios estructurales,
bioquímicos y funcionales que subyacen a las enfermedades en las células, tejidos y
órganos. Además sirve como puente entre las ciencias básicas y la medicina clínica porque
es la base científica de toda la medicina.

Importancia de la Patología:
La Patología es muy importante porque abarca el conocimiento para entender las
alteraciones funcionales (Fisiopatología), morfológicas (Anatomía Patológica e
Histopatología), químicas y metabólicas (Patología Química), causadas por agentes
biológicos y virus (Patología de Enfermedades Infecciosas), por alteraciones genéticas
(Patología Molecular), por errores del desarrollo (Teratología), por reacciones
inmunológicas (Inmuno-Patología), por transformación neoplásica (Patología Oncológica)
y las relaciones entre ellas y se conforma de esta manera como el fundamento científico
de la medicina clínica. Estas divisiones artificiales no son excluyentes entre sí, el estudio de
la Patología requiere del entendimiento y correlación de todas ellas.

Utilidades en la formación del médico:
    1. Permite diferenciar a un verdadero medico de un curandero.
    2. Proporciona un marco conceptual para poder entender los problemas de salud
       más importantes del país y de esta forma realizar una atención integral del
       paciente.
    3. Es un eje en torno al cual giran las ciencias básicas y nos abre las puertas a la
       clínica, en donde se complementan muchas áreas del saber.

2) Enumerará las etapas de la Patología: Humoral, orgánica tisular, celular y molecular;
   conocerá la época en que transcurrió, en qué consiste cada una de estas etapas. Y
   quién fue su máximo exponente.




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Etapas de la Patología:

    Etapa humoral
   Su origen se radica en Empédocles (alrededor de 494-434 antes de Cristo): médico,
   investigador de la naturaleza y vidente. Resumió los conocimientos obtenidos con
   respecto a las diferentes materias del mundo, tal como habían sido imaginadas por
   algunos filósofos naturistas pre-socráticos en una teoría universal, declina en el siglo
   XVI con el estudio del cuerpo humano por los anatomistas del renacimiento.
   La teoría humoral, identifica los 4 elementos de la naturaleza con los 4 humores del
   organismo: bilis amarilla ó colé; sangre ó hema; bilis negra ó atrabilis y flema ó pituita.
   Cuyas combinaciones y predominio condicionan los diversos aspectos de la
   enfermedad. La salud es el resultado del equilibrio entre estos humores.

    Etapa orgánica
   La anatomía patológica tiene su origen durante el Renacimiento europeo entre 1450 y
   1600 de nuestra era, fundamentalmente gracias a los trabajos de exploración y
   descripción del organismo humano por anatomistas de la época con Andreas Vesalius
   quien en 1543 publica su libro La Fábrica del cuerpo humano, obra que destruye
   numerosos conceptos galénicos erróneos, al demostrar que sus observaciones no
   correspondían al cuerpo humano por estar realizadas sobre animales.
   Al generalizarse la práctica y observación anatómica, se identifican mayores datos
   sobre las modificaciones estructurales de los órganos lesionados por diversas
   patologías, ignorándose en que momento el médico renacentista deja de explorar el
   cuerpo humano con afán de conocimiento puramente anatómico y se sumerge en
   busca de la enfermedad.
   Antonio Benivieni (1440-1505) Pionero de la Anatomía Patológica, trata por primera
   vez de relacionar la sintomatología de la enfermedad, que condujo al sujeto a la
   muerte, con las observaciones de la autopsia. Su libro, De las causas ocultas y
   milagrosas de las enfermedades y su curación describe numerosas observaciones de
   patología microscópica y 15 estudios de autopsia.
   Giovanni Batista Morgagni (1682-1771) conforma sobre bases sólidas la Anatomía
   Patológica como ciencia, organizando la investigación experimental y la interpretación
   clínica, demostrando la correlación entre alteración anatómica local y la manifestación
   clínica de la enfermedad. Establece en los órganos el sitio de la enfermedad y la
   variedad de los síntomas por la lesión de los diversos órganos afectados. En 1760
   publica su libro Sobre los lugares y las causas de las enfermedades indagados a través
   de la anatomía, extensa obra que contiene historias clínicas y autopsias de más de 700
   casos con detalladas descripciones macroscópicas de aneurismas, cirrosis hepática y
   hemorragia cerebral entre otros.


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El lapso entre los trabajos de Benivieni y Morgagni es mediado por numerosos
médicos como Jean Fernell (1749 - 1558) y Teófilo Boneto (1620 - 1671), realizando
más de mil autopsias, de cuyos trabajos e investigaciones culminan con la maravillosa
obra de Giovanni Battista Morgagni.

 Etapa Tisular
La utilización de lentes ópticos con fines científicos por Galileo en el siglo XVI, culmina
con la invención del microscopio, instrumento con el cual la medicina obtiene un
invaluable colaborador en la investigación de las estructuras corporales y composición
microscópica.
El primer microscopio compuesto fue construido por Hans y Zaccharis Janssen en
Holanda entre 1590 y 1610, perfeccionado por el italiano Giuseppe Campani que en
1662 construye un microscopio que consta de un ocular y un lente objetivo. Robert
Hooke en 1665 proyecta un sistema de iluminación, en tanto que Marcello
Malphighi, creador de la anatomía microscópica, descubre la existencia de capilares
en el pulmón de rana en 1661 y los corpúsculos sanguíneos en 1665.
El holandés Antonio Van Leewenhôek describe protozoarios y bacterias en 1673 con
un instrumento extremadamente simple. A fines del siglo XVII John Marshall en
Inglaterra introduce un condensador de luz al microscopio.
Javier Bichat (1771 - 1802) por sus numerosas observaciones de los tejidos
corporales, fundamenta las bases de la histología moderna. Postula que los órganos
están formados por estructuras llamadas “tissu”, que clasificó en 21 tipos, los cuales
pueden formar parte de diferentes órganos y que por esa razón, la lesión de órganos
diversos se manifiesta con síntomas semejantes. Sus observaciones aparecen
recopiladas hacia 1800 en su libro Tratado de las membranas. Esta importante
contribución científica de Bichat establece que los tejidos son la unidad básica de
todo ser humano.
Mattehew Baillie (1761 - 1823) publica en 1803 su libro Anatomía Patologica de las
partes más importantes del cuerpo humano, que fue el primer texto ilustrado con
figuras referentes a procesos patológicos, basados en la colección de piezas
anatómicas preparadas por él y su tío el médico John Hunter.


 Etapa celular
1800 encontró a la patología basada en la lesión anatómica asociada a la observación
clínica de la enfermedad, siendo insuficiente el estudio descriptivo macroscópico,
restaba analizar la estructura microscópica de los tejidos, alcanzando pleno desarrollo
hacia la segunda mitad del siglo XIX. Previo a 1850, aparecieron algunos tratados de




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    microscopía y científicos como Rokitansky, Henle y Raspall, investigaron las
    alteraciones celulares producidas por la enfermedad.
    Rudolf Virchow (1821 - 1902) científico alemán y una de las figuras más importantes
    de la medicina del siglo XIX. En 1845 fue nombrado titular de anatomía patológica en
    Wuzburgo, cátedra recién fundada y primera de la disciplina en Alemania. Se convirtió
    en director del primer instituto patológico en 1856 y para 1858 aparece su libro
    Patología Celular , en el cual la tesis central de Virchow es la concepción celular del
    organismo y que tanto en el estado de salud como en el de enfermedad, toda acción
    emana de la célula. Virchow al complementar, sistematizar y consolidar la teoría del
    daño celular, establece las bases modernas de la patología microscópica.


    Etapa ultraestructural
    El progreso de las disciplinas científicas depende en gran parte de mejores
    instrumentos de observación. El siglo XX marca un período de refinamiento del
    microscopio que conduce a la aplicación de nuevos métodos de investigación,
    haciendo posible un cambio fundamental del aspecto puramente descriptivo de los
    tejidos enfermos al estudio estructural ó morfológico de los procesos patológicos
    humanos. El nacimiento del primer microscopio electrónico ocurre en abril de 1931,
    en Alemania por Ernesto Ruska y Max Knoll , su ampliación fue sólo de 17 diámetros,
    perfeccionado en 1933 obtuvieron una resolución de 12,000 diámetros y actualmente
    se alcanzan resoluciones de hasta 160,000 diámetros, comparados con las
    resoluciones del microscopio óptico de 1500 diámetros.
    El ultramiscroscopio es utilizado en la investigación y en la industria a partir de 1939,
    ha revelado mucho de lo que se conoce acerca de la morfología subcelular en
    organelos como mitocondrias, lisosomas ó ribosomas. La microscopía electrónica ha
    probado ser un instrumento indispensable en la investigación y diagnóstico
    patológico, permitiendo una comprensión más integral de la patogénia de las
    enfermedades.




3) Conocerá las ramas de la patología y sus diferentes disciplinas:
   a) Histopatología: Histoquimica, citología, inmunología, hematología, microbiología,



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   parasitología, patología forense.
   Definirá cada una de estas disciplinas.
   b) Patología clínica (Química clínica, microbiología clínica, parasitología,
   hematología, Banco de Sangre e inmunohematología, inmunología, citogenética).


Ramas de la patología:

    Patología General: Se ocupa de las reacciones de las células y los tejidos frente a
     estímulos anormales y defectos hereditarios, que son las causas fundamentales de
     las enfermedades.

    Patología Sistémica: Analiza las alteraciones de los órganos y tejidos
     especializados, responsables de los trastornos que sufren estos órganos.



Disciplinas:

      Histopatología: Es una rama de la patología que trata de la estudio de la
       enfermedad en una sección de tejido. El tejido se somete a una serie de pasos
       antes de llegar a la mesa de los examinadores que verificar microscópicamente
       para llegar a un diagnóstico en particular. Para lograr esto, es importante que el
       tejido debe estar preparado de tal de manera que sea lo suficientemente grueso o
       delgado que se examina al microscopio y todas las estructuras en un pañuelo de
       papel se pueden diferenciar.
        El objetivo de los debates posteriores se dar a conocer al personal con su
       responsabilidad, los detalles básicos de la manipulación de tejidos, el
       procesamiento y tinción.

      Histoquímica: Rama de la histología que se ocupa de la identificación de los
       componentes químicos en las células y tejidos.

      Citología: Es el estudio de la célula.


      Inmunología: Ciencia biológica que estudia todos los mecanismos fisiológicos de
       defensa de la integridad biológica del organismo. Dichos mecanismos consisten
       esencialmente en la identificación de lo extraño y su destrucción. La inmunología
       también estudia los factores inespecíficos que coadyuvan a los anteriores en sus
       efectos finales.
      Hematología: Es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los
       pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e




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    investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios
    linfáticos, bazo, etc) tanto sanos como enfermos.

   Microbiología: Es el estudio de los organismos microscópicos, deriva de 3 palabras
    griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente
    significan el estudio de la vida microscópica.

   Parasitología: Es una rama de la biología que estudia el fenómeno del parasitismo.
    Por un lado, estudia a los organismos vivos parásitos, y la relación de ellos con sus
    hospedadores y el medio ambiente. Convencionalmente, se ocupa sólo de los
    parásitos eucariotas como son los protozoos, helmintos (trematodos, cestodos,
    nematodos) y artrópodos; el resto de los organismos parásitos (virus, procariotas y
    hongos) tradicionalmente se consideran una materia propia de la microbiología.
    Por otro lado, estudia las parasitosis o enfermedades causadas en el hombre,
    animales y plantas por los organismos parásitos.

    Patología Forense: Conjunto de conocimientos médicos que se aplican en los
    procesos patológicos, los cuales tienen relación con la aplicación del derecho.


   Patología clínica:
    Es la rama de la patología que examina las respuestas específicas de los órganos y
    tejidos especializados frente a estímulos más o menos bien definidos.
    Química clínica: Se ocupa del estudio de los aspectos químicos de la vida humana,
    con la aplicación de los métodos de laboratorio para el diagnóstico, el seguimiento,
    el control de tratamiento, la prevención y la investigación de la enfermedad.

    Microbiología clínica: Es la ciencia de la biología dedicada a estudiar los
    organismos que son sólo visibles a través del microscopio: organismos procariotas
    y eucariotas, simples es decir los microbios.

   Parasitología: Es una rama de la biología que estudia el fenómeno del parasitismo.
     Por un lado, estudia a los organismos vivos parásitos, y la relación de ellos con sus
     hospedadores y el medio ambiente. Convencionalmente, se ocupa sólo de los
     parásitos eucariotas como son los protozoos, helmintos (trematodos, cestodos,
     nematodos) y artrópodos; el resto de los organismos parásitos (virus, procariotas
     y hongos) tradicionalmente se consideran una materia propia de la microbiología.
     Por otro lado, estudia las parasitosis o enfermedades causadas en el hombre,
     animales y plantas por los organismos parásitos.

   Hematología: Es la especialidad médica que se dedica al tratamiento de los
    pacientes con enfermedades hematológicas, para ello se encarga del estudio e
    investigación de la sangre y los órganos hematopoyéticos (médula ósea, ganglios
    linfáticos, bazo, etc) tanto sanos como enfermos .




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1. Banco de Sangre: Es cualquier organización dedicada a recolectar, almacenar,
   procesar o suministrar sangre. Trabajan mediante la donación de sangre, cuyas
   muestras en su mayoría son separadas en componentes para después ser congeladas
   o refrigerados. La sangre total se conserva en refrigeración a temperaturas de 2-6º C
   por 28 días; El concentrado eritrocitario o paquete globular se almacena en las mismas
   condiciones que la sangre total, solo que por 42 días. El concentrado plaquetario sólo
   se puede conservar 5 días a 22º C. El plasma fresco se congela por debajo de -30º C. El
   crioprecipitado se obtiene de una congelación rápida y luego una descongelación
   lenta. Existen además algunos productos que provienen del plasma como la albúmina,
   concentrado de antitrombina III, factor IX, gammaglobulinas e inmunoglobulinas.

2. Inmunohematología: Es el estudio de las propiedades antigénicas de los elementos
   figurados de la sangre y de los humores, y de los diferentes anticuerpos que pueden
   existir en el suero sanguíneo (aglutininas, etc.).

3. Inmunología: Ciencia biológica que estudia todos los mecanismos fisiológicos de
   defensa de la integridad biológica del organismo. Dichos mecanismos consisten
   esencialmente en la identificación de lo extraño y su destrucción. La inmunología
   también estudia los factores inespecíficos que coadyuvan a los anteriores en sus
   efectos finales.
4. Citogenética: Parte de la genética que estudia la apariencia microscópica de los
   cromosomas y sus anomalías en la enfermedad.



4) Conocerá el método de procesamiento de los tejidos y citologías. Conocerá los
   pasos del método de inclusión en parafina, y el método de coloración de las
   citologías:
   Papanicolaou. Enumerará las coloraciones histoquímicas más usadas; y conocerá
   cuáles son las indicaciones de estas: Hematoxilina y eosina, papanicolaou,
   Brown-Brenn, PAS, Grocott, Fite Faraco, tricrómico, Rojo Congo, Cristal violeta,
   Sudan IV, reticulina.



                              Procesamiento de los Tejidos

Pasos del método de inclusión en parafina:

 Para la inclusión de muestras que han de observarse con microscopía óptica se utiliza
 sobre todo la parafina, y en menor medida la celoidina, como medio de inclusión.
 Vamos a describir los pasos para la inclusión en parafina de muestras de tejido
 previamente fijadas.




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     La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que está formada por mezclas de
hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente es sólida y su punto de fusión puede
variar entre 40 y 70 °C según su composición de la mezcla de hidrocarburos. Resultan
distintos tipos de parafinas a temperatura ambiente que se emplean según las
necesidades. Así, parafinas más duras a temperatura ambiente tienen un punto de
fusión mayor, mientras que las más blandas uno menor. Es recomendable una dureza
mayor para incluir muestras más duras. Las parafinas más usadas tienen un punto de
fusión en torno a los 60 °C. Podemos también modificar las características de las
parafinas añadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad, etcétera.

     La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos están formados
principalmente por agua. Además, la mayoría de los fijadores son soluciones acuosas.
Esto implica que para que la parafina líquida pueda penetrar completamente en el
tejido ha de sustituirse el agua por un solvente orgánico. Esto se consigue mediante la
deshidratación del tejido en alcoholes, normalmente metanol, de gradación creciente
hasta alcohol de 100°. Posteriormente se transfiere el tejido a un líquido que sea
miscible tanto con el alcohol de 100° como con la parafina, denominado sustancia
intermediaria, como es el benceno, xileno, tolueno o el óxido de propileno, entre otros.
Estas sustancias son normalmente aclarantes por lo que comprobando la translucidez
de la pieza podemos cerciorarnos de la penetración de la sustancia intermediaria en el
tejido. El tiempo de incubación de la pieza algunos de estos líquidos intermediarios
como el tolueno o xileno no debe ser excesivo puesto que estas sustancias endurecen
la pieza y provocar problemas hacer las secciones.

Por último se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa regulada a la
temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres pasos por parafina para
favorecer una buena impregnación. El tiempo que duran dichos pasos depende de lo
volátil que sea el líquido intermediario y lo grande que sea nuestra pieza. Será mayor
cuanto menos volátil es el líquido intermediario o mayor sea la muestra de tejido. Hay
que tener en cuenta que un tiempo excesivo en parafina puede endurecer el tejido.
Tras el embebimiento completo de la muestra se vierte parafina líquida en un molde,
se intruduce la muestra y se coloca según la orientación deseada de corte y se deja
solidificar a temperatura ambiente.




    Un protocolo común de inclusión en parafina es el siguiente:




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Esquema de la inclusión en parafina de una muestra de tejido previamente fijada. Los
tiempos de incubación en cada sustancia pueden variar en función del tamaño de la
muestra, tipo de tejido o, por ejemplo, el líquido intermediario. Sin embargo, los pasos
son comunes a cualquier inclusión en parafina.




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Pasos del método de coloración de las citologías: Papanicolaou.

La coloración de Papanicolaou es la técnica por excelencia de la citología general como la
hematoxilina eosina lo es para el método histológico. Les presento aquí la técnica original
completa y las variaciones prácticas y cotidianas así como otras recetas prácticas que
espero les resulten útiles. Para lograr una buena preparación citológica es necesario que la
toma o recolección del material sea adecuada, una correcta y rápida fijación, y un buen
proceso de coloración.

Para la Coloración de Papanicolaou es necesario que los preparados sean previamente
fijados en alcohol 96º. El material extendido en el portaobjeto debe fijarse
inmediatamente antes que comience la desecación. Lo ideal es sumergirlo en alcohol 96º
no menos de 10 minutos.

Aerosoles: Hay fijadores para uso en laboratorio y se utilizan también los fijadores para el
cabello en aerosol (spray). Si se utilizan estos últimos es aconsejable optar entre las
marcas más económicas porque tienen más alcohol y menos laca. Se rocía el extendido en
forma uniforme durante algunos segundos a una distancia no menor a 15 - 20 cm. Los
preparados se secan bastante rápidamente pero si se los envuelve en papel antes que se
sequen se suele adherir las fibras de celulosa del papel. Los preparados fijados de esta
manera pueden conservarse hasta dos semanas antes de colorear y esto hace posible la
remisión a distancia en caso de no contarse con un laboratorio próximo.

¿Cómo recuperar la muestra cuando el material se dejó secar al aire?

El extendido puede re-hidratarse siempre y cuando no haya habido fijación previa.

Rehidratación:

Procedimiento: Colocar la muestra de 3 a 5 minutos en una solución a/a (por partes
iguales) de agua destilada y glicerina.
Ejemplo 50 ml de agua destilada y 50 ml de glicerina. (3 - 5 minutos)
A continuación escurrir y fijar en alcohol 96º o spray fijador.
El agua hidrata y la glicerina devuelve elasticidad a las células.

¡De no contar con estos elementos!... Sumergir la muestra para la hidratación
directamente en agua corriente durante 3 - 5 minutos y fijar con alcohol 96º o spray.
Luego colorear como de costumbre.



Coloración de Papanicolaou: El Método de Tinción según Papanicolaou es de gran nobleza
y ha tolerado infinidad de variaciones resultantes en productos de buena calidad, aptos
para la observación microscópica minuciosa que requiere la citología. Es un método de



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coloración muy refinado, científicamente probado y comprobado que requiere en su
fórmula original una gran cantidad de pasos y da un producto de absoluta sutileza de
colores y transparencia.

Método Original de Coloración de Papanicolaou:
1. Alcohol etílico 96º 15 Seg.
2. Alcohol etílico 70º 15 Seg.
3. Alcohol etílico 50º 15 Seg.
4. Agua Destilada 15 Seg.
5. Hematoxilina de Harris 6 Min.
6. Agua destilada 10 inmersiones.
7. Sol ácido clorhídrico 0,5% 1 - 2 inmersiones rápidas.
8. Agua destilada 15 Seg.
9. Sol Amoníaco 1,5% en ol 70º La extensión vira al azul.
10. Alcohol etílico 50º 15 Seg.
11. Alcohol etílico 70º 15 Seg.
12. Alcohol etílico 96º 15 Seg.
13. O G 6 (orange) 2 Min.
14. Alcohol etílico 96º 10 inmersiones.
15. Alcohol etílico 96º 10 inmersiones.
16. EA 50 (36) Eosina amarillenta) 3 Min. (Usar EA 65 para orinas y esputos)
17. Alcohol etílico 96º (10 inmersiones)
18. Alcohol etílico 100º (10 inmersiones)
19. Xilol (10 inmersiones)
20. Montaje: Con Bálsamo de Canadá y cubrir con cubreobjetos de vidrio de la medida
adecuada para cobertura total de la muestra.

CUBREOBJETOS: Los cubreobjetos de las muestras cérvico vaginales, no deben ser
menoers a 24 x 50mm. Tamaños menores indican la escasez de la muestra. En el Hospital
Nac. Prof. Dr. A. Posadas las muestras ginecológicas se cubren con cubreobjetos de 24 x
60mm

Recomendación: Es muy importante respetar el tiempo de la Hematoxilina. La
sobrecoloración de los núcleos produce hipercromasia y puede ser causa de
interpretación errónea de alteraciones nucleares y sobrediagnóstico. Los tiempos de
coloración con OG6 y EA en cambio son menos exigentes porque actúan por saturación y
el exceso de tiempo no tiene consecuencias tan dramáticas como la sobretinción con
hematoxilina.



Tinción rápida de Papanicolaou (método modificado)
1. Alcohol 96º
2. Agua corriente 10 pasajes.



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3. Hematoxilina 40 Seg.
4. Virar en agua corriente hasta que esta quede transparente sin trazas de colorante.
5. Alcohol 96º 10 pasajes.
6. OG6 40 Seg.
7. Alcohol 96º 10 pasajes.
8. EA 40 Seg.
9. Alcohol 96º 10 pasajes.
10. Alcohol 100º 10 pasajes.
11. Alcohol 100º/xilol a/a 10 pasajes.
12. Xilol 10 pasajes.
13. Montar.

Coloración cotidiana de Papanicolaou (método modificado)
1. Alcohol 96º
2. Agua corriente 10 pasajes.
3. Hematoxilina 45 Seg.
4. Virar en agua corriente hasta que esta quede transparente sin trazas de colorante.
5. Alcohol 96º 10 pasajes.
6. OG6 3 Min.
7. Alcohol 96º 10 pasajes.
8. EA 3 Min.
9. Alcohol 96º 10 pasajes.
10. Alcohol 100º 10 pasajes.
11. Alcohol 100º 10 pasajes.
12. Dejar secar al aire
13. Montar.

Otra manera:
1. Alcohol 96º
2. Agua corriente 10 pasajes.
3. Hematoxilina 45 Seg.
4. Alcohol 96º 10 pasajes.
5. OG6 y EA a/a 3 Min.
6. Alcohol 96º 10 pasajes.
7. Alcohol 100º 10 pasajes.
8. Alcohol 100º y xilol 10 pasajes.
9. Xilol
10. Montar


Medio de montaje sintético:
Distirene (plástico) 100gr.
Dibutilftalato 25gr.
Tolueno o xilol 350 ml.



                                            13
Mezclar y dejar que la solución esté totalmente transparente y homogénea lo que
garantiza una dilución total de los solutos.

Conservador de Saccomano:
Polietilenglicol (en escamas) 20 Gr.
Alcohol 50% 1000ml (un litro)

Polietilenglicol en Pasta:
Colocar en baño de María o estufa, medir en probeta 20 ml y completar hasta 1.000 ml
con alcohol 50%       Para preparar la dilución al 50% (para un litro de solución) mezclar
500 ml de alcohol 100 y 500 ml de agua

Hematoxilina de Harris:
Es un colorante nuclear; tiñe la membrana nuclear y la cromatina de color azul oscuro a
rojizo purpúreo y el nucleolo de color rojo, rosado o naranja. Con otras soluciones de
Hematoxilina se puede obtener resultados similares. Se obtiene buenos resultados cuando
se ajustan bien los tiempos de coloración.

La ventaja de la Hematoxilina de Harris es que resulta fácil de preparar y envejece
(madura) con rapidez por lo cual se puede utilizar en 24 horas.

• Hematoxilina 5gr.
• Aluminio de amonio 100gr.
• Agua destilada 1.000ml
• Óxido de mercurio 2,5gr

Disolver la hematoxilina en el alcohol.

Disolver el aluminio de amonio en agua destilada. Calentar la solución hasta la ebullición.

Añadir la Solución de hematoxilina mezclando con varilla de vidrio y calentar otra vez
hasta llegar a ebullición.

Retirar del calor y añadir el Óxido                de   mercurio;   remover     ligeramente.
La solución vira al color rojizo púrpura oscuro.

Sumergir el matraz o recipiente en un baño de agua fría para bajar la temperatura
rápidamente.

Una vez enfirada filtrar la solución en un frasco oscuro y se deja en reposo no menos de
24 horas para que envejezca (es decir para que madure).

ORANGE G (OG6):


                                             14
El orange G y la solución EA (eosina amarillenta) se utilizan para teñir los citoplasmas.
Ambas son soluciones alcohólicas y el alcohol hace más transparentes a los citoplasmas.
Tiñen por saturación.

Solución madre: Es una solución alcohólica al 95% para el colorante Orange G.

El Orange G se presenta en polvo y no se diluye inicialmente en alcohol. Se prepara
primero una solución acuosa y luego se diluye.

Se prepara una solución al 10% de Orange G en agua destilada y se remueve hasta que se
disuelva el polvo. Conservar en lugar frío y oscuro.

Solución acuosa o madre 50ml
Alcohol etílico 96º 950ml
Ácido fosfotungstíco 0,15gr
Conservar tapado en lugar fresco y oscuro.

Solución alcohólica EA (Eosina verde claro y marrón de Bismarck)

EA 36 Solución acuosa

Verde claro S T 2% amarillento
Marrón Bismarck y al 10%

Almacenar en lugar frío y oscuro 24 a 48 horas.

Para preparar Solución EA 36

Solución reserva Verde claro S T al 0,1% 450ml
Solución reserva marrón Bismarck al 0,5% 100ml
Solución de Eosina al 0,5% 450ml
Ácido fosfotúngstico 2gr
Solución saturada de carbonato de litio 10 gotas

Mezclar bien tapar y almacenarlo en frasco oscuro.

Filtrar antes de utilizar.

Conservación de líquidos

Lo ideal es procesar los líquidos sin conservantes, tal cual se reciben en fresco. De no ser
posible es necesario evitar la histolisis.

Para 10 o 15 ml de muestra utilizar 2 ml de Conservador de Saccomano.
Duraciónde la fijación: 15 días.


                                             15
Heladera (el frío es un método físico de conservación. La heladera común tiene una
temperatura de 4º C): 24 a 48 horas. La eficacia de éste método es menor.

La coloración de Papanicolaou permite aplicar otras técnicas sobre la misma sin necesidad
de decolorar, por ejemplo:
•Inmunocitoquímica
• Ziehl Neelsen

Cuando es necesario quitar el color se puede utilizar la siguiente técnica:
Permanganato       de      Sodio    1gr    en      500       ml     de     agua destilada
Ácido Oxálico 2 a 5 gr en 100 ml de agua destilada.
Colocar los preparados en la solución de Permanganato de Sodio 10 minutos, lavar con
agua y luego colocarlos en la solución de ácido oxálico 3 minutos. Lavar con agua y
comenzar la fijación y nueva coloración.


Coloraciones histoquímicas más usadas y sus indicaciones

                       1. Hematoxilina y eosina:
El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o
básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos Azul y Púrpura,como por ejemplo los
núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos
de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

Técnica

1.   Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina.
2.   Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°).
3.   Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol
4.   Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar
     excesos y se pasa rápidamente por alcohol ácido.
5.   Se lava nuevamente
6.   Se sumerge 30 segundos en eosina.
7.   Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°).
8.   Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final.

Resultados

     1.   Núcleo celular: Azul
     2.   Citoplasma: Rosa
     3.   Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
     4.   Glóbulos rojos: Rojo, anaranjado
     5.   Fibrina: Rosa



                                              16
2. Papanicolau:
   La citología de cérvix, también llamada Prueba de Papanicolau o triple toma de Witt es la
   técnica más utilizada para detección precoz de cáncer de cuello uterino y para lesiones
   precancerosas. Se basa en el hecho de que las células de las capas superficiales del
   epitelio cervical se descaman continuamente. Otras indicaciones de esta técnica son:
   diagnóstico de infecciones genitales y valoración del nivel hormonal.

   El factor de riesgo más importante para padecer cáncer de cérvix es la infección por el
   VPH , más probable si ha habido relaciones sexuales a muy temprana edad, número
   elevado de parejas sexuales, y relaciones sexuales con hombre no circuncidados.Otros
   factores de riesgo para padecer cáncer de cuello uterino son: fumar, infección por VIH,
   infección por Clamidia, alimentación pobre en frutas y verduras, ACO largo tiempo,
   embarazos múltiples, condición socioeconómica baja, exposición a Dietilbestrol antes de
   nacer y antecedentes familiares de cáncer de cuello de útero.

   Se necesita:
       1. Mesa ginecológica.
       2. Un espéculo de metal o plástico (estándar o virginal).
       3. Una espátula de aire.
       4. Un pequeño cepillo endocervical o torunda de algodón.
       5. Porta con banda esmerilada.
       6. Fijador.
       7. Foco luminoso.

   Recomendaciones previas a la mujer:
   Abstenerse de actividad sexual con penetración durante las 48 horas anteriores a la
   prueba.
   Debe haber finalizado la menstruación 4-5 días antes.
   No hacer lavados vaginales ni utilizar desodorantes vaginales. Basta con lavarse
   externamente con agua y jabón.
   No usar tratamientos tópicos en los 5-7 días previos a la prueba (óvulos, espermicidas,
   cremas vaginales).

    Instrucciones a la paciente previas a la citología:
   Abstenerse de relaciones sexuales en las 48 horas previas a la toma.
   Debe haber finalizado la menstruación 4-5 días antes.
   Lavarse externamente con agua y jabón, no hacer lavados internos ni con desodorantes
   vaginales.




                                              17
   No usar tratamientos topicos en 5-7 días antes a la prueba (óvulos, espermicidas, cremas
   vaginales).

   Procedimiento:
   La mujer ha de estar colocada en posición ginecológica, procurando que esté relajada. Se
   separan con una mano los labios vulvares y se introduce el espéculo con la otra ,en
   sentido longitudinal a la vulva.Se rota el espéculo 90º.Un vez introducido se abre hasta la
   completa visualización del cérvix, y se fija el espéculo.

   Se hacen 3 tomas:

     1. Fondo de saco vaginal posterior, con la parte semicircular de la espátula, luego se
        extiende sobre el porta, en la banda de la izquierda.
     2. Toma de exocérvix, girando la espátula, en su parte lobulada, alrededor del cérvix,
        extendiendo la muestra en la parte central del porta.
       3. Toma del endocérvix con la torunda o cepillo endocervical , una vez introducido en
          el orificio cervical, y extendemos la muestra en la banda derecha. Después se
          procede a la fijación de las tomas con spray, realizando la pulverización a 10 cm del
          porta.

   Advertencias:
   No hacer exploración bimanual antes de la toma, puede alterar el resultado.
   En mujeres virgenes o introito vaginal estrecho, utilizaremos espéculo. virginal,podemos
   lubrificarlo con agua si es necesario. (Es poco frecuente la indicación de citología cervical
   en mujeres vírgenes).
   No usar lubricantes por posible contaminación de la muestra.
   Tras realizar la citología debemos advertir a la paciente que puede tener un pequeño
   sangrado, sin significación patológica.

4. Brown-Brenn:
   Es un método de tinción diferencial de las bacterias gran-positivas y gram-negrativas en
   las secciones de tejidos, sino que utilizauna versión modificada de la tinción de Gram de
   cristal violeta, yodo, yodo de Gram y fucsina básica.
   Procedimiento:
   1. Desparafinar e hidratar al agua destilada.
   2. Colocar los portaobjetos en la tinción de rack, gota de cristal violeta mancha sobre el
   tejido sección, teñir durante 1 minuto.
   3. Lavar con agua corriente.
   4. Lugol, 1 minuto.
   5. Lavar con agua corriente.



                                                18
   6. Secciones de secar, el aliento en la sección y rápidamente verter más acetona sección
   hasta que no se escapa calor.
   7. Lavar con agua corriente.
   8. Colocar el portaobjetos en la gradilla de tinción, la caída de fucsina en secciones de
   tejido, tinción de 3 minutos.
   9. Lavar con agua corriente, seque con toques suaves, pero no seque por completo.
   10. Dip rápidamente en acetona, dos salsas.
   11. Dip directamente en el ácido pícrico-acetona hasta que el color de un “salmon”
   12. Dip rápidamente en dos cambios de acetona
   13. Deje secar al aire, inmersos en xileno, y tapar.

   Resultados:

    Las bacterias Gram +, Nocardia y Actinomyces               Azul
   Filamentos

    Las bacterias Gram-, los núcleos                           Rojo

    Elementos adicionales de tejido                            Amarillo




5. PAS:
   La técnica histoquímica más empleada es la reacción de PAS (Periodic Acid Schiff). Se
   utiliza para la detección de hidratos de carbono, libres o conjugados, en los tejidos cuando
   están en cantidades relativamente grandes. La modificación química del tejido consiste en
   la oxidación mediante el ácido periódico de los enlaces entre los carbonos próximos que
   contienen grupos hidroxilos. Esto provoca la formación grupos aldehídos que serán
   reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinará con ellos para dar un color
   rojizo brillante. Entre los componentes del reactivo de Schiff está la pararosanilina (un
   componente de la fucsina básica) tratada con ácido sulfúrico. Una gran ventaja de la
   tinción histoquímica PAS es su capacidad de discriminación de tipos de glúcidos con
   pequeñas modificaciones de la técnica.



6. Grocott:
   Es una tinción a base de metenamina de plata. Se utiliza para la tinción de hongos y de los
   quistes del Pneumocystis carinii.

   Objetivo: Demostrar Hongos.
   Corte: 4-6 micras.



                                                19
Fijador: Formol al 10%

Reactivos:
Acido Crómico al 4%.
Acido Crómico (Trióxido de Cromo)…4gr.
Agua…100ml.
Nitrato de Plata al 5%.
Nitrato de Plata…5gr.
Agua…100ml.
Metenamina al 3%.
Metenamina…3gr
Agua…100ml.
Bórax al 5%.
Bórax…5gr.
Agua…100ml.
Solución Nitrato de Plata-Metenamina (Stock).
Nitrato de Plata al 5%…5ml.
Metenamina al 3%…100ml.
Nota: Agitar bien y guardar en refrigeración.
Solución Nitrato de Plata-Metenamina (Trabajo).
Nitrato de Plata-Metenamina (Stock)…25ml.
Agua Bidestilada…25ml.
Bórax al 5%…2ml.
Bisulfito de Na al 2%.
Bisulfito de Sodio…2gr.
Agua…100ml.
Cloruro de Oro al 0.2%.
Solución Madre de Cloruro de Oro al 1%…20ml.
Agua…80ml.

Nota: La solución madre se hace con una ampolla de 1ml de Cloruro de Oro en 99ml de
agua.
Verde Luz al 0.2%.
Verde Luz…0.2gr.
Agua…100ml.

Procedimiento:
1.-Desparafinar é hidratar.
2.-Acido Crómico al 4%…1hr.


                                          20
   3.-Lavar en Agua.
   4.-Solución Nitrato de Ag-Metenamina (Trabajo) a 60*C…1hr
   5.-Lavar en Agua.
   6.-Cloruro de Oro al 0.2%…3min.
   7.-Lavar en Agua.
   8.-Bisulfito de Sodio 2%…1min.
   9.-Lavar en Agua.
   10.-Verde luz al 0.2%…1min.
   11.-Lavar en Agua.
   12.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

   Resultados:
   Mucina…Gris.
   Demás tejido…Verde.
   Hongos…Negro

1. Fite Faraco:
   Es necesario para detectar bacilos acido alcohol resistente.

   Objetivo: Demostración de BAAR.
   Fijador: Formol al 10%.
   Corte: 4-6 micras.

   Reactivos:
   Carbol-Fucsina
   Agua…50ml.
   Fenol (fundido, a baño maría)…2.5ml.
   Alcohol ABS…5ml.
   Fucsia Acida…0.5gr.
   Acido Sulfúrico al 5%
   Acido Sulfúrico…5ml.
   Agua…95ml.
   Verde Brillante al 1%
   Verde Brillante…1gr.
   Agua…100ml.
   Solución Xilol-Aceite de Oliva
   Xilol…50ml.
   Aceite de Oliva…50ml




                                                21
   Procedimiento:
   1.-Xilol-Aceite de Oliva a 60*C…30min.
   2.-Lavar en Agua Jabonosa.
   3.-Lavar en Agua.
   4.-Carbol-Fucsina…20min.
   5.-Lavar en Agua.
   6.-Decolorar con Acido Sulfúrico (por goteo).
   7.-Lavar en Agua.
   8.-Verde Brillante…1min.
   9.-Secar al Aire.
   10.-Aclarar y Montar.

   Resultados:
   BAAR…Rojo Brillante.
   Demás Tejido…Verde.



2. Tricromo:
   El tricrómico de Gomori en un paso es un método idóneo para teñir fibrina, tejido
   muscular y citoplasmas, donde destaca esencialmente el condrioma como un fino
   granulado rojizo. Sin embargo, por su pH ácido, que se encuentra entre 2.5 y 2.7
   (ligeramente por encima del óptimo para la tinción del colágeno), se presenta como una
   tinción incompleta y difusa del componente fibrilar más fino (membrana basal y finas
   fibras reticulares).

   Fundamento

   Esta técnica combina un colorante plasmático (cromotropo 2R) y un colorante de fibras
   conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solución de ácido fosfotúngstico y ácido
   acético glacial. El tratamiento previo de las secciones con solución de Bouin caliente
   intensifica la tinción. El ácido fosfotúngstico favorece la coloración roja de músculo y
   citoplasmas. Las fibras de colágeno toman los iones de tungstato formando un complejo al
   que se une el verde luz. El baño de ácido acético hace los colores más trasparentes pero
   no altera el balance de color.



   Tejido control y diana




                                               22
Cualquier tejido con componente conectivo dará positivo con este método. El fijador más
utilizado para esta técnica es el Bouin, pero cualquier otro también es válido. El grosor de
corte ideal de las secciones es de 6 micras para tejidos que están incluidos en parafina.


Reactivos

Para llevar a cabo esta técnica se precisan las siguientes soluciones:

   1. Solución de Bouin: tras la fijación, se debe lavar la muestra en abundante alcohol
      de 70º hasta la decoloración de la misma para asegurar la total eliminación del
      ácido pícrico. Una vez fijado se puede almacenar el tejido en etanol de 80º.
   2. Solución tricrómica:
          1. 0,6 g de cromotropo 2R.
          2. 0,3 g Verde luz
          3. 1 cc de ácido acético glacial.
          4. 100 cc de agua destilada.
          5. 0,8 g de ácido fosfotúngstico.
   3. Solución verde luz (el verde luz puede ser sustituido por el azul de anilina):
          1. 5 g de verde luz.
          2. 250 cc de agua destilada.
          3. 2 cc de ácido acético.
   4. Solución acuosa de ácido acético al 0,5%.
   5. Solución diaria de hematoxilina férrica de Weigert:
   6. Solución matriz A:
          1. 1,0 g de hematoxilina de Weigert en 100 ml de etanol al 95%.
   7. Solución matriz B:
          1. 4,0 g de cloruro férrico al 29%.
          2. 95 ml de agua destilada.
          3. 1 ml de ácido clorhídrico concentrado.

Se deben utilizar a partes iguales cada una de las soluciones matrices. La solución diaria de
la hematoxilina de Weigert puede reutilizarse durante aproximadamente 2 semanas. La
hematoxilina de Weigert puede ser sustituida por la hematoxilina de cromo de Gomori.




Procedimiento



                                             23
   1. Desparafinar e hidratar.
   2. Realizar mordentaje en líquido de Bouin durante 1 hora a 56 ºC o 24 horas a Tª
       ambiente.
   3. Lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.
   4. Teñir con hematoxilina de Weigert (ver variantes) durante 10-13 minutos.
   5. Realizar un lavado prolongado con agua corriente.
   6. Teñir con la solución tricrómica durante 15 minutos.
   7. Diferenciar en la solución de ácido acético al 0,5% durante 15 s (se puede utilizar
       también ácido acético al 1%)
   8. Si las secciones son muy rojas, se diferenciará con una solución de ácido acético al
       1%, a la cual se le agregarán 0,7 gr de ácido fosfotungstico.
   9. Lavar en agua destilada.
   10. Teñir con la solución de verde luz durante 20 o 30 s (ver variantes).
   11. Deshidratar con alcoholes, aclarar con xileno y montar.

Análisis de resultados
        1. Fibras musculares, fibrina y citoplasma: rojo.
        2. Colágeno, cartílago, mucinas y membranas basales: verde.
        3. Núcleos: azul negruzco.


    4. Rojo Congo:
Se trata de una secundarira tinte diazo. Rojo Congo es soluble en agua, produciendo un
color rojo coloidal solución, su solubilidad es mejor en disolventes orgánicos como el
etanol. La tinción de Rojo Congo seguida de visión al microscopio con luz normal o
polarizada (con la que se observa refringencia de color verde manzana) es la técnica más
práctica para demostración de sustancia amiloide.

Aunque hay alguna tinción inmunohistoquímica para demostración de amiloide AA los
resultados son peores que con el Rojo Congo. Debe tenerse en cuenta, sin embargo, que
se puede ver refringencia verde no amiloidea por distintas circunstancias técnicas.



Comportamiento en Solución:

Debido a un cambio de colo de azul a rojo pH 3.0 a 5.2, el rojo Congo se puede utilizar
como indicador de pH.
Dado que este cambio de color es una inversa aproximada de la del fuego , que puede ser
utilizado con el papel tornasol en un truco de magia muy simple: agregar una o dos gotas
de rojo congo a la vez una solución de ácido y una solución de base. Mojar papel tornasol
en la solución roja se enciende azul, mientras que mojar el papel de tornasol azul en la
solución de azul se volverá de color rojo.




                                           24
   Rojo Congo tiene una tendencia a agregarse en soluciones acuosas y orgánicas. Los
   mecanismos propuestos sugieren interacciones hidrofóbicas entre los anillos aromáticos
   de las moléculas de colorante, lo que lleva a un pi-pi apilamiento fenómeno. A pesar de
   estos agregados se presentan en varios tamaños y formas, la "cinta-como micelas" de
   unas pocas moléculas parecen ser la forma predominante (aunque el " micelas "término
   no es del todo apropiado en este caso). Este fenómeno de agregación es más frecuente
   en las concentraciones de alta congo rojo, a la alta salinidad y / o bajo pH.

   Según lo sugerido por su intenso color rojo, rojo congo tiene importantes
   espectrofetometrico propiedades. De hecho, su absorción UV-visible del espectro muestra
   un pico característico, intenso alrededor de 498 nm en solución acuosa, a una
   concentración de medio de contraste bajo. Rojo Congo coeficiente de extinción molar es
   de unos 45.000 [L] / [mol]. [cm] en estas condiciones. Agregación de las fibrillas de
   amiloide tinte y la unión a tiende a desplazamiento al rojo del espectro de absorción,
   mientras que la unión de fibras de celulosa tiene el efecto contrario. Rojo Congo también
   muestra una fluorescencia cuando se une a la actividad de las fibras amiloides, lo que
   tiende a ser utilizado como una herramienta de diagnóstico sensible para la amiloidosis ,
   en lugar de la tradicional histológico birrefringencia prueba.

   En la bioquímica y la histología , rojo congo se usa para manchar preparates
   microscópicos, especialmente como un citoplasma y eritrocitos mancha. Verde manzana
   birrefringencia del Congo teñido de rojo preparates bajo la luz polarizada es indicativo de
   la presencia de amiloide fibrillas. Además, el rojo Congo se utiliza en epidemiología
   microbiológicos para identificar rápidamente la presencia de serotipo 2a virulenta Shigella
   flexneri , donde el colorante se une a la bacteria que es único lipopolisacárido (LPS)
   estructura.


5. Cristal Violeta: Para tinción Gram y tinción simple.

                          1. Cristal                    violeta                           (violeta                        de
                             genciana)....................................................0,5 g
                          2. Agua
                             destilada.................................................................................100
                             ml

   El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana, es el
   nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores de pH y
   colorantes.

   Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil p-rosanilinas. Por la
   mezcla de diferentes versiones, el fabricante puede crear diferentes tonos de violeta en el




                                                         25
colorante final. Cuanto más metilado esté el colorante, su color será de un violeta más
oscuro:

               1. Tetrametilo (cuatro metilos) es conocido como Violeta de metilo 2B, y
                  encuentra usos específicos en química y medicina.
               2. Pentametilo (cinco metilos) es conocido como Violeta de metilo 6B, y es
                  más oscuro como colorante que a 2B.
               3. Hexametilo (seis metilos) es conocido como Violeta de metilo 10B, o
                  específicamente violeta cristal. Es muy más oscura que la 2B, y aún más
                  oscuro que la 6B.

Propiedades y Características Físicas

En la forma pura, el violeta de cristal se presenta como lustrosos cristales azul verdosos
que funden a 137° Celsius (279°Fahrenheit). Los violeta de metilo son solubles en agua,
etanol, dietilenglicol, y dipropilenglicol. En particular, el violeta de metilo 6B es soluble en
agua al 2.93% y soluble en etanol al 15.21%.

El violeta de metilo no debe ser confundido con el azul de metilo ni con el azul de
metileno, otros dos colorantes.

Obtención: El violeta de metilo se obtiene por reacción de condensación de la cetona de
Michler (4,4'-Bis-dimetilamino-benzofenona) con N,N-dimetilanilina en presencia de
clorato de fosforilo.

Usos

El principal uso del violeta de metilo (por volumen bruto usado mundialmente) es el de
tintura textil de color púrpura y para dar tonos violeta oscuro en pinturas y tinta de
impresión.

El violeta de metilo 2B (llamado sencillamente violeta de metilo) es usado en química
como un indicador de pH para probar los intervalos de pH de 0 a 1,0. En el extremo ácido
de su intervalo de medición, toma un color amarillo. En el alcalino, se hace violeta
azulado. El Violeta de metilo puede ser suministrado como papel de prueba de pH, o
puede ser suministrado como cristales puros y disueltos en la muestra a ser probada.



El violeta cristal 10B es usado en el intervalo de 0 a 1,8, cuando cambia también de
amarillo a azul.

En medicina, el violeta de metilo 10B es conocido como violeta de genciana y es el
ingrediente activo en el colorante de Gram, usado para clasificar bacterias. El violeta de



                                              26
genciana destruye células, y es usado en desinfectante de intensidad moderada externo.
El violeta de genciana es muy venenoso para la mayoría de los animales, cachorros y gatos
incluidos; no debe ser usado para desinfección de la piel de estos animales.

El violeta de metilo tiene también la habilidad de conectarse al ADN. Por lo tanto, en
ciencias biomédicas, es usado para ensayos de viabilidad celular. La conexión al ADN
puede también causar rupturas en el proceso de replicación del ADN, el cual puede llevar
a mutaciones y cáncer.

Normalmente es formulado para uso como indicador de pH en la variedad de violeta de
metilo como una solución de 0,01 a 0,05 % en m/v y en la variedad de violeta de cristal
como una solución de 0,02 % en m/v en agua.

    4. Sudan IV:
Es una técnica bioquímica importante, ofreciendo la posibilidad de calificar visualmente la
presencia del compuesto graso de interés sin aislarlo. En su forma pura se llama escarlata
de Biebrich R, que no debe confundirse con la soluble en agua escarlata de Biebrich .
Sudán I , Sudán III , IV y Sudán se han clasificado como categoría 3 carcinógenos por la
Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer .

 En la industria, que se utiliza para sustancias no polares, como el color de los aceites ,
grasas , ceras , grasas , diversos hidrocarburos productos y acrílico emulsiones . Sudán IV
también se utiliza en Reino Unido como un tinte de combustible para la coloración de
bajos impuestos el combustible para calefacción , debido a que también se conoce como
Red de aceite de impuestos. Como colorante alimenticio , Sudán IV se considera un
colorante ilegal, principalmente debido a su efecto nocivo sobre un largo período de
tiempo, ya que es un carcinógeno . Fue gobernada inseguro en el 1995 las regulaciones
de seguridad alimentaria informe. Utiliza principalmente para la demostración de los
triglicéridos en secciones congeladas, pero que también puede manchar algunos lípidos a
las las proteínas en las secciones de parafina. Es menos popular que el aceite rojo O, ya
que tiene un color más anaranjado.

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    22. Reticulina:
Es un método de impregnación con plata que tiñe de negro las fibras de reticulina. Es una
tinción muy útil para evidenciar lesiones de la pituitaria y malformaciones vasculares por
microfotografía.

Tinción para reticulina:

1º-Desparafinado.                             11º- Lavar con agua destilada 1-2 pases.
Estufa durante 30 min. a 60º.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2º- Hidratación.                              12º- Formol al 10 % -5 min.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96º-5min.
Alcohol 70º-5min.
3º- Lavar en H2O destilada.                   13º- Lavar con agua destilada 1-2 pases.
4º- Permanganato potásico al 1% -1 min.       14º- Cloruro de oro al 0.2%-2 min.
5º- Lavar con agua destilada 1-2 pases        15º Lavar con agua destilada 1-2 pases.
6º- Metabisulfito potásico al 2% - 1 min.     16º Metabisulfito potásico al 2%-2 min.
7º- Lavar con agua destilada 1-2 pases        17º- Tiosulfato sódico al 2%-- 1 min.
8º - Alumbre férrico al 2% - 2 min.           18º- Lavar con agua corriente 5 min.
9º- Lavar con agua destilada -1-2 pases.      19º-Deshidratar.
                                              Alcohol de 70º
                                              Alcohol de 96º.
                                              Alcohol absoluto.
                                              Xilol.
10º- Reactivo de Wilder - 2 min.              20º- Montaje.

5. BIOPSIA

La biopsia es un método médico para obtener una muestra de un tejido o un órgano, a fin
de analizarlos en el laboratorio y establecer un diagnóstico de forma precisa.

Se usa, por ejemplo, para analizar un tumor y saber si es benigno o canceroso. También se
usa para investigar la causa de una infección desconocida.




                                            28
La mayoría de las biopsias no son dolorosas, pero algunas requieren anestesia. Se utilizan
aparatos de apoyo, como los escáneres o las ecografías, para afinar en la obtención de la
muestra.



                                MÉTODOS DE OBTENCIÓN

BIOPSIA CON BISTURÍ

Una biopsia de bisturí en un pequeño trozo de tejido se toma para la evaluación
histopatológica por medios quirúrgicos. La evaluación histopatológica es cuando un
patólogo prepara la pieza de tejido y la mira con un microscopio. Esto permite la
evaluación más completa de una lesión.

Bisturí biopsia se puede hacer con anestesia local o anestesia de su elección ( lo que
hacemos; Anestesia ). El área generalmente tiene una pocas suturas solubles. El paladar
duro y las encías son la excepción. Dado que el tejido es rígido y pegado al hueso
subyacente no siempre es fácil sutura. En estos casos, se deja abierta y se cura sin
consecuencias.

El área se cura en siete días en la mayoría de los casos y la mayoría de los pacientes
pueden regresar a trabajar al día siguiente.

Los resultados serán de nuevo desde el patólogo en unos 10 días. Una visita después de la
operación se hace generalmente para ese período de tiempo para discutir los resultados.

BIOPSIA ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA (PAAF)

En este procedimiento, una aguja larga y fina penetra la piel y se inserta en el tejido
sospechoso. Una jeringa se utiliza para extraer las células de los tejidos. Normalmente, las
células se envían a un laboratorio para una evaluación microscópica. Cuando el quiste se
drena con FNA, y el material no es enviada para la evaluación de laboratorio, el
procedimiento se llama aspiración del quiste. FNA es relativamente fácil y puede
realizarse en cuestión de minutos.

BIOPSIA CON AGUJA FINA
Cuando el tejido sólido es una biopsia, o cuando una mayor cantidad de tejido con agujas
para la evaluación, una aguja de núcleo hueco se utiliza para realizar el procedimiento.
Esta aguja se extrae una columna de tejido del área sospechosa. A veces, una pequeña
incisión se debe hacer con el fin de dar paso a la aguja más grande. Cuando la biopsia
requiere una incisión, se utiliza anestesia local.




                                            29
                                           TIPOS

BIOPSIA INCISIONAL

Biopsia incisional se parece más a la cirugía convencional. Después de utilizar anestesia
local para adormecer el pecho y que le da una inyección para inducir el sueño, el cirujano
utiliza un bisturí para cortar a través de la piel para remover un pedazo de tejido para su
examen.

Al igual que con la biopsia con aguja, si el cirujano no puede sentir el bulto o área
sospechosa, él o ella puede necesitar utilizar una mamografía o una ecografía para
localizar el punto exacto. El cirujano también puede usar un procedimiento llamado
localización por alambre de aguja. Guiados por una mamografía o un ultrasonido, el
cirujano inserta una aguja pequeña y hueca a través de la piel de la mama en el área
anormal. Un pequeño cable se coloca a través de la aguja y en el área de interés. Luego se
retira la aguja. El médico puede usar el alambre como una guía para encontrar el lugar
adecuado para realizar una biopsia.

El médico puede recomendar la biopsia incisional si una biopsia con aguja no es
concluyente - es decir, los resultados no son claros o no definitiva - o si el área sospechosa
es demasiado grande para la muestra fácilmente con una aguja. Al igual que con la biopsia
con aguja, hay alguna posibilidad de que la biopsia incisional puede devolver un resultado
falso negativo. Sin embargo, se obtienen los resultados con bastante rapidez. Dado que es
un procedimiento quirúrgico, biopsia por incisión es más invasiva que la biopsia con aguja,
que deja una cicatriz, y puede requerir más tiempo para recuperarse.

BIOPSIA POR ESCISIÓN

Biopsia por escisión, la forma más involucrados de la biopsia, es una cirugía para extirpar
toda la zona de tejido sospechoso de la mama. Además de eliminar la sospecha de cáncer,
el cirujano general, se eliminará un pequeño borde del tejido que lo rodea, así, llamado de
margen.

Al igual que con la biopsia incisional, si el cirujano no puede sentir el bulto o área
sospechosa, él o ella puede necesitar utilizar una mamografía o una ecografía para
localizar el punto exacto. El cirujano también puede utilizar la aguja de localización
mediante alambre para marcar el área derecha de la biopsia.



                                             30
La biopsia excisional es el camino más seguro para establecer un diagnóstico definitivo sin
conseguir un resultado falso negativo. Además, después de haber eliminado todo el tumor
puede darle un poco de tranquilidad. Sin embargo, la biopsia por escisión se parece más a
la cirugía convencional, y que dejará una cicatriz y requieren más tiempo para
recuperarse. Al igual que la biopsia incisional, biopsia excisional se realiza con anestesia
local.

BIOPSIA PIEZA QUIRÚRGICA

Cuando los tejidos sospechosos son inaccesibles mediante el uso común de los
procedimientos de biopsia, una biopsia quirúrgica es necesaria. Durante una biopsia
quirúrgica, se realiza una incisión a través de la piel, lo que permite al médico tener acceso
a las células sospechosas encuentra dentro del cuerpo. Este procedimiento es
esencialmente la misma cosa que una aguja, la piel o biopsia de raspado, sin embargo,
utiliza una incisión quirúrgica como un medio para penetrar en el tejido sospechoso.

Biopsia en sacabocado

En una biopsia por punción, el médico utiliza un cuchillo redondeado, que varían en
tamaño desde 1 mm a 8 mm, para eliminar secciones de la piel debajo de la superficie. La
mayoría de biopsias se realizan para extraer los tejidos situados alrededor de ¼ de
pulgada en la piel. Después de una biopsia por punción, la herida usualmente se sutura
para asegurar una cicatrización adecuada.

BIOPSIA POR ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA

En una biopsia por aspiración con aguja fina (FNAB), el médico (un patólogo, radiólogo, o
cirujano) utiliza una aguja muy fina colocada en una jeringa para extraer (aspirar) una
pequeña cantidad de tejido del área sospechosa. Este tejido luego se observa con un
microscopio. Para esta prueba se utiliza una aguja más delgada que las agujas usadas en
las pruebas sanguíneas.

Si la masa a ser sometida a la biopsia puede palparse, el médico simplemente ubica la
masa o región sospechosa guiando la aguja ahí. Si la protuberancia no puede palparse ni
sentirse con los dedos, es posible que el doctor utilice una ecografía para observar la aguja
en una pantalla y moverla hacia y adentro de la masa. Otra opción para el médico sería
utilizar un método llamado biopsia estereotáxica con aguja para guiar la aguja. Para este
tipo de biopsia, la ubicación exacta de la masa es trazada por una computadora a través
de mamogramas capturados desde dos ángulos. Esto ayuda al médico a guiar la aguja al
punto preciso.




                                             31
El médico puede o no usar un medicamento para adormecer el área (anestesia local).
Debido a que se usa una aguja fina para hacer la biopsia, administrar el medicamento
puede que duela más que la biopsia en sí.

Una vez que la aguja está en su lugar, se extrae tejido o líquido. Si el líquido es
transparente, es más probable a que la masa sea un quiste benigno. Un líquido
sanguinolento o turbio puede significar un quiste benigno o, raras veces, un cáncer. Si la
masa es sólida, se extraen pequeños fragmentos de tejido. Un patólogo (médico quien es
un experto en el diagnóstico de enfermedades mediante el análisis de muestras de tejido)
observará el tejido de la biopsia o líquido con un microscopio para determinar si es
canceroso.

Una biopsia de aspiración con aguja fina algunas veces puede pasar por alto un cáncer si la
aguja no obtiene una muestra de tejido del área de las células cancerosas. Si no provee un
diagnóstico claro, pero su médico considera que la masa es sospechosa, se debe realizar
una segunda biopsia o un tipo diferente de biopsia.

Si usted todavía tiene ciclos menstruales (es decir, si aún no ha pasado por la
menopausia), es muy probable que sepa que los abultamientos de los senos pueden
aparecer y desaparecer cada mes con su ciclo menstrual. Sin embargo, si usted tiene una
masa que no desaparece, puede que el médico requiera realizar una FNAB para ver si es
un quiste (saco lleno de líquido) o un crecimiento sólido (masa o tumor). Si se realiza la
aspiración y la masa desaparece después de drenarla, generalmente esto significa que era
un quiste y no un cáncer. Recuerde, la mayoría de las masas en los senos no son cáncer.

BIOPSIA POR CONGELACIÓN

Si está dentro de las 2-3 horas de viaje, usted puede preparar para la entrega de tejido
fresco, si no, y luego ir a la preparación del tejido congelado. Por lo menos una pinza de
biopsia es necesaria, de un mínimo de 0,5 cm de diámetro y 0,8 cm de longitud. Dos
biopsias de este tamaño son los preferidos. Envuelva el músculo pinza de biopsia en una
gasa ligeramente humedecida con solución salina normal. No sumerja en una solución
salina, ya que esto produce un artefacto, que puede interferir con la interpretación. Los
mejores resultados de histoquímica enzimática y los estudios de inmunohistoquímica se
obtienen cuando los tejidos se congelan rápidamente y se mantuvieron congelados a -60 a
-80 ° C hasta que seccionado. Cualquier deshielo que tiene lugar y es seguido por volver a
congelar conduce a la formación de cristales de hielo con la pérdida de detalles
morfológicos y la membrana celular (por lo tanto antigénica) integridad. La actividad
enzimática también se puede perder.

Los métodos preferidos de congelación son los siguientes:

   1. Nitrógeno Líquido - tejidos para estudios bioquímicos




                                            32
   2. Isopentano / nitrógeno líquido - Tejido de histoquímica enzimática y los estudios
      de inmunohistoquímica




6. AUTOPSIA

Disección de un cadáver para determinar las causas de la muerte. La autopsia permite
descubrir la existencia de enfermedades no detectadas durante la vida, confirmar un
diagnóstico, establecer los efectos beneficiosos y secundarios de una medicación,
determinar defectos congénitos, etc. Es necesaria en una investigación criminal para
determinar las causas de la muerte y para resolver disputas entre compañías
aseguradoras y sus beneficiarios. (Terapéutica) Examen anatómico del cadáver (El término
insistde etimológicamente en que lo ve uno mismo).

Métodos

TÉCNICA DE ROKITANSKY

Carl Rokitansky (1804-1878) estableció las bases estructurales de la enfermedad y la
técnica de la autopsia y el estudio sistemático de cada órgano. En 1866, había hecho ya
más de 30 000 autopsias. En su técnica, los órganos son examinados “in situ”, es decir,
dentro del cuerpo, uno por uno. Así, esta técnica lleva a cabo varios cortes en todos los
órganos internos, para después ser retirados unos a uno. Tenga en cuenta que esta
técnica tiene un gran parecido con la técnica de Virchow, con la diferencia de que en los
órganos de Virchow se eliminan uno por uno y luego son examinados, mientras que en los
órganos de Rokitansky también se examinan dentro del cadáver para ser retirados
después también uno a uno.

Carl von Rokitansky nació en Hradec Králové, Bohemia. Estudió en la Universidad Carlos de
Praga (1821-1824) y obtuvo un doctorado en medicina el 6 de marzo 1828 en la
Universidad de Viena. Estudió en la Universidad Charles de Praga (1821-1824) y realizó un




                                           33
doctorado en medicina en 06 de marzo 1828 en la Universidad de Viena. Como un joven
profesor, reconoció que incluso la disciplina de la anatomía patológica puede ser muy útil
para el trabajo clínico en el hospital debido a que podría ofrecer nuevas posibilidades
diagnósticas y terapéuticas para el aspecto médico. Así, después de Gerard van Swieten,
quien fue el fundador de la primera Escuela de Viena, Rokitansky puso en marcha una
verdadera "revolución científica". Con la creación de la segunda escuela de Viena, un
cambio de paradigma se llevó a cabo, dirigido por Rokitansky, Skoda Josef Ferdinand von
Hebra, a partir de allí nació el concepto de la medicina como un tema filosófico de la
naturaleza, la medicina más moderna orientada científicamente. Así, junto con los
conocimientos de la medicina y el desarrollo de nuevas disciplinas, la Escuela de Viena
alcanzó renombre mundial.

El nombre Rokitansky está asociado con las siguientes enfermedades morfológicas:

   Superior Mesenteric Artery Syndrome. Síndrome de la arteria mesentérica superior

   Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome. Síndrome de Rokitansky-Kuster-Hauser-
       Mayer

   Rokitansky's diverticulum. Divertículo de Rokitansky Rokitansky

   Rokitansky's triad ( pulmonary stenosis ). Tríada de Rokitansky (estenosis pulmonar)

   Rokitansky-Aschoff sinuses (in the gallbladder ) Rokitansky-Aschoff senos (en la
       vesícula biliar)

   Rokitansky-Cushing ulcer. Úlcera de Rokitansky-Cushing

   Rokitansky-Maude Abbott syndrome. El síndrome de Rokitansky-Maude Abbott

   Von Rokitansky's syndrome. El síndrome de Rokitansky

   Rokitansky nodule – teratomas. Nódulo – teratomas de Rokitansky

TÉCNICA DE GHON

Anton Ghon (1 enero 1866-23 abril 1936) fue un patólogo austriaco, que era natural de
Villach. En 1890 obtuvo su título médico en Graz, y luego pasó varios años en el instituto




                                           34
patológico en Viena, donde trabajó con Anton Weichselbaum (1845-1920). En 1910 se
convirtió en profesor de anatomía patológica en la Universidad Alemana de Praga.

Ghon era un experto en el campo de la bacteriología, y se le recuerda por su trabajo con la
meningitis y la tuberculosis. Su nombre se relaciona con el llamado Foco de Ghon, una
infección primaria asociada con la tuberculosis, así como el llamado Complejo de Ghon,
cuando la infección envuelve a los ganglios linfáticos. Su obra más conocida es un tratado
de 1912 de tuberculosis en la infancia llamado Der Primaria Lungenherd Tuberkulose bei
der der Kinder.


Publicaciones sobre Anton Ghon:

Ober WB (1983). “Ghon pero no olvidado: Antón Ghon y su complejo ".

En la técnica de Ghon, la evisceración se produce a través de monobloques de órganos
anatómicamente y / o relacionados funcionalmente. A continuación se describen las
etapas    de      la   autopsia      clínica        utilizando   la   técnica   de   Ghon:
La eliminación del cerebro: la incisión en el cuero cabelludo debe comenzar en 1-2 cm
detrás del borde inferior de la oreja derecha, extendiéndose por la convexidad del cráneo
hasta llegar al punto correspondiente contralateral. Ambas partes deben ser retiradas del
cráneo, la parte anterior cerca de las órbitas y posterior a la protuberancia occipital.
La eliminación de la hipófisis: seccionamiento del diafragma de la silla turca en toda su
extensión. La punta del cincel se coloca en el borde posterior, y los martillos se orientan
para atrás; visualización de la glándula pituitaria, que luego se diseca y se extirpa.
Eliminación de la médula espinal: Se puede hacer por via posterior, colocando el cuerpo
de vuelta y se abre la piel a lo largo de la columna, que entonces es seccionada en
procesos laminares, exponiendo la médula nerviosa.



                                  AUTOPSIA MEDICO LEGAL


Autopsias judiciales o médico-legales, las sometidas a la jurisdición forense,
independientemente de la procedencia (hospitalaria o extrahospitalaria). El principal
objetivo de la autopsia judicial es establecer la causa de muerte, muchas veces en


                                               35
circunstancias violentas, extrañas o poco claras, sospechosas de criminalidad (Ley de
Enjuiciamiento Criminal, art. 340, 343 y otros). Este tipo de autopsias las realiza un médico
forense. El art. 343 de la Ley de Enjuiciamiento Criminal dice que «en los sumarios a que
se refiere el artículo 340 (por muerte violenta o sospecha de criminalidad), aun cuando
por la inspección exterior pueda presumirse la causa de la muerte, se procederá a la
autopsia del cadáver por los médicos forenses, o en su caso por los que el juez designe, los
cuales, después de escribir exactamente dicha operación, informarán sobre el origen del
fallecimiento y sus circunstancias».

Las autopsias médico-legales están reguladas por la Ley de Enjuiciamiento Criminal, el
Reglamento Orgánico del Cuerpo Nacional de Médicos Forenses y el Reglamento de los
Institutos de Medicina Legal (42-47).

En la práctica es el «certificado de defunción» lo que delimita la «autopsia clínica» y la
«autopsia médico-legal». Aunque legalmente, en las autopsias clínicas, «el informe de la
autopsia, remitido por el Servicio de Anatomía Patológica al Médico de cabecera o, en su
caso, al Jefe del Servicio correspondiente, servirá para extender el certificado médico del
fallecimiento, que deberá reunir los requisitos legalmente establecidos al efecto» (Art. 3.1
de la Ley de Autopsias Clínicas (22) y 6.5 del RD sobre Autopsias Clínicas (7)), en la práctica
ésto no es así, de manera que a los fallecidos que no se les extienda el «certificado de
defunción», se les practicará la autopsia médico-legal, a no ser que el médico forense
intervenga como médico en funciones del Registro Civil extendiendo dicho certificado de
defunción, o realice un informe, tras la apertura de diligencias judiciales, sin necesidad de
practicar la autopsia.



                             LEY DE AUTOPSIAS EN HONDURAS

DECRETO NUMERO 182-84 (EMITIDO EL 22/10/1984) LEY DE AUTOPSIA MEDICA
OBLIGATORIA

(GACETA NO.24486 DEL 05/12/1984)

Artículo 1. Se establece la práctica de la Autopsia Médica Obligatoria, en los centros
hospitalarios del país, para el estudio científico del cadáver, practicado por personal
especializado, cuyo objeto será determinar las causas de la muerte, con fines
académicos y de salud pública.
Artículo 2. Quedan sujetos a la práctica de la Autopsia Médica Obligatoria previa
autorización de la autoridad competente, aquellos cadáveres de personas cuyo
deceso haya ocurrido encontrándose internadas en centros hospitalarios del país,
recibiendo tratamiento médico y/o quirúrgico.
Artículo 3. Todos los datos obtenidos de la Autopsia se conservarán en los
respectivos protocolos de autopsias en el archivo de la Institución que la practicó, de



                                              36
donde se sacarán las copias que los Reglamentos dispongan.
Artículo 4. La Secretaría de Estado en los Despachos de Salud Pública y Asistencia
Social es la dependencia encargada de hacer efectiva la observancia y aplicación de
la presente Ley; en consecuencia, queda facultada para emitir su reglamentación,
debiendo para ello tomar en consideración la opinión de la Facultad de Ciencias
Médicas de la Universidad Nacional Autónoma de Honduras y del Colegio Médico de
Honduras.
Artículo 5. Los gastos que ocasione la práctica de la Autopsia Médica Obligatoria,
serán por cuenta del Estado en los hospitales de su dependencia, a cuyo efecto se
consignará la partida correspondiente en el presupuesto de la Secretaría de Estado
consignada en el artículo anterior. En cuanto a los gastos de otras Instituciones
Estatales, los mismos serán por cuenta de la Institución; y referente a los hospitales
privados, corresponderá a quien solicitare la autopsia.
Artículo 6. Ningún centro hospitalario donde se hubiere practicado la Autopsia
Médica Obligatoria en cumplimiento de esta Ley y sus reglamentos, con personal
capacitado para ese fin, podrá ser demandado o acusado por causa de los
resultados de la misma.
Artículo 7. La presente Ley entrará en vigencia a partir de la fecha de su publicación
en el Diario Oficial "La Gaceta"1.
Dado en la ciudad de Tegucigalpa, Distrito Central en el Salón de Sesiones del
Congreso Nacional, a los veintidós días del mes de octubre de mil novecientos
ochenta y cuatro.

                          FORMA DE SOLICITAR UNA AUTOPSIA

"Certificado de muerte cierta" emitido por el Médico que solicita la autopsia, en el que se
hará constar el día y la hora de fallecimiento.

Certificado de autorización de estudio necrópsico (autorización) según modelo
normalizado (Anexo I).

Resúmen de la Historia Clínica en el que queden reflejados los siguientes aspectos:

a) Datos de filiación

b) Antecedentes personales y familiares

c) Enfermedad actual

d) Datos más relevantes de la exploración física y exámenes complementarios

e) Padecimiento fundamental y causa de muerte

de sospecha



                                             37
f) Problemas clínicos que espera sean resueltos con el estudio anatomopatológico

                             REGLAMENTACION DE AUTOPSIA

ARTICULO 5o.- Es obligatoria la autopsia de los cadáveres de la siguientes personas

a)     De las personas fallecidas como resultado de la           comisión de delitos o de
accidentes de tránsito u otros.

b)    De las muertes naturales producidas en los establecimientos de salud del territorio
nacional.

c)     En los niños fallecidos antes de las 24 horas de vida.

d)    En todos aquellos casos de pacientes en que no se pudiera establecer las causas de
la muerte o en aquel los en que no se ha llegado a un diagnóstico médico razonable o se
dude del tratamiento médico instaurado.

e)     En todas las muertes en que haya existido discrepancia entre los especialistas
sobre las causas de la muerte.

f)     En todos los casos de muerte de los mortinatos y los prematuros.

 ARTICULO 6o.- Para efectuar una autopsia se precisa la autorización de los parientes más
próximos: esposa, o esposo, padre o madre, hijo o hija u otros familiares allegados al
difunto o en su defecto de la persona encargada del funeral, para lo cual se deberá hacer
conocer perfectamente la Ley. Obtener el permiso firmado y con testigos responsables. En
caso de que exista alguna duda acerca de la autorización para proceder a la realización de
la autopsia y necropsia, se deberá hablar con la persona que dió el permiso o con sus
allegados. Si la persona que dió consentimiento para la ejecución de la misma y limitó su
extensión , el médico debe atenerse a esa situación.

 ARTICULO 7o.- Las autopsias y necropsias médico-legales propias de las necesidades de la
justicia ordinaria, que han sido solicitadas por las partes, por la autoridad fiscal o por los
peritos dentro del proceso, no requieren autorización previa alguna.

ARTICULO 8o.- El permiso puede ser obtenido por escrito o también ante la presencia de
testigos en forma verbal, por teléfono o telégrafo u otro medio moderno de
comunicación, siempre que la persona que lo otorgue sea la indicada de hacerlo, para lo
cual debe identificarse y grabarse en cinta o disco la conversación a fin de prevenir futuros
reclamos. El permiso obtenido para el verificativo de las indicadas actuaciones médico-
legales debe ser archivado.



                                             38
ARTICULO 9o.- Se implanta el uso obligatorio de FORMULARIO UNICO DE AUTOPSIA Y
NECROPSIA, en el que se anotará fielmente todos los datos obtenidos de la causa de la
muerte.

ARTICULO 10o.- No se podrá efectuar autopsias después de las 6 primeras horas de
deceso, salvo cuando semiológicamente sea demostrada la muerte o cuando surja la
posibilidad de aprovechamiento de órganos para transplante, en este caso deberá
tomarse en cuenta las siguientes indicaciones:

a)     Señales oculares (dilatación pupilar)

b)     Disminución del globo ocular

c)     Tela viscosa

d)     Hipóstasis sanguínea en las regiones en declive

e)     Rigidez Muscular

f)     Enfriamiento del cuerpo

g)     Falta de conciencia

h)     Paros circulatorios y respiratorios

ARTICULO 11o.- En toda autopsia es obligatoria la precisión del tiempo de muerte
(crognotanatognosis).

ARTICULO 12o.- Queda establecido que en toda autopsia y necropsia deben cumplirse los
pasos siguientes: cuando la intervención es médico-legal

a)      Identificación: dotar a cada centro de autopsia y necropsia de un sistema de
identificación de los cadáveres con los siguientes equipos: cámara fotográfica paro
obtener dos fotografías (frente y perfil), un sistema de dactiloscopia con los respectivos
libros y fichaje.

b)     Disponer de un local en el que exista sistema de congelación de cadáveres
apropiado para tal efecto.

c)    Pensar en la causa jurídica de la muerte, si es posible oir a las personas que se
encuentran ligadas a los hechos antes, durante y después de la autopsia y en necropsia.




                                               39
d)     Retirar completamente las vestimentas del cadáver, firmar sobre las mismas,
establecer correspondencia con las lesiones, movilizar y lavar el cadáver con agua
corriente.

e)   Procurar identificar el instrumento o medio que produjo la muerte, a través del
examen de las lesiones.

f)    Pensar en los ángulos, dirección, distancia de tiros o de otras armas, imaginado por
el examen de las lesiones la posición de la víctima y del agresor en el momento del
crimen, fotografiar las lesiones si el caso lo requiere.

g)     Procurar el diagnóstico diferencial entre suicidio, homicidio y accidente, discutir el
caso frente a datos positivos y negativos.

h)    Evaluar el tiempo transcurrido entre la lesión y la muerte o entre la muerte y la
necropsia.

i)      Pesquisar la presencia o ausencia de reacción vital (quemados, ahogados o
politraumatizados).

j)    Pensar en la intensidad del agresor, pesquisar señales de lucha y lesiones de
defensa.

k)    Procurar hallar señales de relaciones sexuales o actos libidinosos, caracterizar el
empleo de medios insidiosos o crueles.

l)     Efectuar la colecta de material (cabellos, palos, material para examen histológico,
toxicológico, sangre para dosaje alcohólico y otros elementos subsidiarios.).

ll)    Luego después de la abertura de cavidades antes de retirar órganos, debe
efectuarse el examen topográfico en conjunto de las vísceras superficies externas,
colecciones liquidas o del estado de las paredes.

m)     Evitar al máximo las hipótesis absurdas o complicadas sin fundamento.

n)    No confiar en la memoria, elevar un resultado de autopsia o necropsia
inmediatamente efectuando el acto de pericia a la autoridad que dispuso su ejecución.

ARTICULO 13o.- Terminado el acto necropscópico o autópsico se debe restituir al cadáver
los órganos ya examinados y disponer en sus cavidades, excepto el encéfalo que puede ser
colocado en la cavidad abdominal.




                                             40
ARTICULO 14o.- Se debe formar un laudo especialmente de los no traumatizados, con
objeto de evitar confusiones a posteriori con las lesiones vitales notoriamente en los
huesos.

ARTICULO 15o.- Debe anotarse si hubo o no introducción de material extraño en la
recomposición del cadáver.




       7. DE LA CITOLOGIA VAGINAL EXFOLIATIVA Y OTROS TIPOS DE CITOLOGIAS

       7.1 Instrumentos Utilizados

(Incluye la recepción, el procesamiento, el diagnóstico y, en su caso, la obtención de la
muestra)

       - Cubetas metálicas para tinciones

       - Soportes metálicos

       - Centrífuga

       - Citocentrífuga

       - Sistema de filtros de membrana

       - Cámara húmeda de incubación

       - Homogeneizador

       - Micropipetas

       - Pipetas convencionales

       - Tijeras




                                            41
      - Pinzas

      - Matraces

      - Cristalizadores

      - Estufa

      - Neveras

      - Bandejas portapreparaciones

      - Bandejas metálicas

      - Microscopio (oculares de 10X y objetivos 10,20,40,60,100)

      - Fotomicroscopio

      - Pistola de punción aspiración

      - Sistema de tinción y lectura automática de preparaciones

      - Programa informático y equipamiento de Secretaría

       - Sistemas de archivo de preparaciones, informes, diapositivas, fotografías,
colecciones y sesiones

   - Otros materiales fungibles e inventariables

      7.2 Tipos de citologías

 Citología exfoliativa
   Citología ginecológica y de mama
       Citología vaginal
             o Toma vaginal única
             o Triple toma vaginal
             o Triple toma vaginal con lectura automática por red neuronal
             o Triple toma vaginal con lectura automática por análisis de gradientes
             o Toma endocervical
             o Toma de la zona de transformación con suspensión en medio fijador
                  para lectura manual o automática de muestras monoplano

         Citología endometrial
         Citología vulvar



                                            42
      Citología mamaria
      Otros tipos

 Citología del aparato respiratorio
     o Muestras obtenidas de manera espontánea o mediante inducción
              Citología de esputo por toma directa
              Citología seriada de esputo por toma directa
              Citología del exudado nasal
     o Muestras obtenidas mediante fibrobroncoscopia
                         Citología de aspirado bronquial por centrifugación
                            convencional
                         Citología de aspirado bronquial por homogeneización
                         Citología de lavado bronquial por centrigugación
                            convencional
                         Citología de lavado bronquial por citocentrifugación
                         Citología de lavado bronquial por sistema de filtros de
                            membrana
                         Citología de cepillado bronquial
                         Citología por punción transbronquial o transtraqueal

       o Otros tipos de citología exfoliativa del aparato respiratorio

 Citología de los derrames y de las cavidades serosas
      o Citología del líquido ascítico
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana
       o Citología del líquido pleural
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana
       o Citología del líquido pericárdico
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana
       o Citología del líquido sinovial
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana
       o Citología del lavado peritoneal
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana
       o Otros tipos de citología exfoliativa de derrames y cavidades serosas


                                        43
 Citología del aparato digestivo
     o Citología por lavado de los diferentes segmentos del tubo digestivo
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana

      o   Citología por balón de abrasión de esófago y estómago
      o   Citología por cepillado de los diferentes segmentos del tubo digestivo
      o   Citología por impronta de las muestras de biopsia
      o   Citología de la vía billiar por rcp
                  Lavado
                       Por centrifugación convencional
                       Por citocentrifugación
                       Por sistema de filtros de membrana

                    Cepillado

      o Otros tipos de citología exfoliativa del aparato digestivo

 Citología del aparato genito-urinario
          o Citología de orina por micción espontánea
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citología de orina seriada por micción
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citología de orina seriada post-hidratación y por micción espontánea
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citología de orina por punción vesical
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citologia de orina por lavado vesical
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citologia de orina por cateterismo uretral
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación


                                       44
                   Por sistema de filtros de membrana
          o   Citología de orina por lavado uretral
                   Por centrifugación convencional
                   Por citocentrifugación
                   Por sistema de filtros de membrana
          o   Citología de orina procedente de neovejigas, derivaciones cutáneas o
              sondas
                   Por centrifugación convencional
                   Por citocentrifugación
                   Por sistema de filtros de membrana
          o   Citología de orina post-masaje prostático
                   Por centrifugación convencional
                   Por citocentrifugación
                   Por sistema de filtros de membrana
          o   Citología del líquido seminal
          o   Otros tipos de citología exfoliativa del aparato génito-urinario

 Citología del sistema nervioso central
        o Citología del LCR procedente de punción lumbar
                 Por centrifugación convencional
                 Por citocentrifugación
                 Por sistema de filtros de membrana
         o Citología del LCR procedente de punción ventricular
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Citología de LCR procedente de derivaciones
                  Por centrifugación convencional
                  Por citocentrifugación
                  Por sistema de filtros de membrana
         o Otros tipos de citología exfoliativa del sistema nervioso

 Citología de la piel
      o Citología por raspado de lesiones cutáneas
      o Citología del líquido procedente de lesiones vesiculares cutáneas
      o Otros tipos de citología exfoliativa de la piel

 Citología ocular
      o Citología de la secreción lagrimal
              Por centrifugación convencional
              Por citocentrifugación
              Por sistema de filtros de membrana

       o Citología por raspado conjuntival


                                       45
           o Otros tipos de citología exfoliativa ocular

     Otros tipos de citología exfoliativa

      Citología por punción-aspiración con aguja fina (PAAF)
           o Citología por PAAF de masas palpables
                   Citología de mama
                   Citologia de las glándulas salivales
                   Citología de tiroides
                   Citología de los ganglios linfáticos
                   Citología de tejidos blandos
                   Citología de la piel
                   Citología de hueso y articulaciones
                   Citología de cabeza y cuello
                   Citología de próstata
                   Citología de testículo
                   Otras PAAF de masas palpables



           o Citología por PAAF de órganos profundos
                  Citología de hígado
                          Con control ecográfico
                          Con control ecográfico y Doppler
                          Con control mediante tomografía axial computadorizada
                          Con control mediante tomografía axial computadorizada
                            helicoidal
                     Citología de pulmón
                         Con control fluoroscópico
                         Con control mediante tomografía axial computadorizada
                         Con control mediante tomografía axial computadorizada
                            helicoidal
                     Citología de pleura
                         Con control fluoroscópico
                         Con control mediante tomografía axial computadorizada
                         Con control mediante tomografía axial computadorizada
                            helicoidal

                        Citología de mediastino
                          Con control fluoroscópico
                          Con control mediante tomografía axial computadorizada
                          Con control mediante tomografía axial computadorizada
                             helicoidal



                                             46
   Citología de páncreas
     Con control ecográfico
     Con control ecográfico y Doppler
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
        helicoidal

   Citología de riñón
     Con control ecográfico
     Con control ecográfico y Doppler
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
        helicoidal

   Citología de suprarrenal
     Con control ecográfico
     Con control ecográfico y Doppler
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
     Con control mediante tomográfia axial computadorizada
        helicoidal

   Citología de peritoneo
     Con control ecográfico
     Con control ecográfico y Doppler
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
        helicoidal

   Citología de retroperitoneo
     Con control ecográfico
     Con control ecográfico y Doppler
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
     Con control mediante tomografía axial computadorizada
        helicoidal

   Citología del sistema nervioso central
     Por biopsia estereotáxica
     Sobre campo quirúrgico

   Citología de cualquier masa no palpable en cualquier otra
    localización




                       47
                            Con control ecográfico
                            Con control ecográfico y doppler
                            Con control mediante tomografía axial computadorizada
                            Con control mediante tomografía axial computadorizada
                             helicoidal

                        Citología intraoperatoria




        7.3 Listado de técnicas de histoquímica
1. AZUL ALCIAN
2. AZUL ALCIAN PAS
3. AZUL DE TOLUIDINA
4. ELIAS TAFT
5. E.V.G.
6. FIJADORES
7. GELATINA
8. GIENSA H. PYLORI
9. GIENSA MAY GRUMWALD
10. GORDONS (2 HOJAS)
11. GRIMELIUS
12. GROCOTT
13. HIALURONIDASA
14. HIERRO COLOIDAL
15. MASSON
16. MASSON FONTANA
17. METENAMINA
18. MUCICARMIN
19. OIL RED O
20. ORCEINA
21. PAS
22. PAS DIASTASA
23. PERLS
24. PTAH
25. RODANINA
26. ROJO CONGO ALCALINO
27. ROJO CONGO PERMANGANATO


                                           48
28. S. A B. (SULFATO SODICO – AZUL ALCIAN)
29. SHIKATA
30. TAYLOR
31. TIOFLAVINA T
32. T T C
33. WARTHIN STARRY
34. ZIEHL NIELSEN




LISTADO DE TECNICAS DE INMUNOHISTOQUIMICA
A
- ACTH
- ACTINA (HHF-35) ………. Actina muscular específica
- ACTINA MUSCULO LISO
- ANTIGENO ANTIMELANOMA (HMB 45)
- ANTIGENO PROSTATICO ESPECIFICO (PSA)
- AMILOIDE AA
- AMILOIDE P
- ANTIGENO SUPERFICIE (HEPATITIS B)
- ALFA 1 ANTITRIPSINA
- ALFA 1 ANTIQUIMOTRIPSINA
- ALFA FETOPROTEINA
- ALFA-SINUCLEINA
- ANTIGENO MITOCONDRIAL
- ALK proteína
B
- BER-EP-4
- BCL-2
- BCL-6
- BETA-AMILOIDE
C
- CA-15-3
- CALRETININA
- CATEPSINA D
- CALCITONINA
- CEA
- CELULAS FOLICULARES DENDRITICAS
- CELULAS PLASMATICAS (VS38)


                                         49
- C-ERB-B2
- C4d (congelación y parafina)
- CD 20 (PAN B)
- CD 3 (PAN T )
- CD 45 RB (PAN LEU )
- CD1a
- CD 31
- CD 34
- CD15
- CD19
- CD23
- CD30 (Ki-1)
- CD 4
- CD43
- CD45RO
- CD 68 (MACROFAGOS)
- CD79a
- CD8
- CD10
- CD74
- CD79a
- CD 5
- CD 44std
- CD 44 V6
- CD138 (CELULAS PLASMATICAS)
- CITOQUERATINA PAN (CK22)
- CAM 5.2 (CITOQUERATINA BAJO PESO MOLECULAR)
- 34 BETA E12 (CITOQUERATINA ALTO PESO MOLECULAR)
- CITOQUERATINAS 5/6
- CITOQUERATINA 7
- CITOQUERATINA 13
- CITOQUERATINA 19
- CITOQUERATINA 20
- CITOMEGALOVIRUS
- CICLINA D1
- COLAGENO IV
- CORE (HEPATITIS B)
- CROMOGRANINA A
- C-KIT (CD117)
D
- DESMINA




                                     50
E
- E-CADHERINA
- EMA (ANTIGENO EPITELIAL DE MEMBRANA)
F
- FACTOR VIII
- FACTOR DE CRECIMIENTO PLAQUETARIO (PDGFR-ALFA)
- FIBRONECTINA
- FOSFATASA ACIDA PROSTATICA
- FOSFATASA ALCALINA PLACENTARIA
- FSH
G
- GASTRINA
- GFAP (PROTEINA GLIAL FIBRILAR ACIDA)
- GLICOPROTEINA P
- GLUCAGON
- GLICOFORINA A
- GONADOTROPINA CORIONICA (HCG)
- GRANZIMA B
H
- HGH
- HPV-1 (HERPES I)
- HPV-2 (HERPES II)
- HORMONA SECRETORA
- HEPATOCITOS MARCADOR
I
- IG A
- IG G
- IG M
- IG D
- INSULINA
- INHIBINA ALFA
K
- KAPPA
- Ki- 67
L
- LACTOGENO PLACENTARIO
- LAMBDA (CADENAS LIGERAS)
- LH
- LECTINAS:
- TA
- SBA
.UEA
.DBA


                                     51
.HPA
.PNA
.WGA
.BSA
.ConA
.RCA-120
- LEU 7 (CD57)
- LISOZIMA
M
- MBP (PROTEINA BASICA DE MIELINA)
- MELAN-A
- MIOGLOBINA
- MIELOPEROXIDASA
- MIOSINA
- MYO-D1
- MIC-2 (CD99)
N
- NEUROFILAMENTOS (NF)
- NSE (ENOLASA NEURONAL ESPECIFICA)
O
- OSTEONECTINA
P
- PAPILOMAVIRUS
- PROLACTINA
- PCNA
- P-53
- PTH (PARATHORMONA)
- PROTEINA ALK
- P21
- PROTEINA PRIONICA
- P27
R
- RETINOBLASTOMA
- RECEPTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO (EGFR)
- RECEPTOR DE ESTROGENOS
- RECEPTOR DE PROGESTERONA
S
- SEROTONINA
- SINAPTOFISINA
- SOMATOSTATINA
- S 100 PROTEINA
T
- TAU


                                     52
- TIMIDILATO SINTETASA (TS)
- TIROGLOBULINA
- TSH
- TRIPTASA (MAST-CELL)
- TROMBOMODULINA
- TRANSTIRETINA (PREALBUMINA)
- TTF-1
U
- UBIQUITINA
V
- VIMENTINA
- VIRUS EPSTEIN-BARR (LMP-1)
- VIRUS PAPILOMA PARA SCREENING EN CITOLOGIAS
TECNICAS HISTOENZIMATICAS PARA MUSCULO:
- HE
- PAS CELOIDINA
- TRICROMICO
- FOSFORILASA
- FOSFATASA ACIDA
- ATP-asa (pH=4,5)
- ATP-asa (pH=9,4)
- DPNH
- SDH
- DISTROFINA
- CITOCROMO-OXIDASA
-ADALINA
TECNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA:
- HE
- IgG
- IgA
- IgM
- C3
- C4
- C1q
- FIBRINOGENO
- ALBUMINA
* TECNICAS PARA HUESOS:
- HE
- VON KOSSA
- ALUMINON
- TRICROMICO DE GOLDNER
- AZURINA (METACRILATO)



                                     53
* TECNICAS PARA CEREBROS:
- NISSL
- K. BARRERA
- BIELCHOWSKY
* TECNICAS EN CONGELACION:
- S ROJO
- OIL RED O

* OTRAS:
-LEDER
OTRAS UTILIZADAS EN TESIS
- AE1/ AE3
- CALDESMON
- CALPONINA
- BCL-X
- FAS R
- HHV-8
- INTERLEUCINA 6

LISTADO DE TECNICAS DE PATOLOGIA MOLECULAR
- PCR EN TEJIDOS INCLUIDOS EN PARAFINA (5 CORTES DE 10 MICRAS EN TUBOS
EPPENDORF), CITOLOGÍAS Y LÍQUIDOS:

o CITOMEGALOVIRUS
o HERPES SIMPLE TIPO 1
o HERPES SIMPLE TIPO 2
o HERPES TIPO 6
o MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS
o REORDENAMIENTO IgH (LINFOMA B)
o REORDENAMIENTO TCR (LINFOMA T)
o TRASLOCACIÓN (11;14)
o TRASLOCACIÓN (14;18)
o TROPHERYMA WHIPPELII
o VARICELA ZOSTER
o VIRUS BK
o VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO
o VIRUS EPSTEIN-BARR
o VIRUS JC
o VIRUS SV-40


                                Citología Vaginal



                                       54
Nombre y tipo de prueba
La citología vaginal es una prueba en la que se analizan células mediante un estudio
anatomopatológico. También se conoce con el nombre de prueba de Papanicolau.

¿Qué es la citología vaginal?
El útero se comunica con la vagina a través del cérvix o cuello del útero. El cuello se
encuentra recubierto por un epitelio de células escamosas y cilíndricas.

El cáncer de cérvix se origina por una degeneración o malignización de esas células, pero
antes de que se llegue a ese extremo, las células del epitelio sufren una serie de
alteraciones (premalignas) que pueden ser observadas mediante el microscopio.

La citología vaginal es una prueba que consiste en la toma de una muestra de las células
epiteliales que recubren el cuello de útero para su posterior estudio con microscopio, y así
poder observar precozmente cambios en la forma de las células que, tras la aplicación de
medidas oportunas, impidan una posible progresión hacia el cáncer.




Forma en que se realiza el examen

1. Debe interrogarse a la paciente sobre:

a) Si ha utilizado ducha vaginal en las 72 horas anteriores a la prueba, lo que constituye un
invalidante para tomar la muestra; al igual que haber utilizado medicamentos por vía
vaginal durante la semana anterior.

b) Si ha mantenido relaciones sexuales 24 horas antes tampoco debe recogerse la
muestra.




                                             55
c) Si ha sido sometida a exploración bimanual o manipulaciones sobre el cuello uterino
(legrados, colocación o retirada de DIU, etcétera), en las 48 horas anteriores, la muestra
carece de valor.

2. Recolección de la muestra.

a) Tener preparado previamente el material necesario para la toma y la fijación inmediata
del material, las láminas deben estar previa mente identificadas. Todo material que se va
a usar debe estar limpio, seco y estéril.

b) Colocar a la paciente en posición ginecológica y exponer correcta mente el cuello con el
empleo de un espéculo. Retirar el exceso de secreción o de mucus, si fuera necesario, sin
tocar la superficie del cuello. Cuando se coloque el espéculo no se deben utilizar
lubricantes.

c) Tomar 2 muestras, una del exocérvix y otra del endocérvix.

Conducto cervical: utilizar espátula de Ayre; introducir bien el extremo saliente en el
orificio cervical y hacer girar la espátula en el sentido de las manecillas del reloj con cierta
presión.

El raspado debe hacerse en la línea escamocolumnar (donde se encuentran los 2 epitelios)
con el extremo redondeado de la espátula, como la mayoría de los cánceres se originan en
esta unión escamocolumnar o epitelio de transición, ningún extendido puede considerarse
apropiado, a menos que esta área haya sido muestreada.

Cuando exista una ectopia del tejido endocervical es preciso recordar que la unión
escamocolumnar se encuentra en la periferia de la misma, y es en este sitio donde
debemos tomar la muestra. Si se considera necesario, pudiera tomarse una muestra
adicional en el fondo del saco posterior de la vagina con la espátula de madera por el
extremo redondeado para recoger el material depositado en el mismo. Cuando se toma
esta muestra, ésta debe ser la primera.

d) Muestras adicionales si fueran necesarias.

En caso de prolapso uterino se debe humedecer la espátula con suero fisiológico antes de
tomar la muestra.

También puede añadirse una tercera lámina tomada con un aplicador humedecido en
suero fisiológico (introducido en el orificio del cuello).

En caso de un orificio cervical muy estrecho en el que no penetra la espátula, debe
tomarse una muestra del canal endocervical con un aplicador sin montar, (esto es sin el
algodón en la parte de madera).



                                              56
Vagina seca, también se humedece la espátula con suelo fisiológico.

Puede haber un pólipo que sale por el orificio del cuello del útero, en este caso, además
de raspar alrededor del orificio tomamos una muestra del raspado del pólipo.

En caso de sangramiento, tomamos 1 ó 2 láminas adicionales de la forma siguiente: una
vez raspa do el cuello o la lesión exofítica de éste, no la extendemos en un solo sentido,
sino que con la espátula damos golpecitos en toda la extensión de la lámina, así se
desprenden las células y el resto del material que quede adherido a la lámina, o sea, el
material sólido.

Si la paciente es virgen, se toma con la pipeta de Papanicolaou.

Si está histerectomizada por enfermedad maligna, la muestra se toma de los pliegues de la
cúpula con la espátula con el extremo que tiene los salientes, y otra del centro con el
extremo redondeado.

Cuando en el cuello hay mucus cervical, éste se extrae y después se toma la muestra.

Cuando la paciente tiene mucha leucorrea, ésta se limpia introduciendo un hisopo de
algodón hacia el fondo del saco posterior, sin rozar el cuello y después se toma la muestra.

e) Extensión del material.

El material debe ser extendido de manera rápida en un solo sentido para evitar que se
sequen y dañen las células, sobre las 2 superficies de la espátula, y corresponderá cada
una a la mitad de la lámina o porta objeto. El extendido no debe quedar ni muy grueso ni
muy fino. La extensión no se hace zig-zag, ni en espiral, ni en remolino.

f) Fijación de la lámina.

Es muy importante que el tiempo transcurrido entre la recogida de la muestra y su fijación
sea el menor posible, a fin de evitar que se seque el material objeto de estudio. Nunca
debe esperarse por la siguiente para hacer fijación.

g)Después de obtenido el frotis, la lámina debe colocarse inmediata mente en un frasco
de boca ancha que contiene el líquido fijador. Este puede ser una mezcla de alcohol éter a
partes iguales o alcohol de 95 grados sólo, si no se dispone de éter. La fijación también
puede hacerse utilizando citospray.

h) La sustancia fijadora debe cubrir toda la preparación.

i) Si se utiliza citospray debe colocarse el frasco a 15 cm de distancia de la lámina y aplicar
la nebulización 2 veces moviendo la mano en ambos sentidos.



                                              57
j)Para evitar que las láminas se peguen, si se utiliza el citospray, deben esperarse unos 10
minutos antes de juntarlas, si se utiliza el frasco con alcohol éter debe colocarse a una de
las láminas una presilla movible de alambre de las que se utilizan en las oficinas para unir
varios papeles.

k) El tiempo que media entre la fijación de las láminas y su coloración en el laboratorio no
debe ser superior a los 10 días, por lo que el envío de éstas desde los sitios donde son
tomadas debe tener una periodicidad semanal.




Preparación para el examen
Coméntele al médico si:

      Está tomando algún medicamento o píldoras anticonceptivas.
      Ha tenido una citología vaginal anormal.
      Podría estar embarazada.

Dentro de las 24 horas anteriores al examen, evite:

      Las duchas vaginales.
      Tener relaciones sexuales.
      Bañarse en la tina.
      Usar tampones.

Evite programar la citología mientras tenga el período (esté menstruando), ya que esto
puede afectar la precisión del examen. Si está teniendo un sangrado anormal, el médico
todavía le puede recomendar que se haga el examen.

Orine justo antes del examen.

¿Quién debe tomar la muestra?



                                            58
Las personas idóneas para tomar la muestra son: una enfermera licenciada o
directamente el médico, quienes deben estar debidamente entrenados o capacitados en
toma de muestras de citología.




¿Quién debe leer la muestra?

La lectura, la realiza un profesional conocido como Citotecnólogo. Todas las muestras con
resultado dudoso o sospechoso deben pasar a una segunda lectura por parte de un
Patólogo, lo mismo sucede con el 10 por ciento de las muestras con resultados normales
para garantizar un adecuado control tanto en la toma, como en la lectura de la misma.

¿Quién debe entregar el resultado?

El resultado debe ser entregado por un profesional de la salud debidamente capacitado.
En el caso de las muestras con resultados anormales, la entrega debe hacerla una
enfermera licenciada para que dé a la paciente las indicaciones del caso y la remita de
nuevo al médico.

¿Cuánto tiempo se demora el resultado?

La entrega del resultado, puede tardar entre 3 y 8 días hábiles dependiendo del número
de muestras por analizar y de los resultados de las mismas. Cuando el resultado requiere
de una segunda lectura, la entrega puede tardar hasta dos semanas.

¿Qué hacer ante un resultado sospechoso?

Si los resultados de la citología son sospechosos, el profesional de la salud que entregue el
resultado debe remitir a la paciente a su EPS, para que, el médico de acuerdo al
diagnóstico ordene otras pruebas como: colposcopia, biopsia, prueba de VPH, entre otras;
según sea al caso.

¿Qué hacer ante un resultado satisfactorio?

Ante un resultado satisfactorio no se puede, ni se debe bajar la guardia. Es importante
realizarse una nueva citología en un año, pues las lesiones precancerosas y los cánceres de
cuello uterino en etapa inicial muchas veces no presentan señales ni síntomas.

Razones por las que se realiza el examen



                                             59
La citología vaginal es una prueba de detección para cáncer de cuello uterino. La mayoría
de los cánceres del cuello uterino se pueden detectar a tiempo si las mujeres se hacen
citologías vaginales (pruebas de Papanicolaou) y exámenes de la pelvis de manera
rutinaria.

Los exámenes de detección deben empezar hacia la edad de 21 años. Después del primer
examen:

      La mujer debe hacerse una citología vaginal cada 2 años para buscar cáncer de
       cuello uterino.
      Si usted tiene más de 30 años o su citología vaginal ha sido negativa durante 3
       veces consecutivas, el médico puede decirle que sólo necesita una citología vaginal
       cada 3 años.
      Si usted o su compañero sexual tienen otras parejas nuevas, entonces debe
       hacerse una citología vaginal cada 2 años.
      Después de la edad de 65 a 70 años, la mayoría de las mujeres pueden dejar de
       hacerse citologías vaginales siempre y cuando hayan obtenido tres resultados
       negativos en los exámenes dentro de los últimos 10 años.
      Si usted tiene un nuevo compañero sexual después de los 65 años, debe empezar a
       hacerse la citología vaginal nuevamente.

Usted posiblemente no necesite hacerse citologías vaginales si le han practicado una
histerectomía total (extirpación del útero y el cuello uterino) y no tiene antecedentes de
displasia cervical (células anormales), cáncer de cuello uterino u otro tipo de cáncer de la
pelvis.

Valores normales
Un valor normal (negativo) significa que significa que no hay células anormales presentes.

Nota: los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su
examen.

Significado de los resultados anormales
Los resultados anormales se agrupan como sigue:

      CASI (células atípicas de significado indeterminado). (ASCUS o AGUS, por sus siglas
       en inglés). Estos cambios pueden deberse a infección con el VPH, pero también
       pueden significar que hay cambios precancerosos.
      LIEBG (lesión intraepitelial de bajo grado) o LIEAG (lesión intraepitelial de alto
       grado). (LSIL o HSIL, respectivamente, por sus siglas en inglés). Esto significa que
       hay probabilidad de presencia de cambios precancerosos; el riesgo de cáncer es
       mayor si el resultado es una lesión intraepitelial de alto grado (LIEAG).




                                            60
      Carcinoma in situ (CIS): esto generalmente significa que es probable que los
       cambios anormales progresen hasta cáncer.
      Células escamosas atípicas (ASC-H, por sus siglas en inglés): esto significa que se
       han encontrado cambios anormales y pueden ser lesión intraepitelial de alto grado
       (LIEAG).
      Células glandulares atípicas (CGA): se observan cambios celulares que sugieren
       precáncer de la parte superior del canal cervicouterino o dentro del útero.

Cuando una citología vaginal muestra cambios anormales, se necesitan pruebas o
controles adicionales. El próximo paso depende de los resultados de la citología vaginal,
sus antecedentes previos de citologías y factores de riesgo que usted pueda tener para el
cáncer de cuello uterino.

Esto puede incluir:

      Biopsia dirigida por colposcopia.
      Un examen del VPH para verificar la presencia de los tipos de este virus que con
       mayor probabilidad causan cáncer.

Para los cambios celulares menores, los médicos generalmente recomiendan repetir la
citología vaginal en 3 a 6 meses.

Consideraciones
La citología vaginal no es un examen 100% preciso. El cáncer de cuello uterino se puede
pasar por alto en un pequeño número de casos. Afortunadamente, este tipo de cáncer se
desarrolla de manera muy lenta en la mayoría de las mujeres y las citologías vaginales de
control deben identificar cambios preocupantes a tiempo para el tratamiento.



                                      Citología del LCR

Las principales indicaciones del estudio citológico del L.C.R. son investigar la posibilidad de
infección, de una neoplasia primaria o metastática, la afectación por una leucemia o
linfoma y la interpretación de algunos problemas neurológicos no neoplásicos tales como
hemorragia, infarto y desordenes degenerativos y desmielinizantes.
Las células presentes en el L.C.R. varían con el tipo de proceso y su duración, en muchos
casos, no son especificas pero sirven para excluir un proceso neoplásico y pueden ayudar
a orientar el diagnostico.
En el L.C.R. no patológico la celularidad es muy reducida ya que el número por mmc es
de 0 a 6, pudiendo ser algo mayor en los niños. Esta celularidad mayoritariamente se
dispone en forma dispersa.




                                              61
La célula mayoritaria es el linfocito que supone entorno al 80% y el reticulomonocito,
conocido con distintos nombres, el 15 % de la celularidad en el recuento diferencial.
En los niños y en las muestras tomadas de los ventrículos o de la cisterna magna, pueden
apreciarse células ependimarias y células de los plexos coroideos.
Infrecuentemente encontraríamos células leptomeningeas, con una morfología alargada y
células cartilaginosas redondeadas vesiculosas arrastradas por la punción.
La presencia de megacariocitos puede ser por arrastre desde la médula ósea o por la
existencia          de          focos           hematopoyéticos         leptomeningeos.
En los PROCESOS INFECCIOSOS las pleocitosis y el predominio de la celularidad
inflamatoria dependerá del agente etiológico y del momento evolutivo del proceso. En
general los cuadros linfocitarios se asocian a los procesos virales, mientras que los de
predominio de neutrófilos se asocian con los procesos bacterianos. Los procesos crónicos
se caracterizan por cuadros con celularidad inflamatoria mixta.
Los pacientes con el SÍNDROME DE INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA presentan
frecuentemente complicaciones neurológicas, pero solo en una minoría, sus síntomas, son
atribuidos a una infección por gérmenes oportunistas. La presencia del criptococo suele
ser habitual en las muestras citológicas del L.C.R.
En los PROCESOS CEREBRO-VASCULARES la presencia de hematíes en el L.C.R. motiva la
aparición de eritrófagos y posteriormente siderófagos. Su número dependerá de la
intensidad del proceso y de su localización. Las hemorragias que suceden muy próximas al
cortex o a los ventrículos suelen presentarse como pseudomeningíticas.
En los PROCESOS TUMORALES del Sistema Nervioso Central, aproximadamente 2/3 son
tumores primitivos y de ellos tan solo un 10% tendrá celularidad en el L.C.R.; ya que
generalmente no presentan comunicación con los ventrículos o con el espacio
subaracnoideo.
La celularidad del L.C.R. generalmente se dispone en forma dispersa, por lo que la
presencia de grupos celulares es sugestiva de malignidad. La aparición de células malignas
en las infiltraciones meníngeas suele ser la regla.
En los niños el tumor más frecuente es el Meduloblastoma que se expresa con células
pequeñas y moldeamiento nuclear. Mientras que en los adultos son los Gliomas que
plantean diagnósticos diferenciales con carcinomas metastáticos y con melanomas.
En los LINFOMAS Y LEUCEMIAS el estudio citomorfológico del L.C.R. es de capital
importancia en el seguimiento y tratamiento de la enfermedad.

Procedimiento:

1.- Lavar la región lumbar del paciente con agua y jabón.




                                            62
2.- Realizar antisepsia de la piel según Norma Nº 3 (Uso de antisépticos y desinfectantes,
Comité I.I.H.), mediante la realización de movimientos concéntricos que van desde el lugar
donde se realiza la punción hacia fuera. Esperar tiempo de latencia del antiséptico.

3.- Proceder a la punción lumbar con técnica aséptica.

4.- Recolectar el L.C.R. en tres frascos estériles. Utilizar el segundo frasco para el estudio
microbiológico ya que el primero tiene más posibilidades de contaminación.

5.- La cantidad de L.C.R. afecta directamente la sensibilidad del diagnóstico bacteriológico.
En general, cantidades de 1-3 ml. de LCR para estudio bacteriológico, son adecuadas.


LATEX LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO: Técnica destinada a la determinación de antígenos
bacterianos específicos como apoyo diagnóstico de meningitis bacteriana:

Luego de solicitud por el médico tratante, sólo se realizará la técnica en laboratorio si el
examen citoquímico de líquido cefalorraquídeo se encuentra alterado y sugiere
meningitis.
La obtención de la muestra se realiza de acuerdo a lo mencionado en punto anterior para
obtención de muestra de L.C.R. para examen bacteriológico.

TIPOS DE CELULAS

CÉLULAS
En condiciones normales toda la población celular es mononucleada comprendiendo dos
tipos de células.

LINFOCITOS
Los linfocitos corresponden a la mayor parte de la población celular encontrándose en una
tasa entre un 80 y un 90%, se corresponde mayoritariamente con células T.

RETICULOMONOCITOS
El otro grupo de células se corresponde con reticulomonocitos, célula que ha recibido
distintos nombres (monocitos, histiocitos, células mesoteliales, células endoteliales etc.),
se encuentra en una tasa porcentual entre el 10 y el 20%. (Fig. 2)
En el examen citológico del L.C.R. nos podemos encontrar otros tipos de células sin que su
presencia suponga patología.

Células Ependimarias
Su presencia es ocasional, se presentan aisladas o en grupos, son más frecuentes en niños
y en muestras obtenidas de los ventrículos o de la cisterna magna. Su hallazgo carece de


                                             63
significación patológica, son células con citoplasmas densos y homogéneos y el núcleo en
posición central, redondeado. (Fig. 3)

Células de los Plexos Coroideos
Son morfológicamente muy próximas a las células ependimarias, presentando unos límites
citoplasmáticos menos precisos, y a veces como núcleos desnudos. (Fig. 4)(Fig. 5)

Células Cartilaginosas y Cartílago
Pueden estar presentes como consecuencia de ser arrastradas durante la punción
lumbar.(Fig. 6)(Fig. 7)

Megacariocitos
Son células grandes multinucleadas que es preciso reconocer para no malinterpretar (Fig.
8). Pueden aparecer al igual que otras células inmaduras de las estirpes eritropoyéticas
como consecuencia de una hematopoyesis leptomeningea o como material procedente de
una punción lumbar con perforación de hueso esponjoso vertebral, lo que sucede
especialmente en niños de corta edad o en personas de edad avanzada en ocasiones con
intensa osteoporosis.

Células Leptomeningeas
Las células leptomeningeas muestran una morfología elongada, se presentan aisladas o
en grupos de reducido número de células. (Fig. 9)

Sustancia Blanca
Material con textura fibrilar conteniendo células gliales normales, arrastradas en la
punción ventricular. (Fig. 10)

Neuronas
Arrestadas durante las punciones ventriculares, las podemos apreciar con sus clásicas
prolongaciones citoplasmáticas.(Fig. 11)




(Fig. 2) - Retículo monocitos. Elementos
mononucleados         con      moderado         (Fig. 3) - Células Ependimarias. Grupo
citoplasma y núcleo excéntrico.                 bidimensional de elementos con



                                           64
citoplasmas densos y núcleos en posición
central.




                                                    (Fig. 7) - Célula Cartilaginosa. Morfología
                                                    globulosa con núcleo central.
(Fig. 4) - Células de los Plexos Coroideos.
Grupo celular con límites citoplasmáticos
mal definidos.




                                                    (Fig. 8) - Megacariocito. Célula grande
                                                    multinucleada con amplio citoplasma
                                                    denso.



(Fig. 5) - Células de los Plexos Coroideos y
Células        Ependimarias.       Aspectos
citológicos.



                                                    (Fig. 9) - Células Leptomeningeas. Grupo
                                                    de elementos con morfología elongada.




(Fig. 6) - Cartílago. Fragmento de material
denso acelular.




                                               65
(Fig. 10) - Sustancia Blanca. Material          (Fig. 11) - Neurona. Elemento con
fibrilar englobando células gliales.            morfología triangular y prolongaciones
                                                citoplasmáticas.



PROCESOS INFECCIOSOS E INFLAMATORIOS

Muchos tipos de bacterias, hongos, virus y parásitos son capaces de invadir el sistema
nervioso central, de ello puede resultar una infección de las meninges, meningitis, o una
infección del parénquima cerebral, encefalitis, o un patrón mixto de infección. El L.C.R.
puede mostrar cambios en cualquiera de estas infecciones, pero los hallazgos son
generalmente más intensos y llamativos en las meningitis.

PROCESOS INFECCIOSOS AGUDOS
Dentro de la afecciones bacterianas podemos considerar dos grupos, procesos que van a
llevar un proceso más agudo como los causados por los gérmenes como Meningococo,
Estreptococo, Estafilococo Neumococo y Haemophilus Influenzee.

Diferentes organismos son más probablemente encontrados en los diferentes grupos de
edad. El meningococo es más común en adolescentes, mientras que el neumococo es más
visto en los extremos de la vida. El Esclerichia Coli se encuentra solo en neonatos.

Presentan cuadros citológicos indistinguibles en relación con el tipo de germen. Los
cuadros citológicos son distintos en relación con los distintos momentos evolutivos del
proceso, que aun siendo un todo continuado en ellos podemos distinguir 3 fases
evolutivas.

     -     Fase exudativa, se caracteriza por altas pleocitosis, con marcado predominio de
     polinucleares neutrófilos, en la fórmula porcentual del 70-90%.(Fig. 12)
     -     Fase reticulomonocitaria, sobreviene después de haber pasado algunos días, el
     número de células ha disminuido, la tasa de polinucleares neutrófilos también ha
     descendido, aumentando los reticulomonocitos algunos de los cuales puede mostrar
     diferenciación macrofágica.(Fig. 13)



                                           66
     -    Fase resolutiva, el paciente está prácticamente curado, el número de células ha
     descendido notablemente, el cuadro citológico se parece mucho al normal con
     abundantes linfocitos.(Fig. 14)

PROCESOS INFECCIOSOS CRÓNICOS
Otros grupos de procesos pueden llevar un curso no tan agudo. Meningitis Tuberculosa,
Meningo Encefalitis Granulomatosa de la Sarcoidosis, la Brucelosis y otras llevan un curso
evolutivo similar, como las micosis. En algunas referencias, la tuberculosis viene descrita
como correspondiendo a un cuadro linfocitario, al igual que sucede en las serosas,
nosotros sin embargo nunca la hemos apreciado así.

Una primera fase de este grupo se caracteriza por pleocitosis medias, con tasa de
polinucleares neutrófilos también medias.(Fig. 15)

Con el paso de los días se aprecia un descenso del número de células, con un descenso
paralelo de los polinucleares neutrófilos, si el curso evolutivo del proceso es bueno, suelen
apreciarse algunas células plasmáticas y eosinófilos. Es de considerar que en algunos de
estos procesos en cualquier momento puede aparecer una reactivación o recidiva lo que
llevaría consigo un aumento de la pleocitosis y de la tasa de polinucleares neutrófilos.

PROCESOS MICÓTICOS
El hongo más común causante de meningitis es el Cryptococo particularmente en
pacientes inmunocomprometidos, pero también se han descrito meningitis por otros
hongos Cándida Albicans, Mucormicosis y Aspergillus. En general el L.C.R. no presenta
ningún rasgo específico con predominio de neutrófilos y con presencia de células
plasmáticas y eosinófilos.

CRIPTOCOCOSIS
La criptococosis es la infección micótica más frecuente del sistema nervioso central. El
criptococo puede causar enfermedad en personas inmunocompetentes e
inmunodeprimidas (1,2). Es el organismo que se identifica fácilmente en el L.C.R. (Fig. 16) .
El grado de inflamación depende de la inmunocompetencia del paciente. El L.C.R. del
paciente inmunocomprometido muestra escasa respuesta inflamatoria y abundantes
criptococos.

PROCESOS VIRALES
Las meningitis virales más comunes están causadas por el grupo del enterovirus,
presentan altas pleocitosis a base linfocitos (Fig. 17). Si la primera punción se realiza en la
fase inicial pueden encontrarse polinucleares neutrófilos en proporción variable. Las



                                              67
células reactivas son prácticamente T, por lo que la inmunocitoquímica puede ayudar a
distinguirlas de muchas neoplasias células linfoides del S.N.C. que son neoplasias B.

Esto no es estricto, ya que hay procesos virales como la meningitis herpética, que cursa
con necrosis y hemorrágica, presenta una celularidad mixta con células con diferenciación
macrofágica y en la que no se aprecia en las células los efectos citopáticos que se aprecian
en otras topografías.



PACIENTES CON SIDA
Los pacientes con SIDA pueden presentar tres tipos de procesos en el S.N.C.:

Encefalopatía, el L.C.R. de estos pacientes generalmente contiene un infiltrado
inflamatorio crónico inespecífico y en el raramente pueden encontrarse células
multinucleadas.

El segundo apartado se corresponde con las infecciones por gérmenes oportunistas de los
que los más frecuentes son Cryptococo Neoformans, Toxoplasma, Mycobacterias, Cándida
y virus como el CMV y el Virus de la Leucoencefalopatía Multifocal Progresiva, que
generalmente en el L.C.R. dan cuadros citológicos inespecíficos, salvo en la Cryptococosis
en la cual generalmente se aprecia el hongo, las inclusiones del CMV se han descrito en
alguna ocasión (1, 3).

El tercer apartado de las alteraciones del SNC en pacientes con SIDA serían los tumores,
de los que el linfoma es el más frecuente.

MENINGITIS EOSINOFÍLICA
Una tasa importante de eosinófilos ha sido descrita en diversas ocasiones, como procesos
parasitarios y alérgicos y más recientemente con la colocación de material sintético
después de intervenciones en el S.N.C. (Fig. 18)

MENINGITIS EN LA ENFERMEDAD DE BECET
Los pacientes con la enfermedad de Becet presentan complicaciones neurológicas en el
22% de los casos, mostrando pleocitosis generalmente por debajo de 100 células por
mmc. con una población celular mixta.

MENINGITIS DE MOLLARET
Descrita por de Mollaret en 1944, es una forma rara de meningitis aséptica, de causa
desconocida que se caracteriza por etapas recurrentes. Los cambios citológicos son
característicos pero no diagnósticos, hay una moderada a discreta pleocitosis, con una


                                            68
celularidad mixta, pero el rasgo más característico es la presencia de célula
mononucleadas, llamadas células de Mollaret, son células grandes con núcleo irregular y
citoplasma frágil (4,5). (Fig. 19)

PROCESOS INFLAMATORIOS INESPECÍFICOS
Los procesos inflamatorios inespecíficos en el contexto de enfermedades neurológicas (E.
Parkinson, Corea de Huntington, Esclerosis Múltiple, S. Guillen Barre, E. Creuzfeld-Jakob,
Encefalopatía SIDA) pueden mostrar solo en el L.C.R. hallazgos citológicos inespecíficos.




                                                (Fig. 14) - Cuadro citológico         con
 (Fig. 12) - Cuadro citológico con fondo
                                                predominio de células linfoides.
 sucio y abundante celularidad a base de
 neutrófilos.




                                                (Fig. 15) - Cuadro citológico formado por
                                                una población celular mixta.


(Fig. 13) - Cuadro citológico        con
celularidad   mixta,  presencia       de
reticulomonocitos,   neutrófilos       y
linfocitos.




                                                (Fig. 16) - Cuadro citológico escasamente
                                                celular con presencia de criptococos.



                                           69
(Fig. 17) - Cuadro citológico con                (Fig. 18) - Meningitis Eosinofílica
moderada pleocitosis a base de células
linfoides.




                                                 (Fig. 19) - Células de Mollaret. Elementos
                                                 mononucleados con núcleos irregulares.
PROCESOS VASCULARES

  HEMORRAGIA CEREBRAL
La hemorragia cerebral es un diagnóstico que se plantea con frecuencia, ante pacientes
con signos con afectación encefálica (6). Su diagnóstico se confirma por la presencia de
eritrófagos y/o siderófagos, según el momento evolutivo del proceso. La cantidad de
eritrófagos y siderófagos guarda relación con la intensidad de la hemorragia y su
localización.(Fig. 20)(Fig. 21)

El esquema recoge la distribución en el tiempo de estas células.

Si han transcurrido más de 7 días, suponiendo que el episodio hemorrágico haya sido
único, ya no veremos hematíes en el L.C.R., excepto si la punción es traumática. Si ya han
transcurrido más de dos semanas solo veremos siderófagos.

En hemorragias cerebrales, cuando estas suceden cerca del cortex o de los ventrículos, se
dan cuadros citológicos con una intensa reacción celular, citológicamente pueden sugerir
una meningitis con artefacto hemorrágico de punción.(Fig. 22)

ACCIDENTES VASCULARES OCLUSIVOS
Los accidentes vasculares oclusivos van a tener una expresión menos significativa y esta va
a depender de la localización, de la extensión del territorio afectado y del momento
evolutivo del proceso.


                                            70
Nos vamos a encontrar cuadros citológicos con moderada pleocitosis, con una celularidad
mixta y con presencia de células con diferenciación macrofágica. (Fig. 23)




(Fig. 20) - Eritrófago. Macrófago con
hematíes en su citoplasma.                      (Fig. 22) - Fondo hemorrágico con
                                                abundantes neutrófilos.




                                                (Fig. 23) - Cuadro citológico con
(Fig. 21) - Siderófagos. Macrófagos con         celularidad mixta con presencia de
abundante pigmento férrico en sus               macrófagos
citoplasmas.



PROCESOS TUMORALES
Varias referencias indican que las metástasis leptomeningeas aparecen entre el 4 y el 15 %
de los pacientes con tumores sólidos, entre el 7 y el 15% de pacientes con linfoma, entre
el 5 y el 15 % en pacientes con leucemia y entre el 1 y el 2% en pacientes con tumores
primarios del cerebro (7-11). La carcinomatosis leptomeningea aparece en torno al 32% de
los niños con tumores primarios del cerebro(12,13).La extensión a las meninges ha sido
descrita para todos los tipos de tumores del SNC pero es más frecuente en tumores
embrionarios tales como el Meduloblastoma y Tumores Neurectodérmicos Primitivos (14-
17)
   .

El porcentaje de citologías negativas depende en parte del lugar y de la extensión de la
enfermedad leptomeningea. En presencia de signos o síntomas medulares, el L.C.R.
obtenidos por punción lumbar presenta más positividades. En presencia de signos y




                                           71
síntomas craneales el L.C.R. obtenido por punción ventricular presenta más
positividades (10, 18-20).

En pacientes con metástasis meningeas se detectan células malignas con la primera
punción en el 67% de los casos, punciones adicionales elevan esta tasa al 84%, más de
tres punciones no aumenta significativamente la sensibilidad (10,21). Algunos estudios
muestran que la sensibilidad está relacionada con la extensión de la enfermedad
leptomeningea, es del 38% cuando la enfermedad es focal y es del 67% cuando esta
diseminada por las meningeas, las células malignas son detectadas en aproximadamente
un tercio de pacientes con infiltración meníngea focal, mientras aproximadamente se hace
en dos tercios de los casos cuando la carcinomatosis meníngea es difusa, la probabilidad
de obtener positividad en el L.C.R. en pacientes con diseminación meníngea es
directamente proporcional a la extensión de la enfermedad meníngea (21).

El uso de anticuerpos monoclonales no aumenta significativamente la sensibilidad (22 - 26),
aunque en el caso de leucemias y linfomas son de utilidad para la distribución entre
malignidad y elementos reactivos (26, 27).

Las células pueden aparecer aisladas o en pequeños grupos, las células de los carcinomas
en el L.C.R. tienden a disociarse más que a formar acúmulos, como en los líquidos de los
derrames serosos, a excepción del Oat Cell, y también muestran tendencia a redondearse,
tanto que los diferentes tipos de neoplasias tienden a parecerse más unas a otras, en
muchos casos no es posible determinar el tipo celular. Frecuentemente los diagnósticos
diferenciales incluyen carcinoma, melanoma y linfoma.

TUMORES PRIMITIVOS
Los tumores del S.N.C. pueden enviar células al L.C.R. las que pueden reconocerse como
malignas, pero generalmente no es posible tipificar el tipo de tumor sin una correlación
clínica e histológica.

El cuadro citológico varía con los diferentes tipos de neoplasia, su grado y con el lugar
anatómico, aquellos que están cerca de la superficie envían más células al espacio
subaracnoideo o a los ventrículos. Las neoplasias de alto grado envían más células que las
variantes benignas.

Los tumores del S.N.C. se aprecian con menos frecuencia que los tumores metastáticos,
leucemias y linfomas.

En adultos el tumor más frecuentemente visto en el L.C.R. es el glioblastoma
multiforme (25) y en niños el meduloblastoma (28).




                                            72
MEDULOBLASTOMA
El meduloblastoma es un tumor de células pequeñas, pobremente diferenciado. Es
predominantemente un proceso de niños pero a veces aparece en adultos, que se origina
en el cerebelo, tiende a invadir el 4º ventrículo adyacente y las meninges.
Aproximadamente el 25% de los pacientes con meduloblastoma tiene positividad en la
citología del L.C.R.

Las células en el L.C.R. tienen pequeño tamaño con un núcleo hipercromático y escaso
citoplasma pudiendo presentarse aisladas o en pequeños grupos, a veces con
moldeamiento nuclear (29,30). (Fig. 24)

Morfológicamente las células tumorales son indistinguibles de otros procesos anaplásicos
de células pequeñas Neuroblastoma, Pinoblastoma, Sarcoma de Ewing.
Rabdomioblastoma Embrionario, todos los cuales pueden identificarse en el L.C.R. de
niños o en el Oat Cell en adultos.

GLIOBLASTOMA MULTIFORME
El astrocitoma anaplásico y el glioblastoma multiforme tiene una presencia variable
debido a su heterogeneidad, constituyen del 15 al 20% de los tumores intracraneales.

Las células exfoliadas pueden ser grandes, pleomorficas y multinucleadas con citoplasma
abundante o escaso y pueden ser pequeñas anaplásicas con núcleo hipercromático. (Fig.
25)

Un tipo infrecuente de astrocitoma es la gliomatosis cerebri que representa una
proliferación difusa de astrocitos sin presencia de masas tumorales, presentando también
cuadros citológicos en el L.C.R. variables (31,32).

EPENDIMOMA
El ependimoma tiene su origen en las células limitantes de los ventrículos por lo que las
células tumorales suelen encontrarse de preferencia en los líquidos ventricular y cisternal
son más comunes en niños y adolescentes, aunque pueden aparecer en adultos. En niños
aparecen más frecuentemente en el 3º ventrículo y en adultos en la médula.

Las células exfoliadas en grupos con una morfología columnar o cúbica difíciles de
distinguir de las células ependimarias benignas (33).(Fig. 26)




                                            73
OLIGODENDROGLIOMA
El oligodendroglioma es más frecuente en adultos. El tumor está compuesto de células
poligonales uniformes con núcleos redondos. En los cortes histológicos tiene un espacio
claro dando la apariencia de huevo frito.

Constituye del 5 al 7% de los gliomas.

Las células en el L.C.R. son redondeadas con bordes precisos núcleos redondeados y un
nucléolo prominente (Fig. 27)

En algunos casos se pueden apreciar inclusiones intracitoplásmaticas, que a diferencia de
las que se pueden apreciar en el ependimoma son granulares y brillantes. Parece ser que
su presencia guarda relación con la agresividad del tumor y son más frecuentes y
abundantes en tumores de alto grado (35).

En el oligodendroglioma anaplásico se han descrito otro tipo de células, para uno
denominadas minigemistocitos o células transicionales, se tratan de células pequeñas en
grupos con núcleo redondeado excéntrico y citoplasma abundante cianofilo.

TUMORES DE LOS PLEXOS COROIDEOS
Los tumores de los plexos coroideos suponen alrededor del 0,5% de los tumores
intracraneales. La gran mayoría son citológicamente benignos.

El L.C.R. presenta grupos de células cuboidales uniformes con núcleo redondeado y
apariencia benigna(36). Cuando se aprecia un número muy abundante se puede sugerir el
diagnóstico de papiloma.

Los Carcinomas de los Plexos Coroideos son infrecuentes, por encima del 80% de los casos
se dan en niños e infantes. Suponen entre el 20 y el 40% de los tumores de los plexos
coroideos en niños. Son morfológicamente indistinguibles de los adenocarcinomas
papilares.

TUMORES DE CÉLULAS GERMINALES
Los tumores de células germinales pueden presentar un amplio espectro de tumores
testiculares y ováricos de células germinales. El más común es el disgerminoma.

Las células del disgerminoma son grandes con moderada cantidad de citoplasma, núcleo
redondeado y nucléolo prominente, se presentan aisladas o en pequeños grupos en el
L.C.R.




                                           74
MENINGIOMAS
Los meningiomas suponen el 14% de los tumores intracraneales. Casi todos son benignos,
por lo que la presencia de células en el L.C.R. es muy infrecuente.

TUMORES METASTASICOS
Muchos tipos de tumores metastatizan en el S.N.C. y liberan las células al L.C.R. Las
metástasis leptomeningeas se encuentran en aproximadamente el 8% de los pacientes
con cáncer sistémico (37,38). Los lugares más comunes son la base del cráneo, la superficie
dorsal de la médula y la cola de caballo, en relación con que en estos lugares el flujo del
L.C.R. es más lento (7,8). Otros tipos de tumores relativamente frecuentes, carcinoma de
células renales, adenocarcinoma de colon y carcinoma de células transicionales de vejiga
no suelen apreciarse células en el L.C.R. ya que tienden a producir metástasis solitarias en
el cerebro más que a producir lesiones multifocales o carcinomatosis meníngea (39-52).

La afectación meníngea puede ser el primer hallazgo, particularmente en los casos de
tumores que metastatizan temprano: el Oat Cell, el Adenocarcinoma de Estomago, el
Adenocarcinoma de Páncreas y el Coriocarcinoma. Aunque el adenocarcinoma de
estómago es menos frecuente, que lo era en años anteriores, todavía se ven casos de
carcinomatosis meníngea por él y es responsable de muchos casos que se presentan con
tumor oculto primario (42).

En aproximadamente en el 10% de los pacientes con L.C.R. positivo es la primera
manifestación de cáncer(21, 36, 52, 53).

El adenocarcinoma es el diagnóstico histológico más frecuente y la mama, el pulmón y el
melanoma son los tumores primarios que metastatizan más frecuentemente a las
leptomeninges (21, 54, 55).

Aunque el carcinoma de células pequeñas de pulmón y el melanoma tienen el porcentaje
más alto de extenderse a las leptomeninges el 11 y el 20% respectivamente debido a la
alta incidencia de cáncer de mama con un 5% de extensión son los casos más abundantes
en las largas series (21,56-59). Los carcinomas de origen primario desconocido constituyen
del 1 al 7% de todos los casos de neoplasias meningeas (20, 21).

CARCINOMAS DE PULMÓN
Todos los tipos histológicos de tumores de cáncer de pulmón pueden encontrarse en
muestras de L.C.R. esto sucede en el 2% (95) de los carcinomas pulmonares y entre el 5 y el
18% (94) de los carcinomas bronquiales. Los Adenocarcinomas son los más frecuentes y el
Carcinoma Epidermoide extremadamente infrecuente (60).




                                            75
Los Adenocarcinomas se presentan con células aisladas o en pequeños grupos con células
grandes atípicas que manifiestan rasgos de malignidad de un adenocarcinoma de pulmón.
(Fig. 29)

La carcinomatosis meníngea se presenta aproximadamente en el 13% de los pacientes con
Oat Cell de pulmón (56, 60 – 62). El Oat Cell se manifiesta con célula pequeñas aisladas o en
grupos con amoldamiento nuclear en ocasiones. (Fig.30)

De los Carcinomas Epidermoides existen escasas referencias bibliográficas casi todas ellas
referidas a la presentación de un solo caso (63-67). (Fig.31)

CARCINOMAS DE MAMA
La incidencia de la carcinomatosis meníngea en el cáncer de mama en muchos estudios
clínicos va del 1 al 5% de los casos.

El desarrollo de la carcinomatosis meníngea como una sola manifestación del cáncer de
mama es infrecuente, entre el 70 y el 90% de estos pacientes tiene la enfermedad
diseminada (68,69).

En esta carcinomatosis meníngea, el diagnostico citológico se obtiene en el 60% de los
casos con la primera punción aumentando al 79% al repetir punción (70).

El carcinoma lobular es el que con más frecuencia se asocia con metástasis
leptomeningeas. (Fig.32)

Es difícil de diferenciar el carcinoma de mama de otros carcinomas (70 - 76) (Fig.33). La
formación de mórulas o de cadenas es infrecuente en L.C.R. Las células del carcinoma
lobular son más pequeñas que las células del carcinoma ductal. La presencia de células en
anillo de sello se ven en ambos tipos de carcinoma lobular y ductal. (Fig.34)

MELANOMAS
Los melanomas pueden metastatizar a las meninges desde diversas partes del organismo,
o pueden tener origen en las leptomeninges como tumor primario del S.N.C.

En estudio de material de autopsia se ha encontrado carcinomatosis meníngea en un 30%
de los casos. La carcinomatosis meníngea por melanoma supone el 10 % de las
carcinomatosis y ocupa el 3 o 4 puesto de las carcinomatosis (57, 77, 78).

Las células del melanoma tienden a presentarse aisladas o en pequeños grupos, pueden
mostrar cuadros muy polimorfos, en ocasiones es posible apreciar melanina
citoplasmática. (Fig.34)




                                             76
LINFOMAS
La citología del L.C.R. es sólo de valor diagnostico del 20 al 30 % de linfomas primarios y
del 80% de los linfomas que afectan secundariamente al S.N.C. por lo que el diagnostico
diferencial debe siempre incluir la pleocitosis linfocitaria, que puede ser debida a
radiación, quimioterapia e infecciones.

El linfoma no Hodgkin afecta al S.N.C. aproximadamente en el 5% de los casos, con
afectación de las meninges en el 3,7% de los casos, pero esta incidencia aumenta al 27%
en pacientes con los linfomas de alto grado.

Rara vez los linfomas son tumores primarios del S.N.C., constituyen menos del 1% de los
tumores primarios intracraneales.

Algunos tipos de linfomas tienen más alta incidencia para la afectación del S.N.C. más que
otros, los linfomas linfoblasticos e indiferenciados tiene más alta incidencia para la
afectación del S.N.C... Algunos linfomas como la enfermedad de HODGKIN y los linfomas
linfociticos casi nunca se aprecian en el L.C.R.

Típicamente en el L.C.R. se muestra con una población dispersa monótona con células
atípicas. (Fig.36)

El diagnostico es fácil en ocasiones por la sola morfología celular, pero en otras plantea
mayores dificultades, en especial cuando las células son de pequeño tamaño (79, 82-84).
(Fig.37)(Fig.38)

El diagnostico diferencial es con la linfocitosis reactiva causada por: virus, otras meningitis
y otras condiciones reactivas. Muchos líquidos reactivos e inflamatorios están compuestos
por células T. mientras que en la gran mayoría de los linfomas que afectan al S.N.C. son B,
por lo que un predominio de células B es altamente sospechoso de linfoma. La utilización
de la inmunocitoquímica y de la citometría de flujo es de importante ayuda en la
diferenciación entre los linfocitos reactivos y neoplásicos (27, 80, 87, 88).

Los linfomas que afectan al SNC tienden a ser de alto grado e incluyen neoplasias
agresivas de células B, linfomas asociados con estados de inmunodeficiencia y linfomas
primarios del SNC.

En pleocitosis reactivas con presencia de linfocitos y/o reticulomonocitos frecuentemente
se encuentra una población celular más heterogénea.

Las infecciones virales y la quimioterapia pueden transformar las células normales
mononucleadas en células similares a blastos (16).




                                              77
En la serie de linfomas y leucemias pueden existir disociaciones en el número de células y
la presencia de células malignas, esto sucede en aproximadamente el 20% de los casos (el
29% de los diagnósticos positivos para células malignas tienen menos de 4 células
mmc) (10, 79, 87, 88) (Fig.39). En cuyo caso es necesaria una considerable experiencia para
etiquetar el proceso.

LEUCEMIAS
La participación de las leptomeningeas en las leucemias, es un hecho conocido desde hace
tiempo, ya en 1823 fueron mencionadas por Burns, especialmente desde la introducción
de los tratamientos que al prolongar la supervivencia favorecen la aparición de diversas
complicaciones.

En aproximadamente el 80% (16) de los pacientes con leucemia linfoblástica aguda y el 60%
de los pacientes con leucemia mieloide aguda van a tener células en el L.C.R. durante
algún período de su enfermedad. La leucemia mieloide aguda son más comunes en
adultos morfológicamente puede ser mucho más heterogénea que la leucemia aguda
linfoblástica.

La leucemia linfoblástica aguda presenta afectación del S.N.C. en el 5% de los casos en el
momento del diagnóstico. (Fig.40)

El L.C.R. esta raramente afectado en las leucemias crónicas. Las leucocitosis en pacientes
con leucemias crónicas son debidas probablemente a infección más que a infiltración
leucémica. La infección aparece entre el 2 y el 13% de los pacientes que reciben
tratamiento intratecal (10).

La infiltración del L.C.R. por leucemia linfocítica crónica o leucemia mieloide crónica es
excepcional y corresponde generalmente a transformación blástica. (Fig.41)

Muchos protocolos de tratamiento incluyen terapéutica profiláctica blástica. Los pacientes
que reciben terapia profiláctica generalmente tienen exámenes periódicos del L.C.R. La
diferenciación de las células reactivas requiere considerable experiencia especialmente si
el número de células es reducido. Su núcleo es más grande que los linfocitos normales y
tienen uno o más nucléolos, las mitosis son frecuentes.

MIELOMATOSIS MENÍNGEA
La mielomatosis meníngea es un proceso infrecuente con muy pocos casos descritos en la
literatura, y tan solo algunos de ellos desde el punto de vista citológico. Suele suceder en
la última fase de la enfermedad o por afectación directa desde las lesiones óseas. La
afectación meníngea puede producirse por invasión vía hidatógena, de forma similar a lo



                                            78
que ocurre en las leucemias agudas. El diagnóstico se basa en los hallazgos citológicos con
presencia de células plasmáticas atípicas y en la demostración de su clonalidad, junto con
los datos clínicos (89, 90, 91) (Fig.42)(Fig.43). En ocasiones el número de células plasmáticas
en el L.C.R. es muy escaso planteándose diagnósticos diferenciales con diversos
procesos (92, 93).




(Fig.    24)      -    Meduloblastoma.
Conglomerados celulares de elementos               (Fig. 27) - Oligodendroglioma. Células
con escaso citoplasma.                             redondeadas uniformes con nucleolos
                                                   prominentes.




(Fig. 25) - Gliobastoma Multiforme.
Grupo irregular de células pleomórficas
con núcleos hipercromáticos.                       (Fig. 28 - Disgerminoma. Células aisladas
                                                   con núcleo redondeado y nucleolo
                                                   prominente.




(Fig. 26) - Ependimoma. Grupo
bidimensional de células regulares
monomorfas.




                                              79
                                            (Fig.32) - Carcinoma Lobular de Mama.
                                            Celularidad dispersa y en pequeños
(Fig.29) - Adenocarcinoma de Pulmón.
                                            grupos de células neoplásicas.
Grupo celular con marcado atipismo.




(Fig.30) - Oat Cell de Pulmón. Grupo
celular de elementos pequeños con           (Fig.33) - Carcinoma Ductal de Mama.
nucleos hipercromáticos.                    Celularidad neoplásica en forma aislada.




                                            (Fig.34) - Carcinoma Ductal de Mama.
                                            Celularidad aislada con células en anillo
(Fig.31) - Carcinoma Epidermoide de         de sello.
Pulmón. Grupo celular con abundantes
citoplasmas, algunos vacuolados y,
núcleos irregulares.


                                       80
                                                (Fig.38) - Linfoma. Celularidad linfoide
(Fig.35) - Melanoma. Células neoplásicas        con discreta atipia celular.
con nucleolo prominente y pigmento
citoplasmático.




                                                (Fig.39) - Linfoma. Escasas células
                                                linfoides atípicas en muestra con 5
(Fig.36) - Linfoma. Población celular           elementos mmc.
dispersa de elementos linfoides.




                                                (Fig.40)    -  Leucemia.    Importante
                                                pleocitosis a base de células linfoides
                                                atipicas.
(Fig.37) - Linfoma. Elementos linfoides
con marcada atipia celular.




                                           81
                                                  (Fig.42) - Mieloma. Celularidad dispersa
(Fig.41)    -    Leucemia.     Abundante          con hábito plasmocitoide.
celularidad B.




                                                  (Fig.43) - Mieloma. Detalle citológico
Citología de orina

1. Introducción, obtención y procesamiento del material.

La citología urinaria va a utilizarse principalmente para el diagnóstico de procesos
tumorales o inflamatorios, que afectan a la uretra, vejiga, uréteres y pelvis renal; los
tumores parenquimatosos del riñón o de la próstata suelen diagnosticarse por otros
métodos.

Para que sus resultados sean óptimos, el diagnóstico citológico, al igual que el histológico,
requiere dos premisas fundamentales: una adecuada representación de la lesión y una
correcta preparación del material en el laboratorio. El material idóneo es el que contiene
un número suficiente de células, adecuadamente preservadas, para poder realizar el
diagnóstico de la lesión preexistente.

La orina puede obtenerse por micción espontánea o mediante maniobras de
instrumentación, como el lavado vesical, la cateterización y el cepillado.

La orina obtenida por micción espontánea representa, salvo que exista una indicación
clínica de visualización de la vejiga o lesiones del tracto urinario superior, el método más
sencillo y que menos problemas plantea al paciente.




                                             82
Para evitar la aparición de cambios degenerativos, no debe utilizarse la primera orina de la
mañana, porque las células han estado demasiado tiempo sometidas al efecto ambiental
de la orina.

Se ha recomendado la hidratación previa, y es conveniente la utilización de dos muestras
de cada paciente, al menos una de ellas con hidratación.

El rendimiento diagnóstico de ambas muestras es comparable, aunque la calidad
citomorfológica y el número de células es superior en la muestra que se ha obtenido
mediante hidratación.

La orina puede utilizarse en fresco o usando sustancias para prefijar el material. El
material utilizado en fresco representa en principio el sistema más idóneo, mostrando un
adecuado detalle morfológico, sin los cambios por artefactos provocados por la
prefijación.

El deterioro de las células comienza en el mismo momento de ser exfoliadas y sometidas a
los efectos ambientales de la orina vesical, por lo que el material fresco debe ser remitido
al laboratorio rápidamente, si es posible en las dos primeras horas.

La prefijación de la orina permite conservar el material varios días o meses sin deterioro
importante de las células. El alcohol etílico al 50% es el prefijador más utilizado, pero
condiciona picnosis nuclear y disminuye la viscosidad del material, con lo que las células se
adhieren con mayor dificultad al cristal.

Una vez obtenido el material, y dado que la orina es poco celular, se deben realizar
técnicas de concentración celular, ya sea centrifugado, citocentrifugado o técnicas de
filtrado con técnicas de membrana tipo nucleopore o millipore, que posteriormente se
tiñen con el método de Papanicolaou.

2. Histología y citología normal de la vía urinaria

La mayor parte de las células presentes en la citología urinaria proceden del epitelio de
revestimiento del tracto urológico. El urotelio o epitelio transicional normal, está
constituido por 3-7 hileras de células; las células superficiales son grandes, a veces
multinucleadas, y cubren varias células de los estratos inferiores, que son más pequeñas,
con un solo núcleo, redondeadas o piriformes.

Orina espontánea

La orina emitida espontáneamente posee escasas células, presenta un fondo limpio y tan
sólo ocasionales hematíes.




                                               83
Una característica de la citología urinaria es la variación del tamaño y la forma de las
células uroteliales. Las superficiales son poligonales, de tamaño similar a una célula
escamosa, y con cierta frecuencia presentan un borde convexo correspondiente a la
superficie luminar. Junto a estas células, aparecen otras más pequeñas, redondeadas o
piriformes, que corresponden a estratos más profundos. Los núcleos tienen la cromatina
finamente granular y pueden tener un pequeño nucléolo.

Con relativa frecuencia, las células en la orina presentan cambios degenerativos. El núcleo
aparece en principio claro o transparente, y posteriormente se transforma en picnótico. El
citoplasma muestra vacuolización y a veces granulaciones eosinófilas, éstas no parecen
guardar ninguna relación con procesos patológicos específicos, sino más bien con
fenómenos de tipo degenerativo.

Nunca se deben valorar células con núcleo picnótico en el que no se pueda discernir la
estructura de la cromatina.

Un dato muy importante de la orina obtenida espontáneamente es que las células se
disponen aisladas, siendo los grupos muy ocasionales.

Por lo tanto, las características que definen como normal una muestra de orina obtenida
por micción espontánea son:

-Celularidad escasa.

-Polimorfismo celular.

-Grupos celulares ocasionales.

-Fondo limpio.

Orina instrumentada

La citología urinaria obtenida por cateterización o instrumentación es, a diferencia de la
anterior, rica en células y con grupos frecuentes. El polimorfismo celular es más
acentuado, y frecuentemente se ven células superficiales muy grandes, multinucleadas y
con citoplasmas finamente vacuolados. Este tipo de material es habitual en el seguimiento
de enfermos con neoplasias vesicales, y por tanto el citopatólogo debe estar familiarizado
con este tipo de muestra para no cometer errores.

3. Citología de las lesiones no tumorales del tracto urinario

3.1. Procesos inflamatorios infecciosos




                                             84
Los procesos inflamatorios del tracto urológico se asocian casi siempre a maniobras de
instrumentación o problemas obstructivos al flujo urinario, o a ambos.

La citología se va a caracterizar por proporcionar un material con hematíes y abundantes
células inflamatorias; existe un notable aumento en la descamación de las células
uroteliales, que aparecen aisladas o en grupos, apreciándose cambios degenerativos o
reactivos que puedan sugerir malignidad, como la anisocitosis, la vacuolización
citoplasmática, y unos núcleos vesiculosos o intensamente picnóticos.

La mayor parte de las veces, el cuadro es inespecífico desde el punto de vista etiológico.
Dentro de los procesos inflamatorios específicos, ocasionalmente pueden identificarse
hongos, generalmente candida albicans, y virus, principalmente citomegalovirus y virus
herpes, que muestran el mismo aspecto citológico que en otras localizaciones. El virus
polioma, que fue descrito citológicamente por Colleman, en 1973, en muestras urinarias,
se caracteriza desde el punto de vista citológico por la presencia de células aisladas, con
núcleo aumentado de tamaño, y con una gran inclusión basófila y homogénea
intranuclear. Esta inclusión puede ocupar totalmente el núcleo o bien hacerlo
parcialmente, dejando un aro perinuclear similar al que se describe en el citomegalovirus.
Esta última forma es la menos frecuente. En ocasiones el aspecto agrandado e
“hipercromático” de los núcleos puede hacer pensar que células infectadas por este tipo
de virus corresponden a neoplasias.

Antes de realizar exclusivamente por la muestra citológica un diagnóstico de infección por
polioma virus, es recomendable realizar comprobaciones ultraestructurales y de técnicas
de identificación virales.

Alteraciones reactivas similares a las descritas inicialmente, pero más acentuadas, se
observan en los enfermos con litiasis, en los que se suele asociarse el efecto mecánico del
cálculo y los cambios inflamatorios añadidos. Este es el proceso patológico no tumoral,
que condiciona el más alto índice de falsos diagnósticos positivos.

La malacoplaquia es una enfermedad granulomatosa, poco frecuente, que se describió
inicialmente en la vejiga y que posteriormente se la ha identificado en otras muchas
localizaciones. Desde el punto de vista histológico, se caracteriza por la presencia de gran
cantidad de histiocitos en la lámina propia, que constituyen nódulos de color amarillento
cuando se observan con el cistoscopio. Algunos de estos histiocitos contienen inclusiones
intracitoplasmáticas, de aspecto homogéneo o concéntrico, que se denominan cuerpos de
Michaelis-Gutmann. Este hallazgo es muy poco frecuente en las muestras de orina, ya que
la lesión se sitúa por debajo del epitelio; no obstante, en ocasiones, cuando el epitelio se
ulcera aparecen estos histiocitos con cuerpos de Michaelis-Gutmann en la muestra
citológica. Estos cuerpos son P.A.S y Perl positivos, técnicas que en ocasiones facilitan su
identificación.




                                            85
3.2. Cambios citológicos inducidos por tratamiento

Los cambios citológicos producidos a consecuencia de la radiación o la quimioterapia, o
ambas, pueden causar alteraciones celulares difíciles de evaluar. La radiación de la zona
pélvica, puede producir los cambios típicos de radiación:

-Intenso aumento del tamaño celular y nuclear.

-Vacuolización del citoplasma y, en ocasiones, del núcleo.

-Multinucleación.

-Formas anormales.

El diagnóstico diferencial entre tumor persistente y células con efecto de radiación puede
ser difícil. La conservación de la relación núcleo/citoplasma y la ausencia de un patrón
cromatínico anormal van a favor de cambios posradiación. Además, las citologías no
tumorales con cambios de radiación presentan frecuentemente una falta de transición
entre las células atípicas y el resto de la población celular.

Los fármacos alquilantes, y en especial, la ciclofosfamida, producen alteraciones intensas
de las células uroteliales. Los cambios son similares a los de la radiación, con aumento de
tamaño citoplasmático, nuclear y a veces variaciones del cociente núcleo-citoplasma. El
núcleo tiene un contorno irregular y es siempre hipercromático; la cromatina se dispone
en gránulos gruesos distribuidos de modo regular.

También se utiliza la BCG en el tratamiento de carcinomas in situ. La utilización de este
bacilo condiciona cambios en el epitelio de revestimiento y en la mucosa, que se pueden
traducir citológicamente.

4. Citología de las lesiones tumorales del tracto urinario

Los tumores malignos del tracto urinario representan el 6,5% de todos los cánceres. El
carcinoma de vejiga ha aumentado su frecuencia en los últimos años en la mayoría de los
países industrializados. En España, en el período comprendido entre 1955 y 1975, el riego
de muerte por cáncer vesical en el varón sufrió un crecimiento del 60%.

Los tumores del urotelio pueden clasificarse, según Mostofi, en cuatro tipos: papiloma,
carcinoma grado I, grado II, y grado III.

Las dos primeras categorías, o lesiones de bajo grado, poseen un revestimiento urotelial
análogo al epitelio normal o con desviaciones leves, mientras que los tumores de alto
grado (grados II y III) muestran alteraciones citológicas acentuadas.




                                              86
Por tanto, las células obtenidas en lesiones de bajo grado carecen, consideradas
individualmente, de rasgos que permitan sentar criterios diagnósticos fiables.

Este tipo de lesiones pueden descamar grupos celulares en mayor cantidad de lo esperado
para una orina emitida espontáneamente. La presencia de grupos uroteliales no atípicos,
permite sugerir la posibilidad de un tumor de bajo grado. Hay que tener en cuenta, sin
embargo, que la presencia de grupos celulares y de células aisladas con cambios reactivos
son también el patrón de diversas condiciones no tumorales (instrumentación,
inflamación litiasis), que junto con las lesiones de bajo grado constituyen una categoría
diagnóstica, que denominamos grupos uroteliales no atípicos.

Los tumores de alto grado, por el contrario producen orinas muy celulares, con grupos
muy frecuentes y un fondo inflamatorio o necrótico, o de ambos tipos.

La diferenciación citológica entre los tumores de grado II-III en muchas ocasiones no es
fiable, aunque está a favor de un tumor más agresivo el hallazgo de necrosis, disminución
de la cohesión celular y fenómenos metaplásicos.

Los criterios más fiables para al identificación de las células malignas en la orina son la
alteración de la relación núcleo/citoplasma y un patrón claramente irregular de la
cromatina.

El carcinoma epidermoide y el adenocarcinoma, en forma pura o en combinación con un
tumor urotelial, descaman células con aspecto análogo al que estos tumores presentan en
otras localizaciones.

El carcinoma in situ plano es una lesión de extraordinaria importancia, en la que las
alteraciones citológicas de malignidad son muy evidentes; con frecuencia las células son
monomorfas con un fondo citológico limpio.

Por lo tanto, ante una citología urinaria, utilizamos tres posibilidades de diagnóstico, con
criterios bien definidos:

Citología negativa

-Fondo limpio.

-Celularidad escasa.

-Grupos celulares ocasionales.

Grupos uroteliales no atípicos

-Fondo limpio o inflamatorio.



                                            87
-Celularidad abundante.

-Grupos celulares no atípicos frecuentes.

-Polimorfismo celular.

Citología positiva

-Células aisladas o en grupos con:

      Alteraciones de la relación núcleo-citoplasma.

      Patrón anormal de la cromatina.

El diagnóstico citológico de los tumores uroteliales no ha sido del todo bien aceptado en
muchos centros, y ello se debe, a que el urólogo diagnostica con facilidad, mediante
técnicas endoscópicas, las lesiones papilares de bajo grado, en las que la citología carece
de criterios diagnósticos.

Sin embargo en los últimos años se han acumulado pruebas de que los tumores vesicales
presentan dos vías carcinógenas de significado diferente: los tumores papilares y los
tumores planos.

Los tumores papilares son los más frecuentes y llevan un curso clínico prolongado
caracterizado por lesiones recurrentes; por el contrario, los tumores planos suelen ser
invasores cuando se ven clínicamente por primera vez.

Un aspecto muy importante del carcinoma in situ es que la fuente principal del carcinoma
invasor no es la lesión papilar común, sino las lesiones neoplásicas planas asociadas; en
este punto es donde la citología representa un procedimiento diagnóstico inestimable, ya
que representa la situación opuesta de la lesión papilar; desde el punto de vista clínico, no
se encuentran signos endoscópicos fiables, mientras que el cuadro citológico es muy
evidente.

Por lo tanto, el mayor beneficio para los enfermos con neoplasias vesicales se obtiene
mediante una inteligente combinación de los hallazgos citológicos y cistoscópicos.

Hemos revisado en nuestro laboratorio un total de 3189 muestras correspondientes a
1037 pacientes, y considerando los tumores de alto riesgo, la especificidad del método fue
del 99% con una sensibilidad del 80%.

5. Otros tumores del aparato urinario




                                             88
Los tumores malignos, como carcinoma de células pequeñas, carcinoma epidermoide en
sus diferentes variedades y adenocarcinomas, son muy poco frecuentes a este nivel y
presentan un aspecto citológico similar al de otras localizaciones.

Existen también tumores derivados de los tejidos musculares y nerviosos de las paredes
de la vía urinaria, que como en otras localizaciones presentan una traducción muy baja en
la muestra citológica ya que se sitúan por debajo del epitelio y solamente en algunos
casos de ulceración del mismo pueden manifestarse en la muestra. Asimismo, la vía
urinaria es una zona de localización de metástasis y sobre todo puede verse infiltrada por
carcinomas de estructuras vecinas, como el aparato genital femenino, la próstata, el colon
y el recto. Cuando éstos son muy poco diferenciados, puede ser difícil realizar el
diagnóstico diferencial con carcinomas uroteliales de alto grado.

FORMA EN QUE SE REALIZA EL EXAMEN
La persona debe tomar una muestra de orina y enviarla al laboratorio.

Para tomar la muestra de orina, la persona recoge una cantidad limpia ("de la mitad de la
micción"). Para esto, los hombres y los niños deben tener limpia la cabeza del pene,
mientras las mujeres y las niñas deben lavar el área que hay entre los labios de la vagina
con agua y jabón y enjuagar muy bien. Cuando se inicie el proceso de eliminación de la
orina, se debe dejar que una pequeña cantidad de ésta caiga a la taza del baño (así se
limpia la uretra de sustancias contaminantes).

Las células epiteliales recubren el tracto urinario y normalmente son eliminadas en la
orina, la cual se puede examinar para investigar la presencia de células anormales que
pueden indicar cáncer del riñón, de uréteres, vejiga o uretra. Un patólogo procesa la
muestra de orina en el laboratorio y la examina bajo el microscopio en busca de células
anormales.



Recomendaciones:

      Utilice un frasco limpio y libre de grasa no necesariamente estéril.
      Descarte la primera orina de la mañana y enseguida tome tres vasos de agua.
       Cuando tenga deseos de orinar nuevamente, recoja la muestra en el frasco.
      Empiece a orinar y descarte la primera parte de la micción, continúe orinando en
       el frasco y recoja la orina hasta llenar la mitad del frasco. Descarte la última parte
       de la micción.
      Tape el frasco, lávelo por fuera y márquelo con su nombre y apellido.
      Informe la hora en que fue tomada la muestra y entréguele la orden al médico.

Se recomienda evitar tomar la muestra en período menstrual.




                                             89
RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN
El examen se realiza para detectar cáncer y enfermedades inflamatorias de las vías
urinarias y con frecuencia se hace cuando se detectan lesiones de la vejiga en las
radiografías u ocasionalmente en individuos que tienen un alto riesgo de desarrollar
cáncer de vejiga. El examen también puede detectar la presencia de citomegalovirus y
otras enfermedades virales.

VALORES NORMALES
La orina muestra células epiteliales normales y está relativamente libre de desechos.

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

Se puede encontrar abundancia de células epiteliales, glóbulos rojos, glóbulos blancos o
células con apariencia atípica, al igual que pueden presentarse células cancerosas. Estos
resultados pueden implicar cáncer o inflamación de las vías urinarias (como la
glomerulonefritis).

El carcinoma de células renales es otra afección por la cual se puede realizar el examen.

CONSIDERACIONES ESPECIALES
El diagnóstico de cáncer o de enfermedad inflamatoria no se puede realizar
exclusivamente por los resultados de este examen. Los resultados se confirman mediante
otras pruebas o procedimientos diagnósticos.

CITOLOGIA DE EXUDADOS

      MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO
         o MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
                EXUDADO FARINGEO
                       Se utiliza para el diagnóstico de faringitis estreptocóccica.
                         Excepcionalmente se pueden requerir búsqueda de otros
                         patógenos (por ejemplo: Neisseria gonorrhoeae) consultar
                         con el laboratorio.
                       MATERIAL NECESARIO.
                            o - Bajalenguas ( imprescindible)
                            o - Hisopo de algodón con medio de transporte. (
                                 Stuart , Amies)
                            o TÉCNICA.
                                     Bajo visión directa, con la ayuda del
                                         bajalengua, se tocará con el hisopo en todas
                                         las partes con exudado, membranas o
                                         inflamación. Se deben frotar las criptas
                                         tonsilares y la faringe posterior. En lo posible




                                            90
                                        no tocar la mucosa oral, lengua, úvula ni
                                        dientes.

                     NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
                         o Basta con un hisopo.
                     TRANSPORTE Y CONSERVACION.
                         o Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas). Si
                            no es posible, conservar en heladera a 4ºC hasta 12
                            horas.
                     OBSERVACIONES.
                         o Se investigará rutinariamente la presencia de
                            Streptococcus beta-hemolítico del grupo A (S. pyogenes)
                            y otros grupos beta hemolíticos como C y G.

   CAVIDAD OROFARINGEA.
       o Esta muestra se emplea habitualmente para el diagnóstico de la llamada
          "Angina de Vincent". Este tipo de muestra conviene realizarla en el
          Laboratorio de Microbiología, coordinando con un Microbiólogo.
       o MATERIAL NECESARIO.
               - Hisopo de algodón sin medio de transporte.
               - Porta objetos limpios.
       o TÉCNICA.
               - Se pedirá al paciente que se enjuague la boca con agua.
               - Tras enjuagar la boca, frotar o raspar las lesiones con una espátula
                 o con un hisopo y hacer una extensión sobre un porta objetos.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
               extensión en porta objeto + 1 hisopo.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACION.
               No requiere medidas especiales para su transporte y conservación.
   SENOS PARANASALES.
       o Es un procedimiento médico. Se realiza la punción-aspiración de los
          mismos, lo que requiere un especialista en O.R.L.. Este tipo de muestra no
          se realiza de rutina en caso de sinusitis aguda, sino que en general se
          reserva para casos de sinusitis crónica, para aquellos casos que no
          responden al tratamiento instaurado y en aquellos casos que el especialista
          considere necesario.
       o MATERIAL NECESARIO.
               - Yodo povidona al 10%
               - Recipiente estéril.
               - Medio de transporte para anaerobios.
               - Material quirúrgico de O.R.L.
       o TÉCNICA.
               - Desinfectar el lugar de la punción con Yodo povidona




                                        91
              
              - Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete
              inferior, o en el seno frontal por debajo del marco supraorbital del
              ojo.
             - Aspirar el líquido del seno. Cuando no se obtenga líquido, instilar 1
              ml de suero salino estéril y aspirarlo nuevamente.
             - Inyectar la muestra en un medio de transporte para anaerobios o
              en su defecto tubo estéril.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
             Se intentará obtener al menos 1 ml de muestra.
       o TRANPORTE Y CONSERVACIÓN.
             Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).



   EXUDADO NASAL
       o Esta muestra solo se utiliza para buscar portadores de S.aureus o en el
         diagnóstico etiológico de impétigo. No es útil para el diagnóstico etiológico
         en casos de rinitis, rinosinusitis ni en casos de otitis media ni cuadros
         respiratorios altos prolongados Recordamos que alrededor del 30% de la
         población es portadora de este microorganismo a nivel nasofaríngeo por lo
         cual su hallazgo no tiene habitualmente significancia clínica salvo en
         situaciones especiales. En el personal de salud sólo se realizará la búsqueda
         de portadores en el caso de brotes de infecciones en los que no se ha
         encontrado otra fuente de infección. Este tipo de investigación se realizará
         en coordinación con el Comité de Infecciones Hospitalarias, quien
         determinará la oportunidad de su realización.
       o MATERIAL NECESARIO.
              - Hisopo de algodón con medio de transporte.
       o TÉCNICA.
              Tomar muestra profunda de ambas fosas nasales con el mismo
                 hisopo, previamente embebido en suero fisiológico estéril.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
              Basta con un hisopo.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACION.
              Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
       o OBSERVACIONES.
              Se deberá consignar en el boleto de pedido si hay lesiones o costras
                 a nivel nasal. (muy importante)




                                        92
   MUESTRAS DE OÍDO
   CONDUCTO AUDITIVO EXTERNO
      o Solo se utiliza para conocer la etiología en caso de otitis externa. Suele
         tratarse de muestras de mala calidad y en ningún caso resultan
         representativas de los microorganismos existentes en el oído medio.
      o MATERIAL NECESARIO.
              - Hisopos de algodón con medio de transporte
              - Suero fisiológico estéril
      o TÉCNICA.
              Primero limpiar posibles restos de pus o secreciones del conducto
                 auditivo externo con hisopo humedecido en suero fisiológico y
                 descartar. Luego tomar muestra del oído indicado o de ambos por
                 separado frotando con nuevo hisopo contra las paredes.
      o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
              Un hisopo para cada oído.
      o TRANSPORTE Y CONSERVACION.
              Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).

   OIDO MEDIO- TIMPANOCENTÉSIS
       o Se reserva para el diagnóstico etiológico en casos de otitis media que no ha
          respondido al tratamiento, que se presenta en pacientes
          inmunodeprimidos, en otitis crónica y en aquellos casos que el médico
          considere necesario.
       o MATERIAL NECESARIO.
              - Hisopos estériles.
              - Recipiente estéril.
              - Medio de transporte para anaerobios.
              - Yodo povidona al 10%.
       o TÉCNICA.
              Timpanocentésis:
                      Debe obtener la muestra un especialista en O.R.L.
                      Se limpiará el canal auditivo externo con un hisopo
                        impregnado en Yodo povidona.
                      Se puncionará el tímpano a través de un otoscopio estéril.
                      La muestra se enviará en un tubo estéril. Si se desea la
                        investigación de anaerobios, se enviará el fluido en un medio
                        de transporte específico.
                      Las muestras en hisopo no sirven para cultivo de anaerobios.
                        Muestras con tímpano roto: Tras la limpieza del canal
                        externo se tomará la muestra con hisopo a través de un
                        otoscopio estéril.
                      Estas muestras no son válidas para anaerobios, y además el
                        fluido suele colonizarse con flora del conducto auditivo



                                       93
                      externo, con lo que la interpretación de los resultados es
                      siempre complicada.
      o NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
             Se intentará obtener la mayor cantidad de exudado posible.
      o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN.
             Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
   MUESTRAS OCULARES.
      o Por vecindad estas muestras se estudian con las del tracto respiratorio
         superior.

   EXUDADO CONJUNTIVAL
       o Este tipo de muestras sirve para el diagnóstico de conjuntivitis de causa
         bacteriana. Estas son a menudo unilaterales. De todas maneras se solicita
         que se haga la toma de muestra de ambos sacos conjuntivales por
         separado, de manera de poder valorar la flora normal. Siempre que sea
         posible se realizará la toma de muestra en el Laboratorio de Microbiología.
       o MATERIAL NECESARIO.
              - Hisopos con medio de transporte. Departamento de Laboratorio
                 Clínico.
              - Suero fisiológico estéril.
       o TECNICA.
              - Debe obtenerse la muestra antes de la instilación de los
                 analgésicos locales, colirios o antibióticos.
              - Con un hisopo mojado en suero fisiológico frotar sobre la
                 conjuntiva tarsal inferior y el fórnix de afuera hacia adentro.
              - Para la investigación de Chlamydia trachomatis, everter el párpado
                 y frotar con una torunda la superficie conjuntival con hisopo
                 provisto por el laboratorio para investigación de Chlamydias.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
              Deberá utlizarse un hisopo para cada ojo.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN.
              El transporte deberá ser inmediato. Cuando no sea posible, se
                 utilizarán hisopos con medio de transporte tipo Stuart o Amies, que
                 se mantendrán a temperatura ambiente. Para Chlamydia se
                 utilizará un medio de transporte específico que depende de cada
                 laboratorio.
       o OBSERVACIONES.
              Los cultivos de conjuntiva preoperatorios no son útiles. El número y
                 tipo de microorganismos de la conjuntiva normal varía diariamente,
                 por lo que estas muestras no son válidas, excepto en el caso de
                 signos inflamatorios a nivel ocular.




                                       94
   RASPADOS CORNEALES.
       o Es un procedimiento médico. La toma de muestra la realizará un
          Oftalmólogo en el Laboratorio de Microbiología en coordinación con un
          Microbiólogo. Si esto no es posible se avisará previamente al Servicio de
          Microbiología que desplazará al personal y/o material necesario para ello.
       o MATERIAL NECESARIO.
              - Espátula de platino flexible o ansa bacteriológica nueva o
                descartable.
              - Anestésico local.
              - Portaobjetos limpios con círculos marcados.
              - Caja de Koplin con metanol al 95%.
       o TECNICA.
              - Instilar uno o dos gotas de anestésico.
              - Realizar el raspado de múltiples áreas de ulceración con la
                espátula de Kimura .
              - El material obtenido se siembra en lo medios provistos por el
                laboratorio.
              - Parte del material se colocará en el circulo de un portaobjetos
                limpio.
              - Fijar el portaobjetos en Metanol durante 5-10 minutos.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
              Mínimo 1 portaobjetos y medios de cultivos con varias improntas
                corneales.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN.
              Una vez fijados los portaobjetos no requieren medidas especiales
                para su transporte y conservación. Los medios se transportarán en
                forma inmediata al Laboratorio de Microbiología.

   EXUDADOS RECTALES
       o MATERIAL NECESARIO
             - Guantes
             - Hisopos con medio de transporte ( Stuart o Amies )
       o TÉCNICA
             Introducir el hisopo suavemente a través del esfinter anal.
             Rotar contra las criptas rectales, dejar 10-30 segundos para que se
               absorban los microrganismos y extraer.
             Se intentará evitar el contacto con materia fecal.
             Cuando el hisopo salga manchado de heces, deberá tomarse una
               nueva muestra.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN.
             Basta con un solo hisopo para cultivo, dado que la visión
               microscópica no es representativa.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN




                                       95
              El envío de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible .
               Cuando la muestra no pueda procesarse antes de 15 minutos,
               deberán emplearse hisopos con medio de transporte. ( Stuart o
               Amies), que se mantendrán en estufa a 35-37ºC hasta su
               procesamiento.
       o OBSERVACIONES
             Cuando se sospeche proctitis por Chlamydia trachomatis, las
               muestras deberán tomarse mediante visión directa por anoscopía,
               buscando las lesiones ulcerosas o hipertróficas.



   ENDOMETRIO
       o Es un procedimiento médico.
       o Se ha cuestionado ampliamente la utilidad de estas muestras para el
         diagnóstico de endometritis. Los métodos no invasivos, como los hisopos a
         través del cervix , se contaminan sistemáticamente , obteniéndose
         resultados similares en mujeres con endometritis y en mujeres sanas.
       o Se han descrito varios métodos intentando eliminar la contaminación
         cervical, como son la aspiración uterina a través de un catéter de doble luz
         o de hisopos protegidos o tomando las muestras con hisopo o aspirando a
         través de un catéter previa dilatación y decontaminación del cervix con
         yodo povidona al 10%.
       o En cualquiera de los casos, los resultados del cultivo de estas muestras
         deben interpretarse con cautela, teniendo siempre en cuenta la posibilidad
         de una contaminación cervical.
       o Es recomendable sacar siempre hemocultivos, ya que se obtienen
         resultados positivos en un 30% de los casos de endometritis. No se deben
         enviar muestras de loquios para hacer diagnóstico de endometritis
         postparto ya que no son representativas de lo que sucede en el tracto
         genital superior y solo brindan información del contenido bacteriano
         vaginal

   CULDOCENTESIS
       o Es un procedimiento médico.
       o MATERIAL NECESARIO
              Se precisa el material quirúrgico que requiera la muestra,
                contenedores estériles y si se desea la investigación de anaerobios,
                un medio de transporte específico.
       o TÉCNICA
              Aspiración a través del fondo de saco vaginal posterior con jeringa
                y aguja.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN
              Se intentará obtener 1-5 ml de muestra.



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       o TRANSPORTE Y CONSERVACION
             La muestra se remitirá en un contenedor estéril o en la misma
               jeringa. Cuando se busquen anaerobios deberá inyectarse una parte
               en medio de transporte específico.
       o OBSERVACIONES
             El material obtenido por culdocentésis es representativo de los
               microorganismos existentes en las trompas.



   TROMPAS Y OVARIOS
       o Es un procedimiento médico.
       o MATERIAL NECESARIO
              - El material quirúrgico que requiere la técnica
              - Agujas y jeringas estériles.
              - Contenedores estériles.
              - Medio de transporte para anaerobios.
              - Hisopos de alginato cálcico o cepillos de broncoscopía.
       o TÉCNICA
              Beben obtenerse por laparotomía o laparoscopía.
              La muestra se recogerá directamente en la luz de la trompa
                mediante hisopo o con un cepillo de broncoscopía.
              Cuando la trompa esté obstruida, se podrá recoger la muestra por
                punción aspirativa, introduciendo una parte en un medio de
                transporte para anaerobios y enviando el resto en un recipiente
                estéril o en la jeringa de la extracción.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN
              Se recogerá la máxima cantidad de muestra posible. En el caso de
                muestras líquidas se intentará obtener de 1-5 ml.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
              Cuando no sea posible, emplear medios de transporte tipo Stuart-
                Amies o medios de transporte específico para anaerobios que se
                mantendrán a temperatura ambiente o preferentemente a 35-37ºC.




   VULVA
       o MATERIAL NECESARIO
            - Hisopos.
            - Alcohol etílico al 70%.
            - Yodo Povidona al 10%.
            - Jeringas y agujas estériles.



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       o TÉCNICA
             Realizar antisepsia de piel con alcohol 70% primero y luego yodo
               povidona.
             Para las superficies mucosas, limpiar con agua estéril, no usar
               alcohol ni yodóforo.
             Frotar con el hisopo sobre las lesiones y si hay abscesos aspirarlos
               con jeringa y aguja ( Bartolinitis )
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN
             Deberá obtenerse la mayor cantidad de exudado posible. Cuando
               se trate de abscesos se intentará obtener al menos 1 ml.
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
             Si la muestra no puede enviarse de inmediato se usarán medios de
               transporte , en el caso de hisopos sirve el medio de Stuart -Amies y
               para punciones de abscesos una parte se introducirá en un medio
               de transporte para anaerobios.



   GANGLIOS LINFÁTICOS INGUINALES
      o Es un procedimiento médico.
      o MATERIAL NECESARIO
              - Gasas estériles.
              - Alcohol etílico al 70%.
              - Povidona yodada al 10%.
              - Jeringa y aguja o material quirúrgico.
              - Contenedor estéril.
      o TÉCNICA
              Desinfectar la piel con alcohol y luego povidona yodada, dejándola
                secar durante 1 minuto.
              Realizar punción aspiración con jeringa y aguja o escisión quirúrgica
                del ganglio..
              Enviar en la jeringa de punción, o si se trata de una pieza quirúrgica,
                en un contenedor estéril sin “formol “.
      o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN
              La máxima cantidad de muestra que se pueda obtener.
      o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
              La muestra debe llegar al laboratorio dentro de la hora siguiente a
                la extracción. En el caso de punciones aspirativas debe realizarse de
                inmediato.
      o OBSERVACIONES
              Es preferible obtener la muestra por punción aspiración de la
                adenopatía a través de la piel sana, que a partir de los puntos de
                drenaje. Debe avisarse al laboratorio la sospecha de infección por




                                        98
                  Haemophylus ducreyi para que las muestras sean procesadas
                  adecuadamente.



   LÍQUIDO AMNIÓTICO
       o Es un procedimiento médico.
       o MATERIAL NECESARIO
              - Gasas estériles
              - Alcohol etílico al 70%
              - Povidona yodada al 10%
              - Jeringa y agujas estériles.
              - Contenedor estéril.
       o TÉCNICA
              Punción aspiración con jeringa y aguja tras desinfección de la piel
                dos veces consecutivas, la primera con alcohol y la segunda con
                povidona.
       o NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLÚMEN
              Se intentará obtener una muestra de 1-5 ml .
       o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
              Deberá enviarse al laboratorio lo antes posible para su
                procesamiento.
       o OBSERVACIONES
              Debe informarse de la existencia de rotura de membranas de más
                de 24 horas.



   TRACTO GENITAL MASCULINO
       o EXUDADOS URETRALES
              Se utiliza para confirmar el diagnóstico clínico de uretritis y valorar
                su etiología. No es adecuado si el paciente no tiene corrimiento. La
                toma de muestra se debe realizar en el Laboratorio de
                Microbiología, de preferencia en la mañana y con por lo menos 4
                horas de retención urinaria.
              MATERIAL NECESARIO
                     - Hisopos finos, de alginato de calcio o Dacron con medio de
                        transporte tipo Stuart-Amies.
                     - Gasas estériles. - Asa de siembra de platino
                     - Potaobjetos.
                     - Suero fisiológico.
              TÉCNICA
                     Cuando exista exudado franco puede recogerse con un
                        hisopo o con un asa bacteriológica.


                                        99
                       Se le solicita al paciente que retraiga el prepucio y lo
                        mantenga así durante todo el procedimiento.
                      Si no hay corrimiento franco puede estimularse exprimiendo
                        la uretra desde la raíz del pene.
                      Cuando no se obtenga exudado se introducirá un hisopo
                        suavemente con un movimiento de rotación hasta penetrar
                        unos 2 cm. en la uretra.
                      Repetir la operación con un segundo hisopo.
                      Tomar con ansa bacteriológica una gota de secreción y
                        colocar en un portaobjetos con una gota de suero fisiológico
                        para investigación de Trichomonas vaginalis ( examen en
                        fresco).
                 NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN
                      Deberán obtenerse dos hisopos, uno destinado al examen
                        directo y otro al cultivo y la muestra para examen en fresco.
                 TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN
                      Debe ser inmediato. Cuando no puedan procesarse las
                        muestras antes de 15 minutos, se utilizarán hisopos con
                        medio de transporte Stuart-Amies que se mantendrán a
                        temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37º.
                      El examen en fresco deberá observarse de inmediato.
                      Las muestras se procesarán siempre que se pueda antes de
                        3 horas y como máximo en un plazo de 6-12 horas.
                 OBSERVACIONES
                      La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la
                        primera micción de la mañana . Si esto es imposible, esperar
                        al menos una hora tras la última micción para recogerla. En
                        algunos casos puede ser rentable realizar la investigación de
                        patógenos de transmisión sexual en la orina del primer
                        chorro.

   MUESTRAS PARA DIAGNÓSTICO DE PROSTATIS
      o En el caso de prostatitis aguda el diagnóstico etiológico se realiza a través
         del urocultivo y hemocultivos.
      o Las prostatitis crónicas pueden ser de etiología bacteriana o no, por lo cual
         se valorará mediante las pruebas diagnósticas que se detallan a
         continuación.
      o MATERIAL NECESARIO
              Técnica de Meares Stamey
              Se preparará el mismo material que para un urocultivo y cuatro
                contenedores estériles que deberán ir identificados de la siguiente
                forma:
              Frasco 1 : Primera orina.



                                       100
      Frasco 2: Micción media premasaje.
      Frasco 3: Masaje prostático.
      Frasco 4: Orina post masaje.
o TÉCNICA
      - Retraer el prepucio y limpiar el meato y el glande igual que para
        el urocultivo.
      - Pedir al paciente que orine, recogiendo los primeros 10 ml en el
        primer contenedor “F: 1”.
      - Recoger los siguientes 10 ml en el segundo contenedor “ F: 2“. Esta
        porción corresponde a la “micción media”.
      - Interrumpir la micción antes de que se haya vaciado totalmente
        la vejiga.
      - Hacer un masaje prostático y recoger el fluído en el tercer
        contenedor “ F:3” (masaje prostático)
      - Si no se produce fluído, presionar la uretra en su totalidad 30
        segundos. Tras el masaje, acabará saliendo fluído prostático por el
        meato.
      - Finalmente se pedirá al paciente que orine y se recogerán los 10
        ml primeros de orina en un cuarto recipiente “ F: 4 “ (orina
        postmasaje) NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN
      FRASCO 1: 10ml
      FRASCO 2: 10 ml
      FRASCO 3: Toda la muestra que se obtenga.
      FRASCO 4: 10 ml
o TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN:
      Las muestras deberán procesarse antes de 1 hora. Para períodos
        más prolongados se deberán mantener en la heladera a 4ºC hasta
        un máximo de 24 horas.
o OBSERVACIONES
      - Se realizarán cultivos cuantitativos.
      Cuando el número de bacterias del frasco 1 es mayor al del frasco 2
        y frasco 4 se considera que las bacterias son de origen uretral.
      - Cuando el número de bacterias de los frascos 3 y 4, es por lo
        menos 10 veces superior al de los frascos 1 y 2 se atribuye a
        colonización prostática.
      - Las muestras de semen no son adecuadas para cultivo, al estar
        sistemáticamente contaminadas y los resultados obtenidos no son
        representativos de los microrganismos aislados en próstata.
      - Dado lo engorroso que resulta la toma de estas muestras, en 1997
        Nickel propuso la realización de un método diagnóstico alternativo
        utilizando el cultivo cuantitativo y la observación microscópica de la
        orina antes y después del masaje prostático.
      La sensibilidad y especificidad de este método se encuentra en el
        entorno del 90%. En este caso se debe demostrar un aumento en el


                               101
                      recuento de bacterias en la muestra post masaje prostático para
                      hacer el diagnóstico de prostatitis crónica bacteriana.

8. DE LA INMUNOPEROXIDASA, INMUNOFLUORESCENCIA, HOBRIDACION MOLECULAR Y
                               CITOMETRIA

8.1 INMUNOPEROXIDASA

La técnica de la inmunoperoxidasa es un método alternativo para localizar e identificar
antígenos virales presentes en cultivos celulares al igual que en improntas o cortes de
tejidos de animales afectados. Por tanto, esta técnica pudiera ser empleada tanto en el
diagnóstico como en la diferenciación patogénica de cepas por determinación patogénica
de cepas in situ de la presencia de virus en los diferentes órganos linfoides.

La técnica de inmunoperoxidasa, que a diferencia de la inmunofluorescencia no emplea
microscopios especiales y asegura la estabilidad de la coloración a través del tiempo sin la
decoloración de las tinciones.

Carcinomas

Muchos tumores de origen epitelial son removidos usando la técnica de Mohs. Entre
ellos: carcinoma basocelular, carcinoma escamocelular, enfermedad de                    Payet
extramamaria, carcinoma linfoepiteliomatoide y carcinoma sebáceo. Esos tumores son
teñidos con una gran variedad de anticuerpos incluyendo: citoqueratinas, antígenos
carcinoembrionarios y antígenos de membrana epitelial. La inmunoperoxidasa puede
utilizarse en situaciones seleccionadas especiales tales como la identificación de las células
tumorales en el área de inflamación densa o tumores con sutiles hallazgos histológicos. La
citoqueratinas se encuentran en las células epiteliales y son uno de los cinco tipos de
filamentos intermedios que conforman el citoesqueleto celular. Empleando electroforesis
en gel, al menos veinte diferentes citoqueratinas han sido caracterizadas. Las queratinas
son expresadas en ciertas combinaciones dependiendo del tipo de epitelio y grado de
diferenciación. El epitelio glandular está compuesto principalmente por queratina de bajo
a intermedio peso molecular; el epitelio escamoso está compuesto por queratinas
complejas de alto peso molecular. En la práctica son utilizados cócteles de queratinas
usando anticuerpos monoclonales AE1/AE3.

Esta técnica permite descubrir células tumorales en cortes con un denso infiltrado
inflamatorio, extensión perineural, intravascular o invasión muscular en tumores como el
carcinoma basocelular morfeiforme, carcinoma basocelular infiltrativo y carcinoma
escamocelular. En la enfermedad de Paget extramamaria usando antígeno
carcinoembrionario permite diferenciarla de la enfermedad de Bowen y el melanoma.

Tumores de tejidos blandos




                                             102
El dermatofibrosarcoma protuberans es un tumor comúnmente removido por la cirugía
micrográfica de Mohs, usando anticuerpos CD-34 los cuáles ayudan a delimitar mejor el
tumor. Este anticuerpo también está presente en las células hematopoyéticas
totipotenciales, células dendríticas dérmicas, perianexiales, endoteliales y células
dendríticas endoneurales.

La importancia en la cirugía de Mohs radica en que las células malignas y el
dermatofibrosarcoma protuberans, se tiñen bien con este marcador aun ante la
negatividad de la hematoxilina eosina. Sin embargo, en áreas de alta nodularidad
tumoral este marcador no se tiñe bien. Una estrategia empleada es remover el tumor con
cortes por congelación hasta ser dudoso negativo, dejando la última capa para ser teñido
con CD34, disminuyéndo asi los costos e incrementando la utilidad.

Melanoma

La cirugía micrográfica de Mohs se emplea para operar pacientes con lentigo maligno,
melanoma acral y melanoma desmoplásico usando como anticuerpo HMB-45 y S100, que
también reconocen melanocitos benignos. En adición la S100 reconoce células neurales,
músculo liso y tejido adiposo; sin embargo, esa técnica ayuda a reconocer queratinocitos
vacuolados de melanocitos.

La técnica de inmunoperoxidasa se emplea en cortes fijados en formol y procesados con
parafina o congelación y pueden ser estudiados usando el microscopio de luz
convencional. Anteriores técnicas de anticuerpos, utilizaban inmunofluorescencia las
cuales detectaban transitoriamente los antígenos y requerían microscopios
especializados. Estas tinciones presentaban la pérdida o el desvanecimiento de antígenos
solubles de los cortes por congelación o pérdida de los sitios antigénicos en los cortes
con parafina.

Dependiendo del tumor a estudiar, la elección radica entre anticuerpos policlonales o
monoclonales. Los anticuerpos policlonales son más sensibles que los monoclonales en
reconocer una gran variedad de determinantes antigénicos (epitopes), incrementando la
sensibilidad a expensas de disminuir la especificidad ya que algunos de los epitopes
reconocidos pueden hacer parte de tejidos normales o no ser del interés en el
tratamiento. Los anticuerpos monoclonales son producidos para reconocer un solo
epitope, teóricamente conduce a elevar la especificidad sacrificando la sensibilidad; para
obviar este escollo en la práctica rutinaria se emplean cócteles de múltiples anticuerpos
monoclonales.

Las técnicas de inmunoperoxidasa utilizando tejidos fijados en formol y preparados en
parafina usualmente toman varias horas hasta lograr el producto final.

Esto funciona bien cuando el plan es una única etapa con los cortes de parafina. Sin
embargo, no es práctico ejecutar una capa por día y otras estrategias se deben buscar.



                                           103
Una forma es realizar la técnica convencional por congelación hasta que el tumor sea
aparentemente resecado, seguido por una capa procesada con parafina e
inmunoperoxidasa.

Otra estrategia es el uso de cortes por congelación, acortando el tiempo de incubación
requerido por los anticuerpos, en fijarse al tejido estudiado, este objetivo puede lograrse
usando altos títulos de anticuerpos, los cuáles rápidamente reaccionan, resultando en una
unión rápida obteniéndose tinciones de inmunoperoxidasa dentro de 30 y 90 minutos. Sin
embargo, tinciones no específicas pueden resultar, requiriendo siempre la presencia de
controles negativos. Inicialmente la técnica de inmunoperoxidasa utilizó el método
directo, en la que un solo anticuerpo conjugado con una enzima (peroxidasa) se hacia
reaccionar con un sustrato. Este método de simple aplicación requería el empleo de altas
concentraciones de anticuerpos para obtener la tinción. El método indirecto fue trazado
para amplificar la señal la cual mejora la detección de antígenos empleando bajas
concentraciones de anticuerpos.

En el método indirecto el tejido es incubado con un anticuerpo primario, seguido por la
incubación con un segundo anticuerpo y peroxidasa; un cromógeno es empleado en esta
técnica la cual lleva a la formación de un producto coloreado insoluble que puede ser
visualizado con el microscopio de luz. Los cromógenos que son rutinariamente utilizados
son: 3´ diaminobencidina-tretraidrocloruro, el cual forma un producto café y 3 amino-9
etilencarbasol el cual forma un producto rojo, empleado en lesiones pigmentadas.

Algunos métodos que ayudan a mejorar la amplificación de las reaciones incluyen: el uso
de peroxidasa antiperoxidasa, complejo avidin-viotin, fosfatasa ancalina anti fosfatasa
alcalina, peroxidasa estrepavidin o fosfatasa alcalina. Esos sistemas están incluidos en
paquetes comerciales y se pueden usar en tejidos congelados o en parafina. Los
productos forman un complejo macromolecular y ayudan a amplificar la unión antígeno
anticuerpo en una base 1 a 1 en el sitio de la reacción.

Como se mencionó anteriormente, muchos antígenos son afectados por la fijación y
pueden no ser teñidos a pesar de la alta sensibilidad de la técnica.Ciertos métodos de
recuperación de antígenos ayudan a superar este problema tales como calentamiento en
micro ondas en combinación con soluciones conteniendo metales pesados o buffers de
citrato; conduciendo a incrementar la tinción de antígenos.

8.2 INMUNOFLUORESCENCIA

La fluorescencia es una propiedad de ciertas moléculas que, al ser irradiadas con energía
electromagnética de longitud de onda adecuada, emiten radiación de longitud de onda
característica permitiendo su cuantificación. Las moléculas de un colorante fluorescente
absorben luz en una longitud de onda y convierten la luz absorbida de alta energía
(longitud de onda más corta) en luz de menor energía (longitud de onda más larga).




                                           104
Cada fluorocromo tiene un espectro de emisión y excitación característico; si se utilizan
dos con el mismo espectro de excitación pero distinto espectro de emisión, se pueden
medir dos características al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores). La
Inmunofluorescencia se utiliza esencialmente en la detección de autoanticuerpos y
anticuerpos contra antígenos de superficie de células y tejidos. Para ello se emplean
anticuerpos preparados frente a la proteína que se desea detectar marcados con
moléculas fluorescentes.

Se aprecia si hubo unión del anticuerpo con el antígeno por la fluorescencia emitida, que
se observa bajo microscopio de luz ultravioleta. Este procedimiento (Inmunofluorescencia
directa) tiene la limitación del marcaje con un fluorocromo de cada uno de los anticuerpos
necesarios 1 / 4B. Técnicas de Inmunofluorescencia y citometría de flujo para cada una de
las sustancias a investigar. Para evitar esto, lo que se hace es tratar el tejido o células con
antisueros anti-antígeno producidos, por ejemplo, en conejo y secundariamente anti-
inmunoglobulinas marcadas con un fluorocromo (Inmunofluorescencia indirecta).

8.3 CITOMETRÍA DE FLUJO

La técnica de inmunofluorescencia se suele utilizar en el estudio de poblaciones de células
de sangre periférica. Actualmente el análisis de una suspensión de células vivas marcadas
con un fluorocromo se realiza mediante un citómetro de flujo. La suspensión celular se
hace circular en forma de gotas microscópicas. Las células pasan por un campo de
detección atravesado por un potente rayo láser que produce la dispersión de la luz y la
activación de la fluorescencia.

Mediante sensores específicos se analizan y cuantifican las poblaciones en estudio en
función de sus propiedades fisicoquímicas y del marcaje efectuado. Para la separación
celular este aparato lleva acoplado un sistema que carga eléctricamente las células y con
placas deflectoras se realiza su separación . Además de basarse en la detección de la
fluorescencia emitida por las células marcadas, también lo hace en otras propiedades
diferenciales de las células en estudio como tamaño (FSC), complejidad (SSC), etc.

La señal producida como consecuencia de la excitación del fluorocromo, permite conocer
el porcentaje de células reconocido por el anticuerpo monoclonal empleado. Como
consecuencia se observan imágenes en dos dimensiones (Dot-Plot), (Figura 9) o en una
dimensión (Histograma), .en las que se distinguen las diferentes poblaciones celulares
marcadas.




                                             105
Técnicas de Inmunofluorescencia y citometría de flujo

La puesta a punto de las técnicas de citofluorometría, en las que se conjuga los avances de
informática, rayos láser y anticuerpos monoclonales permite el análisis fenotípico y
funcional de las células T, B y de todas aquellas células de las que se disponga de un
antisuero que las identifique.

8.4 HIBRIDACION MOLECULAR

La hibridación molecular es uno de los pilares de la mayor parte de las metodologías que
se utilizan en un laboratorio de biología molecular. Un grupo de estas técnicas son las que
están diseñadas para identificar secuencias específicas. Estos procedimientos son de los
más utilizados y diversos en la biología molecular, por lo que les vamos a dedicar el
presente y dos artículos mas de la serie para abarcarlos adecuadamente. En este trabajo
revisaremos los principios aplicables a cualquier análisis de hibridación, y en los siguientes
analizaremos los detalles y aplicaciones de cada uno. Como veremos en el proceso, este
tipo de análisis es útil en las investigaciones básica y clínica y en el diagnóstico médico.
Gracias a este tipo de técnicas se ha llegado al conocimiento del defecto molecular de un
gran número de enfermedades hereditarias y se han obtenido datos que permiten
conocer con mayor detalle la fisiopatología de diversos síndromes.

La hibridación es la unión complementaria de ácidos nucléicos (ADN o ARN). Técnicas de
hibridación se utilizan a menudo para detectar una molécula diana partiendo de una sonda
complementaria a ella. Muchas técnicas moleculares están basadas en la hibridación. Entre
ellas están técnicas tan importantes como la PCR o las tecnologías de arrays de ADN.
Técnicas basadas en hibridación se usan habitualmente en el diagnóstico de enfermedades,
la identificación de microorganismos patógenos, el estudio de perfiles de expresión génica,
la localización de genes en cromosomas o de ARNm en tejidos (hibridación in situ) o en la
comparación             de        especies          hibridando            su         ADN.

En las técnicas de hibridación se parte de dos poblaciones de ácidos nucléicos: un conjunto
homogéneo de ácidos nucléicos de secuencia conocida que actúa como sonda y otro
conjunto heterogéneo de ácidos nucléicos de secuencia desconocida donde queremos
detectar la secuencia diana. Una de ellas debe estar marcada. Si lo está la sonda, la
hibridación es estándar. Si lo está la diana, la hibridación es reversa. Los ácidos nucléicos de
partida son de cadena sencilla, bien procedentes de ADN clonado y fragmentado por
enzimas de restricción, bien oligonucleótidos sintéticos. La hibridación puede producirse en
medio líquido o sobre un soporte sólido, como nitrocelulosa, al que se encuentra unida una
de las dos poblaciones de ácidos nucléicos. En la hibridación estándar sería el ADN diana el
que iría unido al soporte sólido, mientras que en la hibridación reversa sería la sonda.
Durante la hibridación se produce la unión de las moléculas diana con las moléculas sonda.
Esta unión depende de la complementariedad de bases. Se pueden adaptar las condiciones
para conseguir la especificidad de secuencia requerida para que se produzca la hibridación.
Así, aumentando la fuerza iónica (por ejemplo, la concentración de cloruro sódico NaCl) o


                                              106
disminuyendo la temperatura se permite la hibridación aunque existan algunas bases no
complementarias. Por el contrario un aumento de la temperatura o una disminución de la
fuerza iónica producen una hibridación más específica que tolera menos fallos en la
complementariedad de las secuencias a hibridar. Estas condiciones varían según el objetivo
de la prueba: Así, por ejemplo, comparar ADN de especies diferentes necesita condiciones
relajadas, pero identificar mutaciones puntuales en un gen necesita condiciones que
fuercen              una             hibridación             muy              específica.

El marcaje se usa para visualizar la unión. Puede ser radiactivo o no radiactivo (fluoróforos o
marcaje enzimático). A mayor complementariedad entre sondas y dianas, más moléculas
hibridan                 y                  más                  señal                 vemos.

La hibridación es la base de muchas técnicas moléculares, como en la PCR (reacción en
cadena de la polimerasa), Northern Blot, Southern Blot, microarrays de ADN, hibridación in
situ o screening de genotecas. Su uso extendido en diagnóstico molecular abarca el
diagnóstico de enfermedades, la identificación de microorganismos patógenos, el análisis de
perfiles de expresión génica, la localización de genes en cromosomas, la detección de ARNm
en tejidos in situ o la comparación de especies de patógenos.


 9. EL ESTUDIANTE CONOCERÁ LA RELACIÓN DEL LABORATORIO Y EL MÉDICO CLÍNICO.

El principal vehículo de comunicación entre el médico y el laboratorio es el impreso de
petición y el informe de resultados.No obstante es conveniente que exista una estrecha
relación entre el clínico y el laboratorio,ya que ésta provocará un mejor aprovechamiento
de los recursos del laboratorio.

A partir del momento en que el médico solicita un examen de laboratorio a un paciente,
comienzan una serie de eventos que impactan en el resultado final con el cuál el paciente
regresa a la consulta:
1) Elección del laboratorio de análisis clínicos: con esta elección queda determinado el
método analítico que será utilizado para realizar el análisis. Este método queda definido
por parámetros de desempeño como pueden ser precisión y desvío del mismo.
2) Elección del momento en que se efectuará el examen: es sabido que cada analito
presenta una variación normal de su concentración que define una condición
homeostática particular, aún dentro del rango de valores normales tomados como
referencia. Por este motivo, el resultado final se verá afectado por la variación biológica
intraindividual.
3) Recolección, preparación y conservación de la muestra.
4) Proceso analítico propiamente dicho: Variación entre lotes de reactivos.
Estabilidad de: materiales, aparatos de procesamiento, equipos de lectura.
Variaciones del instrumental accesorio.
Errores casuales de calibración y de la respuesta de la muestra. Criterios de cálculo del
software utilizado.


                                             107
5) Informe final: actualmente se informa el resultado aleatorio obtenido junto con un
rango de referencia para su interpretación clínica.

Según los aspectos que se consideren, se pueden definir diferentes rangos de
Incertidumbre del resultado:
- Incertidumbre analítica: considera la variabilidad analítica y desvío del procedimiento
empleado.
- Incertidumbre bioquímica: Suma a la incertidumbre analítica del método la variabilidad
biológica del analito en estudio.
- Incertidumbre clínica: Suma a la variabilidad biológica, la Incertidumbre analítica del
resultado de todos los métodos disponibles en los diferentes laboratorios.

Se puede concluir que el proceso de análisis debe cumplir con especificaciones de calidad
adecuadas para asegurar que el rango de incertidumbre del resultado esté influenciado
únicamente por variaciones de origen biológico y no por variaciones del proceso analítico.


     10. CONOCERÁ EL SIGNIFICADO Y FORMA DE INFORMAR LOS RESULTADOS DE
           LABORATORIO: CUALITATIVO, CUANTITATIVO E INTERPRETATIVO.


Un análisis clínico o prueba de laboratorio se le llama comúnmente a la exploración
complementaria solicitada al laboratorio clínico por un médico para confirmar o descartar
un diagnóstico. Forma parte del proceso de atención a la salud que se apoya en el estudio
de distintas muestras biológicas mediante su análisis en laboratorio y que brinda un
resultado objetivo que puede ser tanto cuantitativo (un número, como en el caso de la
cifra de glucosa) o cualitativo (positivo o negativo).

El resultado de un análisis clínico se interpreta a la luz de valores de referencia
establecidos para cada población y requiere de una interpretación médica. No deben
confundirse ambos conceptos ya que hablamos de dos cosas diferentes, por un lado esta
la prueba diagnóstica realizada y su resultado, y por el otro, la interpretación que el
médico en cuestión dé a esos resultados. Lo más importante es que al realizar un análisis,
siempre se deben tener en cuenta ciertas características propias de una prueba
diagnóstica. Algunos de estos aspectos clave son: la especificidad, la sensibilidad, el valor
predictivo, la exactitud, precisión y validez (analítica, clínica y útil de dicha prueba), así
como la preparación y recogida de la muestra o el rango de referencia.




                                             108
Análisis según el tipo de información obtenida:

   1. Análisis cualitativos: Solamente pueden indicarnos si la muestra analizada tiene
      la característica buscada pero no en qué concentración está en la muestra. Estos
      suelen ser más baratos, más rápidos y más sencillos. Como ejemplos tenemos: test
      de embarazo y el test de droga (ambos determinan la presencia de hormona o de
      droga, pero no nos facilitan datos de concentración).
   2. Análisis cuantitativos: Dan resultados numéricos y cuantificables, son más caros,
      lentos y complejos que los anteriores. Un claro ejemplo de ello es el análisis de
      sangre, ya que nos proporcionará con cifras los resultados obtenidos para poder
      compararlo con valores de referencia.
   3. Análisis semicuantitativos: es un intermedio entre los dos anteriores dan alguna
      información sobre la concentración de la sustancia buscada. Las tiras reactivas
      pueden ser un ejemplo de ello.



Análisis según su complejidad:

   1. Análisis automatizados: Para llevarlo a cabo sólo necesitan depositar la muestra
      en una tira reactiva o en el apartado de inserción de muestra de una máquina. Los
      análisis de sangre son ejemplo de ello, además de las pruebas del azúcar donde
      puede practicárselo la propia persona.
   2. Análisis comunes: son aquellos realizados por profesionales pero de uso muy
      común y de cierta sencillez técnica. Ejemplo: autoanalizador, presión arterial,
      raspado, etc…
   3. Análisis especializados: Son complejos, pues el proceso de obtención de la
      muestra es más dificultoso o necesita un proceso muy riguroso. Ejemplo: prueba
      de paternidad, punción lumbar, un TAC, etc…


 11. DEFINIRÁ EL CONCEPTO DE VALOR NORMAL, VALORES DE REFERENCIA, ERROR DE
                     LABORATORIO Y CONTROL DE CALIDAD.

VALOR NORMAL
Los llamados "valores normales" que los laboratorios ponemos junto al dato analítico del
paciente, son datos obtenidos a través de estudios en población aparentemente sana,
tomando la media, y aceptando en general como rango, dos desviaciones standard. Este
proceso se hace por edades y sexos adaptados a edades, en general por décadas.

Valores de referencia
Los conceptos teóricos de los valores de referencia datan de finales de los años 60, debido
a la preocupación ocasionada por la variedad de informes de laboratorios clínicos usando
diversas nomenclaturas y procedimientos para expresar una misma variable (1).



                                           109
Actualmente, la determinación de los valores de referencia y sus intervalos, se utiliza para
comparar e interpretar los valores analíticos obtenidos en pacientes (valores observados),
mediante criterios unificados para su obtención y nomenclatura tal como lo recomienda el
NCCLS(2).
Los valores de referencia se definen como un grupo de valores de una cantidad
mensurable obtenidos ya sea de un grupo de individuos, o de un individuo, que se
encuentra en una situación de salud definida(3)
Se define intervalo de referencia como el intervalo 95 % central de la distribución de
valores de referencia. Otro tamaño o ubicación asimétrica del intervalo de referencia
puede ser más apropiado en casos particulares(4).
El término "intervalo o rango normal", resulta inapropiado e impreciso, debido a que el 5
% de los individuos estarán fuera de ese denominado "intervalo normal". Por otro lado,
nada impide el determinar intervalos de referencia para poblaciones de enfermos con una
patología específica, donde el término normal constituye un contrasentido. Además, la
palabra "normal" sugiere una distribución de probabilidad normal o gaussiana, cuando lo
más habitual en determinaciones analíticas es que los datos medidos no se ajustan a este
tipo de distribución de probabilidad(4).
Para establecer intervalos de referencia es fundamental emplear una muestra
representativa de la población a la que se desea cuantificar (resulta ideal el muestreo
aleatorio), y utilizar un tamaño adecuado, que permita efectuar las estimaciones con
precisión.
En el laboratorio clínico los intervalos de referencia, deben determinarse cuando cambian
los procedimientos analíticos o pre-analíticos, se implanta un nuevo procedimiento o
cuando se consideren que los existentes no son apropiados para la población de
referencia, tal como lo sugiere la Norma COVENIN ISO 15189(4).

ERROR DE LABORATORIO
Cualquier error cometido por el personal de un laboratorio clínico al realizar una prueba,
en la interpretación de los datos, o al comunicar o registrar los resultados.

Control de calidad
Aunque el tema de la calidad en el laboratorio clínico no ha dejado nunca de ser
importante, en el momento actual goza de un interés inusitado. Posiblemente se deba a
dos razones:
1) El progreso de la ciencia y de la tecnología han originado avances sorprendentes en el
campo de las ciencias de la salud.
2) Se hace necesaria una aceptación de las actividades de nuestros laboratorios para
establecer un clima de confianza y de reconocimiento mutuo.
La necesidad de una gestión de la calidad en los laboratorios clínicos se produce al compás
del avance de la tecnología y de la evolución del concepto de calidad en la sociedad. Por
otro lado, el concepto de calidad ha evolucionado como una importante meta del
laboratorio clínico que debe cubrir las necesidades de sus usuarios.




                                            110
Calidad, definida según ISO (Organización Internacional de Normalización) como: “Aptitud
de un producto, proceso, sistema, servicio o persona para satisfacer las necesidades
explícitas o implícitas de un cliente.”


 12. DEFINIRÁ EL CONCEPTO DE EXACTITUD, SENSIBILIDAD, PRECISIÓN, ESPECIFICIDAD.
                         DARÁ EJEMPLO DE CADA UNO.

EXACTITU Y PRECISION

La exactitud se refiere a que tan cercano está el valor calculado o medido del valor
verdadero. La precisión se refiere a qué tan cercano está un valor individual medido o
calculado respecto a los otros.

La inexactitud se define como un alejamiento sistemático de la verdad. La imprecisión,
sobre el otro lado, se refiere a la magnitud del esparcimiento de los valores.

Los métodos numéricos deben ser lo suficientemente exactos o sin sesgos para que
cumplan los requisitos de un problema particular de ingeniería.




SENSIBILIDAD

Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo enfermo, es decir, la
probabilidad de que para un sujeto enfermo se obtenga en la prueba un resultado
positivo. La sensibilidad es, por lo tanto, la capacidad del test para detectar la
enfermedad.

Cuando los datos obtenidos a partir de una muestra de pacientes se clasifican en una tabla
como la que se muestra en la Tabla 1, es fácil estimar a partir de ella la sensibilidad como
la proporción de pacientes enfermos que obtuvieron un resultado positivo en la prueba
diagnóstica. Es decir:




De ahí que también la sensibilidad se conozca como “fracción de verdaderos positivos
(FVP)”.

ESPECIFICIDAD




                                            111
Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo sano, es decir, la probabilidad
de que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo. En otras palabras, se puede
definir la especificidad como la capacidad para detectar a los sanos. A partir de una tabla
como la Tabla 1, la especificidad se estimaría como:




De ahí que también sea denominada “fracción de verdaderos negativos (FVN)”.

Ejemplo:

Como ejemplo de lo visto hasta ahora, consideremos los datos de un estudio en el que se
incluyó a 2.641 pacientes con sospecha de cáncer prostático que acudieron a una consulta
de Urología durante un periodo de tiempo determinado. Durante su exploración, se
recogió el resultado del tacto rectal realizado a cada uno de estos pacientes, según fuese
éste normal o anormal, y se contrastó con el posterior diagnóstico obtenido de la biopsia
prostática. Los datos del estudio y los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 2. Se
encontraron en total 1.121 casos de cáncer, lo cual representa un 42,45% del total de
sujetos estudiados. La sensibilidad del tacto rectal para detectar cáncer fue de 56,56%
(634/1121) y la especificidad de 82,3% (1251/1520). Así, el tacto fue anormal en un
56,56% de los casos de cáncer prostático y normal en un 82,3% de los casos que
presentaron finalmente otras patologías. Esto significa que un 100-56,56=43,44% de los
pacientes que efectivamente tenían cáncer presentaban tactos normales. Claramente ello
indica la necesidad de utilizar otros marcadores más sensibles, como el PSA o sus
derivados, para poder establecer el diagnóstico de forma más precisa.

Resulta obvio que lo ideal sería trabajar con pruebas diagnósticas de alta sensibilidad y
especificidad, pero esto no siempre es posible. En general, las pruebas de screening deben
ser de alta sensibilidad para poder captar a todos los enfermos. Una prueba muy sensible
será especialmente adecuada en aquellos casos en los que el no diagnosticar la
enfermedad puede resultar fatal para los enfermos, como ocurre con enfermedades
peligrosas pero tratables, como los linfomas o la tuberculosis, o en enfermedades en las
que un falso positivo no produzca serios trastornos psicológicos o económicos para el
paciente (por ejemplo, la realización de mamografía en el cáncer de mama).

Por otra parte, la especificidad se refiere, como se señaló previamente, a la probabilidad
de que un sujeto sano sea clasificado adecuadamente. En general, las pruebas
confirmatorias del diagnóstico deben ser de alta especificidad, para evitar falsos positivos.
Los tests de alta especificidad son necesarios en enfermedades graves pero sin
tratamiento disponible que las haga curables, cuando exista gran interés por conocer la



                                            112
ausencia de enfermedad o cuando diagnosticar a un paciente de un mal que realmente no
padece pueda acarrear graves consecuencias, ya sean físicas, psicológicas o económicas
(por ejemplo, en el caso del SIDA).



13. CONOCERÁ EL VALOR DIAGNÓSTICO DE LOS EXÁMENES DE LABORATORIO:
INDICATIVOS, PRESUNTIVOS Y DIAGNÓSTICO. DARÁ EJEMPLOS.

Presuntivos

Este diagnóstico se basa en determinados síntomas subjetivos, algunos signos observados
en un examen físico cuidadoso y en procedimientos de laboratorio; que pueden ser
positivos, probables o de evidencia presuntiva.

Diagnosticas

El proceso diagnóstico se realiza sobre la base de la historia clínica y el examen físico, las
pruebas son secundarias.

      Análisis de sangre

El análisis de sangre permite conocer el grupo sanguíneo de una persona, saber si una
mujer está embarazada y el momento de su embarazo; así como descartar y/o
diagnosticar múltiples patologías de tipo sistémico...




      Análisis de orina

El análisis de la orina es una de las herramientas más básicas, útiles y comúnmente
utilizadas en el campo de la Medicina, ya que aporta una muy valiosa información sobre el
estado de salud de la persona.




                                             113
      Análisis de las heces

Permite diagnosticar la presencia de infecciones en el tracto intestinal causantes de
síndromes diarreicos o infecciones por parásitos, detectar la presencia de sangre propia
de procesos inflamatorios, infecciosos o tumorales del tracto digestivo o sospechar la
presencia de síndromes de malabsorción intestinal ....




      Análisis del esputo

Una vez recogida la muestra de esputo el paciente deberá entregar el envase cerrado lo
antes posible y en plazo máximo de 24 horas en el centro




      Seminograma

El análisis cuantitativo del semen permite conocer el volumen espermático o cantidad de
esperma eyaculado así como la concentración o número de espermatozoides




      Proteinograma

Técnica de laboratorio que permite la separación de las proteínas en función de su
desplazamiento sobre un soporte sólido cuando son sometidas a un campo eléctrico.




                                          114
      Prueba de sobrecarga oral de glucosa

La prueba de sobrecarga oral de la glucosa es una sencilla exploración muy útil para el
diagnóstico de diabetes gestacional.




      Gasometría arterial

La gasometría es la exploración que permite cuantificar el oxígeno y dióxido de carbono
en sangre arterial.



                                      Bibliografía



   1) Manual de Patología General, José Luis Pérez Arellano, Cap. 1, Sexta Edición, Pág. 3
   2) Robbins y Cotran, Patología estructural y funcional, OCTAVA EDICION, Cap. 1
       Págs.4-5
   3) www.cucs.udg.mx

   4) http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_01.htm

   5) http://es.wikipedia.org/wiki/Hematolog%C3%ADa
   6) www.encarta.com
   7) www.ciencia.net
   8) www.definicionesdemedicina.com

   9) http://www4.ujaen.es/~anruiz/QuimicaClinica.htm

   10) www.portalesmedicos.com

   11) www.ciencia.glosario.net

   12) www.sociedaddecitologia.org.ar

   13) http://www.uam.es/departamentos/medicina/patologia/grocott.htm



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14) http://www.iqb.es/diccio/t/tincion.htm
15) www.diccionario.babylon.com
16) www.enciclopediasalud.com/definiciones/biopsia/
17) www.reynoldsoralfacial.com/oral-pathology/scalpel-biopsy.html
18) www.breastcancer.org/dictionary/i/incisionalbiopsy_t.jsp
19) www.knowcancer.com/cancer-tests-diagnosis/biopsy/
20) www.post-mortem.com/index.php?...autopsias
21) www.patologia.es/volumen36/vol36-num3/36-3n04.htm
22) www.poderjudicial.gob.hn/.../Leyes/...personales.unican.es/bueltal/hospital/auto
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23) www.ila.org.pe/.../reg.../REGLAMENTO%20DE%20CADAVERES.doc
24) www.seap.es/informacion/catalogo.htm
25) www.humv.es/index.php?option=com_content&task=view&id=64
26) www.saludalia.com/Saludalia/web_saludalia/tu_salud/doc/mujer/doc/citologia
27) www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003911.htm
28) www.conganat.org/10congreso/trabajo.asp?id_trabajo=1771&tipo=3
29) www.urologiaavanzada.com/cito.htm
30) www.bvsops.org.uy/pdf/laboratorio.pdf
31) www.bdigital.unal.edu.co/635/6/9789587194012.06.pdf
32) www.inmunologiaenlinea.es/index.php?view=article&catid=49%3Ametodos&id=1
   07%3Acitometria-de-flujo&format=pdf&option=com_content&Itemid=126
33) www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/FACS.pdf
34) www.imbiomed.com.mx/1/1/articulos.php?method=showDetail&id_articulo=8263
   &id_seccion=891&id_ejemplar=858&id_revista=2
35) www.monografias.com/trabajos81/interaccion-bioquimico-medica-laboratorio-
   terapia-intensiva/interaccion-bioquimico-medica-laboratorio-terapia-
   intensiva.shtml
36) www.redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/576/57613001004.pdf
37) http://www.analisisclinico.es/elanalisis




                                         116
38) www.laboratoriodediagnosticoclinico.com
39) www.mitecnologico.com/Main/ExactitudYPrecision
40) www.arthritis.org/espanol/pruebas-laboratorio.php
41) www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0798-04692006000100006&script=sci_arttext




                                     117

				
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